नसों, इलाकों, और फ्लोरोसेंट रंजक के साथ रीढ़ की हड्डी में जड़ें के प्रतिगामी लोड हो रहा है
Summary
हम एक सरल और कम लागत न्यूरॉन्स या किसी भी neuronal एक polyethylene चूषण विंदुक का उपयोग पथ में फ्लोरोसेंट और कैल्शियम के प्रति संवेदनशील रंगों के उच्च एकाग्रता को शुरू करने के लिए तकनीक का वर्णन करता है.
Abstract
न्यूरॉन्स की प्रतिगामी लेबलिंग एक मानक शारीरिक विधि 1,2 कि 3-6 न्यूरॉन्स में कैल्शियम और वोल्टेज के प्रति संवेदनशील रंगों लोड इस्तेमाल किया गया है. आम तौर पर, रंग ठोस क्रिस्टल के रूप में या स्थानीय दबाव गिलास pipettes का उपयोग इंजेक्शन द्वारा लागू कर रहे हैं. हालांकि, इस डाई और कम लेबलिंग तीव्रता के कमजोर पड़ने में परिणाम है, खासकर जब कई घंटे डाई प्रसार के लिए आवश्यक हैं कर सकते हैं. यहाँ हम एक polyethylene चूषण डाई समाधान के साथ भरा विंदुक का उपयोग न्यूरॉन्स में फ्लोरोसेंट और आयन के प्रति संवेदनशील रंगों को शुरू करने के लिए एक सरल और कम लागत वाली तकनीक का प्रदर्शन. इस विधि लोड हो रहा है प्रक्रिया के दौरान axons के साथ संपर्क में डाई की एक उच्च एकाग्रता बनाए रखने के लिए एक विश्वसनीय तरीका प्रदान करता है.
Protocol
प्रतिदीप्त dextrans संरचनात्मक उपकरण के रूप में और इमेजिंग neuronal गतिविधि 1-4 के लिए इस्तेमाल किया गया है. एट अल फील्ड्स,. (2009) 4 axonal इलाकों के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप में रीढ़ की हड्डी पर एक ध्यान के साथ ?…
Discussion
<p class="jove_content"हम यहाँ न्यूरॉन्स, नसों और रीढ़ की हड्डी इलाकों में रंगों को शुरू करने के लिए एक सरल और लागत प्रभावी प्रोटोकॉल का वर्णन. इस विधि लोड हो रहा है प्रक्रिया की अवधि के लिए एक अत्यधिक ध्यान केंद्रित डाई समाधा?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
<p class="jove_content"> यह काम मस्तिष्क संबंधी विकार के राष्ट्रीय संस्थान और स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान में स्ट्रोक के अंदर का कार्यक्रम द्वारा समर्थित किया गया था. हम भी विधि और चित्रा 3 में डेटा के लिए अपने पहले के योगदान के लिए डॉ. जॉर्ज Mentis धन्यवाद देना चाहूंगा.</p
Materials
| Material Name | Company | Catalogue number | Comments | |
| Tubing | PE90 (IDxOD:0.034″x0.050″; Wall Thikness:0.008″) | Clay Adams Brand Intermedic | 427421 | For Type I & Type II pipettes |
| NSF-51(IDxOD:1/16×1/8; Wall Thikness:1/32) | PharMed BPT, Cole-Parmer | AY242002 | For Flexible tubing | |
| Syringe | 1ml insulin Syringe U-100 | Becton Dickenson | 329650 | |
| Needle | 19G x1-1/2″ Metal Hub Needle | MONOJECT | 200136 | Connecting Type II pipette to syringe |
| Alcohol Lamp | ||||
| Stopcock | Three-way Stopcock with Male Luer Slip Adapter | Baxter Healthcare Corp. | 2C6241 | Use with syringe |
| Holder | H-1 electrode holder | Narishige | H-1/12 | |
| Magnet stand | Narishige | GJ-8 | ||
| Micromanipulator | Narishige | M-3333 | ||
| Tweezers | S&T DUMONT Swiss 00632-11 | DUMONT | JF-5 TC | |
*Those are suggested materials. Can be replaced with any compatible products
References
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Cite This Article
Blivis, D., O’Donovan, M. J. Retrograde Loading of Nerves, Tracts, and Spinal Roots with Fluorescent Dyes. J. Vis. Exp. (62), e4008, doi:10.3791/4008 (2012).