Verter y ejecución de un gel de proteínas mediante la reutilización de casetes comerciales
Summary
Nuestro protocolo se muestra cómo se vierta geles múltiples proteínas a la vez de reciclaje de Invitrogen casetes NuPAGE Novex minigel, y materiales baratos comprados en una tienda de mejoras para el hogar. Este método económico y eficiente incluye una forma de almacenar los geles a 4 ° C durante unas pocas semanas. Al reutilizar los cartuchos de gel de plástico de los geles disponibles en el mercado, los laboratorios que se ejecutan frecuentes geles de proteínas puede ahorrar costos significativos y ayudar al medio ambiente.
Abstract
La evaluación de las proteínas utilizando poliacrilamida dodecilsulfato de sodio electroforesis en gel (SDS-PAGE) análisis es una técnica común utilizada por los investigadores bioquímica y biología molecular 1-4. Para los laboratorios que realizan análisis diarios de proteínas, el costo de geles de poliacrilamida comercialmente disponibles (~ $ 10/gel) puede ser considerable en el tiempo. Para mitigar este costo, algunos investigadores preparan sus propios geles de poliacrilamida. Los métodos tradicionales de verter estos geles suelen utilizar equipo especializado y placas de vidrio de gel que puede ser costoso y evitar verter muchos geles y su almacenamiento para uso futuro. Por otra parte, la manipulación de placas de vidrio durante la limpieza o el gel vertiendo puede resultar en la rotura accidental de crear un peligro de seguridad, lo que puede impedir su uso en las clases de laboratorio de grado. Nuestro protocolo se muestra cómo se vierta geles múltiples proteínas simultáneamente por reciclaje de cartuchos de Invitrogen NuPAGE Novex minigel, y barato materiales comprado en una tienda de mejoras para el hogar. Este método económico y eficiente incluye una forma de almacenar los geles a 4 ° C durante unas pocas semanas. Al reutilizar los cartuchos de gel de plástico de los geles disponibles en el mercado, los laboratorios que se ejecutan frecuentes geles de proteínas puede ahorrar costos significativos y ayudar al medio ambiente. Además, las cintas de plástico de gel son extremadamente resistentes a la rotura, lo que los hace ideales para aulas de laboratorio de grado.
Protocol
Discussion
La electroforesis de proteínas en gel es un método indispensable para los laboratorios de biología molecular mayor. Minigeles comercialmente disponibles proporcionan un alto nivel de comodidad, pero puede ser costoso. Aquí te mostramos cómo volver a utilizar los casetes MiniGel de una popular marca de minigeles disponibles en el mercado. Este método conserva la conveniencia de tener una fuente ya preparada de geles, pero a una fracción del coste de minigeles comercialmente disponibles. Una etapa clave en este pro…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores agradecen al Instituto Médico Howard Hughes de una Ciencia de UF para el premio de la vida a AH
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
