Gieten en runnen van een eiwitgel door hergebruik van Commercial Cassettes
Summary
Ons protocol legt uit hoe meerdere eiwitten gels gieten in een tijd van recycling Invitrogen Nupage Novex MiniGel cassettes, en goedkope materialen die zijn aangeschaft bij een bouwmarkt te vinden. Deze voordelige gestroomlijnd werkwijze omvat een manier om de gels bewaren bij 4 ° C gedurende enkele weken. Door hergebruik van kunststof gel cassettes uit de handel verkrijgbare gels, laboratoria dat frequent eiwit gels draaien kan besparen aanzienlijke kosten en help het milieu.
Abstract
De evaluatie van eiwitten met natriumdodecylsulfaat-polyacrylamide-gelelektroforese (SDS-PAGE) analyse een techniek die door biochemie en moleculaire biologie onderzoekers 1-4. Voor laboratoria die de dagelijkse analyses van eiwitten uit te voeren, kunnen de kosten van in de handel verkrijgbare polyacrylamidegels (~ $ 10/gel) aanzienlijk zijn in de tijd. Om deze kosten te beperken, sommige onderzoekers bereiden hun eigen polyacrylamide gels. Traditionele methoden van het gieten van deze gels meestal gebruik maken van gespecialiseerde apparatuur en glas gel platen die kunnen duur zijn en weg te gieten veel gels en op te slaan voor toekomstig gebruik. Bovendien kan de behandeling van glazen platen bij het schoonmaken of gel gieten resulteren in een onvoorziene breuk het creëren van een gevaar voor de veiligheid, waarin het gebruik ervan kan zich verzetten tegen in undergraduate laboratorium klassen. Ons protocol legt uit hoe meerdere eiwitten tegelijk gels giet door recycling Invitrogen Nupage Novex MiniGel cassettes, en goedkoop materialen gekocht bij een bouwmarkt te vinden. Deze voordelige gestroomlijnd werkwijze omvat een manier om de gels bewaren bij 4 ° C gedurende enkele weken. Door hergebruik van kunststof gel cassettes uit de handel verkrijgbare gels, laboratoria dat frequent eiwit gels draaien kan besparen aanzienlijke kosten en help het milieu. Daarnaast plastic gel cassettes zijn uitermate bestand tegen breuk, waardoor ze ideaal zijn voor undergraduate laboratorium klaslokalen.
Protocol
Discussion
Protein gel electroforese een onmisbaar methode voor de meeste laboratoria moleculaire biologie. In de handel verkrijgbare minigels bieden een hoge mate van gemak, maar kan kostbaar zijn. Hier laten we zien hoe de MiniGel cassettes van een populair merk in de handel verkrijgbare minigels opnieuw te gebruiken. Deze methode houdt het gemak van een kant en klaar bron van gels, maar een fractie van de kosten van commercieel beschikbare minigels. Een belangrijke stap in de procedure wordt de toepassing van de juiste hoeveelh…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De auteurs danken de Howard Hughes Medical Institute voor een UF Science for Life Award voor AH
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
