후각 수용체 뉴런 (ORNs)는 수용체에 첫 소절에 후각 망울에서 두 번째 주문 뉴런에 전달 아르 액션 잠재력을 실행하는 현재의 냄새 신호를 변환합니다. 여기 동시에 odorant 유발 수용체 마우스 ORNs의 현재와 실천 가능성을 기록 할 수있는 흡입 피펫 기술을 설명합니다.
동물은 비강에있는 chemosensory 시스템을 통해 주위의 향기가있는 환경을 드셔보세요. Chemosensory 신호는 식품 선택, 육식 동물, conspecific 및 동료 인식과 다른 사회적 관련 신호로 복잡한 동작에 영향을 미칩니다. 후각 수용체 뉴런은 (ORNs) 후각 상피에 포함 된 비강의 등 부분에 위치하고 있습니다. 이러한 양극성 뉴런은 (그림을 참조하십시오. 1, 원래 일반 생리학의 저널에 출판 Reisert & 조 1) 후각 망울에 축삭을 보내 후각을 커버 점액에있는 솜털의 방출에서 상피 국경에 하나의 dendrite를 확장 상피. 채널 (그림 1) – 속눈썹은 궁극적으로 ciliary 전달 채널, 순환 염기 – 게이트 (CNG) 채널 및 칼슘 2 + – 활성화의 망할 CIA를 통해 현재의 유입을 흥분성의로 연결 신호 전달 기기가 포함되어 있습니다. 다음의 depolarization는 전지 본체 2-4에서 행동 가능성 생성을 트리거합니다.
이 비디오에서 우리는 ORNs에서 odorant 유발 반응을 기록 할 수있는 '흡입 피펫 기술 "의 사용을 설명합니다. 이 방법은 원래로드 photoreceptors 5에서 기록하기 위해 개발되었으며,이 방법의 변형은 마우스 콘 photoreceptors 6 일부터 기록하도록 수정 jove.com에서 찾을 수 있습니다. 흡입 피펫 기술은 나중에도 ORNs 7,8에서 기록하도록 구성되었습니다. 간단히, 후각 상피 및 세포 분리의 분리에 따라, ORN의 전체 전지 본체는 기록 피펫의 끝으로 빨려 있습니다. dendrite과 속눈썹은 목욕 솔루션에 노출 예를 들어 odorant 또는 약리 차단 응용 프로그램을 활성화하는 솔루션 변경에 따라서 액세스 할 수 남아 있습니다. 이 구성에서, 세포 내 환경에 더 접근 얻은 없습니다 (NO 전체 셀 전압 클램프)와 세포 내 전압이 다를 무료로 남아있다. 이 모든속눈썹과 전지 본체 9 발사 빠른 작업 잠재력에 유래 속도가 느린 수용체 전류의 동시 녹음을 ows. 이 두 신호 사이의 속도론의 차이는 그들에게 서로 다른 필터 설정을 사용하여 분리 할 수 있습니다. 이 기술은 모든 야생 유형 또는 녹아웃 마우스에서 사용할 수 있습니다 또는도 ORNs의 특정 하위 집합에 라벨을 GFP를 표현 ORNs에서 선택적으로 기록하기 위해, 예를 들어 주어진 odorant 수용체 또는 이온 채널을 표현.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 NIH DC009613, 인간 프론티어 과학 프로그램과 몰리 케어 휄로 십 (JR까지)에 의해 지원되었다.
Name of the material | Type | Company | Catalogue / Model number |
Comments |
Air table | equipment | Newport | ||
Air Pump | equipment | Newport | ACGP | |
Pipette Puller | equipment | Sutter | P-97 | |
Borosilicate glass | equipment | WPI | 1B150-4 | |
Nikon Eclipse Inverted microscope | equipment | Nikon | TE2000U | Equipped with Hg lamp, GFP filter and objectives 20X and 5X at least |
Amplifier PC-501A | equipment | Warner | 64-0008 | Headstage 1 GΩ |
Diamond knife | Equipment | Custom-made | ||
Digitizer Mikro1401 A/D | equipment | Cambridge Electronic Design | ||
Filter unit 3382 | equipment | Krohn Hite corporation | ||
Signal | software | Cambridge Electronic Design | ||
Molded Ag/AgCl Pellet | equipment | WPI | 64-1297 | |
Pipette holder | equipment | Warner | 64-0997 | Custom modified to fit headstage |
Recording chamber | Equipment | Custom-made | ||
Micromanipulator MP85-1028 |
equipment | Sutter Instrument | Micromanipulator MP85-1028 |
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Mineral oil | Solution | Sigma | 330779-1L | |
Oscilloscope TDS 1001 | equipment | Tektronix | ||
Three-barreled square glass tube | Equipment | Warner | 64-0119 | 0.6 mm ID , 5 cm long |
Valve | equipment | The Lee Company | ||
Valvelink 8.2 | equipment | Automate Scientific | ||
SF-77B Perfusion fast step | equipment | Warner |