浇注和运行的一种蛋白质凝胶重用商业磁带
Summary
我们的协议演示如何倒在时间的多种蛋白质凝胶回收Invitrogen公司Nupage NOVEX微小胶体录音带，并在家装商店购买廉价的材料。这种经济和精简的方法，包括了几个星期的方式储存在4°C凝胶。通过重新使用塑料胶盒从市售凝胶，实验室运行频繁的蛋白凝胶可显着节省成本，并帮助环境。
Abstract
使用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS – PAGE）分析蛋白质的评价是一种常见的技术，生物化学和分子生物学的研究人员1-4。执行每日蛋白质分析实验室，市售的聚丙烯酰胺凝胶（$ 10/gel）的成本可能是相当一段时间。为了降低成本，一些研究人员自己编写的聚丙烯酰胺凝胶。这些凝胶浇注的传统方法通常利用专门的设备和玻璃的凝胶板，可以是昂贵的，排除许多凝胶浇注和存储以供将来使用。此外，在清洗或浇注凝胶玻璃板处理可能会导致意外破损，创造一个安全隐患，这可能妨碍其使用在本科实验班。我们的协议演示如何同时倒入多个蛋白凝胶回收Invitrogen公司Nupage NOVEX微小胶体录音带，和廉价的马terials家装店购买。这种经济和精简的方法，包括了几个星期的方式储存在4°C凝胶。通过重新使用塑料胶盒从市售凝胶，实验室运行频繁的蛋白凝胶可显着节省成本，并帮助环境。此外，塑料胶录音带是极耐破损，这使得他们的本科生做实验教室的理想。
Protocol
Discussion
蛋白质凝胶电泳是大多数分子生物学实验室不可或缺的方法。市售minigels提供了方便的较高水平，但可能是昂贵的。在这里，我们展示如何重新使用从的市售minigels的流行品牌的微小胶体录音带。此方法保留了方便，但有一个现成的凝胶源的市售minigels成本的一小部分。在此过程中的一个关键步骤是运用正确的金额环氧树脂完全密封录音带之前加入unpolymerized丙烯酰胺，以防止泄漏。只使用…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者感谢用友科学为生命奖霍华德·休斯医学研究所的啊
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
