Een murine Closed-borst Model van myocardiale ischemie en reperfusie
Summary
Chirurgisch trauma veroorzaakt een ontstekingsreactie. Cytokines en endogene liganden zijn bekend voor het moduleren van een myocard infarct grootte na ischemie en reperfusie. We presenteren een aangepaste gesloten kist model van muizen ischemie en reperfusie met behulp van gewichten opknoping om de effecten van thoracotomie te minimaliseren.
Abstract
Chirurgisch trauma door thoracotomie in de open-borst-modellen van coronaire ligatie induceert een immuunrespons die verschillende mechanismen betrokken zijn bij ischemie en reperfusie wijzigt. Immuunrespons omvat cytokine-expressie en het vrijkomen of secretie van endogene liganden van aangeboren immuunsysteem receptoren. Activering van het aangeboren immuunsysteem kan in potentie moduleren infarctgrootte. We hebben gewijzigd van een bestaande muis-closed-kist model met behulp van opknoping gewichten die nuttig zouden kunnen zijn voor het bestuderen van myocardiale pre-en postconditioning en de rol van aangeboren immuniteit in myocardiale ischemie en reperfusie. Dit model maakt dieren van chirurgisch trauma te herstellen vóór de start van myocardischemie.
Vluchtige anesthetica zijn intensief bestudeerd en hun voorbehandeling effect voor de ischemische hart is bekend. Echter, dit beschermende effect belet het gebruik ervan in de open borst modellen van coronaire ligatie. Zo zou een voordeel van het gebruik van the goed controleerbaar vluchtige anesthetica voor instrumentatie in een chronische gesloten kist model, omdat hun preconditionering effect duurt tot 72 uur. Chronische hart-en vaatziekten met intermitterende ischemie en meerdere hit-modellen zijn ook andere mogelijke toepassingen van dit model.
Voor de chronische gesloten kist model, geïntubeerde en beademde muizen ondergaan een zijdelingse stompe thoracotomie via de 4e intercostale ruimte. Na identificatie van de left anterior descending een ligatuur wordt doorgegeven onder het schip en beide uiteinden zijn hechtdraad geregen door middel van een occluder. Vervolgens worden beide uiteinden hechtmateriaal doorheen de borstwand, geknoopt een lus en meer in het onderhuidse weefsel. Na sluiting op de borst en herstel gedurende 5 dagen, muizen zijn weer onder narcose gebracht, wordt borsthuid heropend en opknoping gewichten worden aangesloten op de lus onder ECG-controle.
Aan het einde van het ischemie / reperfusie protocol, hart worden gekleurd met TTC voor infarctgrootte van de beoordeling of ondergaan perfusie fixatie op morfometrische studies laten in aanvulling op histologie en immunohistochemie.
Protocol
Discussion
We hebben een gewijzigd muis closed-borst-model door de toegang tot het hart door middel van een linker laterale intercostale thoracotomie en het leiden van de LAD hechtingen om de kist in de linker midclaviculaire lijn. Het verlaten van de benige ribbenkast intact zal het minimaliseren van trauma's, behoefte aan pijnstillers, postoperatieve wondinfectie en dus gemakkelijker herstel. Door het behoud van de linker interne zoogdier slagader is niet nodig elektrocauterisatie. We verlaten de hechting lus in het onderhui…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wij danken Daniël Duerr voor zijn advies over perfusie-fixatie techniek.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Vapor | Drägerwerk AG | Isoflo |
| Microscope | Leica | M80 |
| Light source | Schott | KL 1500 LCD |
| Homeothermic Blanket Control Unit | Harvard Apparatus | |
| MiniVent Type 845 | Hugo Sachs Elektronik | |
| 8-0 Prolene | Ethicon | BV130-5 6.5mm 3/8c |
| 6-0 Prolene | Ethicon | BV-1 9.3 mm 3/8c |
| Kalt suture needle size 3 | FST | 12050-03 |
| Triphenyltetrazolium | Sigma Aldrich | 93145 |
| Phthalo blue | Heucotech LTD | |
| PowerLab | ADInstruments |
References
- Lim, S. Y., Davidson, S. M., Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. Preconditioning and postconditioning: the essential role of the mitochondrial permeability transition pore. Cardiovasc. Res. 75, 530-535 (2007).
- Eckle, T., Koeppen, M., Eltzschig, H. Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice. J. Vis. Exp. (50), e2526 (2011).
- Michael, L. H. Myocardial infarction and remodeling in mice: effect of reperfusion. Am. J. Physiol. 277, H660-H668 (1999).
- Nossuli, T. O. A chronic mouse model of myocardial ischemia-reperfusion: essential in cytokine studies 52. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 278, H1049-H1055 (2000).
- Irwin, M. W. Tissue expression and immunolocalization of tumor necrosis factor-alpha in postinfarction dysfunctional myocardium 846. Circulation. 99, 1492-1498 (1999).
- Michael, L. H. Creatine kinase and phosphorylase in cardiac lymph: coronary occlusion and reperfusion. Am. J. Physiol. 248, 350-359 (1985).
- Tonkovic-Capin, M. Delayed cardioprotection by isoflurane: role of K(ATP) channels 765. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 283, H61-H68 (2002).
- Tsutsumi, Y. M. Role of caveolin-3 and glucose transporter-4 in isoflurane-induced delayed cardiac protection. Anesthesiology. 112, 1136-1145 (2010).
- Benedict, P. E., Benedict, M. B., Su, T. P., Bolling, S. F. Opiate drugs and delta-receptor-mediated myocardial protection. Circulation. 100, II357-II360 (1999).
- Ren, X., Wang, Y., Jones, W. K. TNF-alpha is required for late ischemic preconditioning but not for remote preconditioning of trauma. J. Surg. Res. 121, 120-129 (2004).
- Andrassy, M. High-mobility group box-1 in ischemia-reperfusion injury of the heart. Circulation. 117, 3216-3226 (2008).
- Kim, S. C. Extracellular heat shock protein 60, cardiac myocytes, and apoptosis. Circ. Res. 105, 1186-1195 (2009).
- Lin, L. HSP60 in heart failure: abnormal distribution and role in cardiac myocyte apoptosis. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 293, 2238-2247 (2007).
