リモートハイスループット表現型解析のためのマウスの目の摘出
Summary
解剖手法は、ハイスループットスクリーニングで表現型解析を実行するための組織固定のマウス眼球摘出を示しています。
Abstract
マウスの眼は人間の眼疾患のトランスレーショナル研究のための重要な遺伝的モデルです。このような黄斑変性、光受容体の変性、白内障、緑内障、網膜芽細胞腫、および糖尿病性網膜症などのヒトでのまばゆいばかりの病気、トランスジェニックマウスで再現されています1月5日ほとんどのトランスジェニックマウスおよびノックアウトマウスは非眼疾患を研究する研究室で生成されましたが、器官系の間の遺伝的保全が同じ遺伝子の多くはまた、眼の発達と疾患における役割を果たしている可能性を示唆している。したがって、これらのマウスは、眼の中に新たな遺伝子型と表現型の相関を発見するための重要なリソースを表します。これらのマウスは世界中に散らばっているので、それは、獲得、維持、効率的で費用対効果の高い方法で表現型、それらをすることは困難である。従って、最も高スループットの眼科表現型画面は生きたマウスで目を調べるために、眼科の専門知識を現場で必要とするいくつかの場所に制限されています6-9は、当研究室が開発した代替アプローチは、トランスジェニックマウスの目の大規模または小規模な調査で使用することができるリモート組織獲得するための方法である。ビデオベースの手術技能移転、組織の固定、出荷のために標準化された手順は、どの研究室では変異動物から全体の目を収集し、分子と形態学的表現型解析のためにそれらを送信することができます。このビデオの記事では、我々は、リモート表現型解析に固定されていないと血流の両方の固定マウスの目を摘出すると、転送する手法を提案する。
Protocol
Discussion
ほとんどのトランスジェニックマウスは、目を検査しません研究室に存在します。私たちのビデオ技術は目で少し経験を持つ研究室から組織の取り込みを最適化するために、遠隔手術技能移転のためのシンプルな、標準化された方法を示しています。この映像技術は、意味のある比較の表現型および分子生物学的研究を防止する非標準化組織採取と固定方法に起因専門サイトの限られた数の?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
失明を防ぐための研究、サンガー研究所、ウェルカムトラストゲノムキャンパスでとラミロ·ラミレス·ソリス、ジャッキーホワイト、ジャンヌEstabel; Bartly J·モンディーノMDは、ジュール·スタイン眼研究所、カリフォルニア大学ロサンゼルス校（UCLA）のディレクター。この研究は、眼科とビジュアルリサーチにおける動物の使用に関するARVOステートメントに準拠しています。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Curved Dressing Forcep | Storz Ophthalmics | E1408 | |
| Mahajan Sharptip dressing forcep | Storz Ophthalmics | E1406 (REF SP7-64520) | |
| Curved Westcott Scissors | Storz Ophthalmics | E3321 WH | |
| 15° BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
| 0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
| 0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
| 30-gauge needle | Becton-Dickinson | 305128 | |
| Biohazard Mailer | Fisher | 03-523-4 | |
| Parafilm | Fisher | 13-374-10 | |
| Glass scintillation vials | Wheaton | 4500413033 | |
| PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
| 16% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 2.5% Paraformaldehyde/ 2.5% Glutaraldehyde in 0.1M sodium phosphate buffer | Electron Microscopy Sciences | 15700 & 16300 | Mixed in laboratory |
| 50% Glutaraldehyde | Electron Microscopy Sciences | 16300 | |
| 0.25% Formvar | Electron Microscopy Sciences | 15810 | |
| Copper Slot Grid | Electron Microscopy Sciences | M2010-CR | |
| 4% Osmium Tetroxide | Electron Microscopy Sciences | 19140 | |
| Anti-SOD3 antibody | Abcam | Ab21974 | |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11070 | |
| Spurr’s embedding resin | Electron Microscopy Sciences | 14300 |
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