신경, 책자, 그리고 형광 염료와 척수 뿌리 역행로드
Summary
우리는 뉴런이나 폴리에틸렌 흡입 피펫을 사용하여 모든의 연결을 요로에 형광등과 칼슘에 민감한 염료의 높은 농도를 도입을위한 간단하고 저렴한 비용으로 기술을 설명합니다.
Abstract
뉴런의 역행 라벨은 또한 뉴런 3-6 칼슘 및 전압에 민감한 염료를로드하는 데 사용되었습니다 표준 해부 방법 1,2입니다. 일반적으로 염료는 고체 크리스털이나 유리 pipettes를 사용하여 로컬 압력 주입에 의해 적용됩니다. 그러나 이것은 몇 시간이 염료 확산이 필요합니다 특히 때 염료 및 감소 라벨 강도의 희석이 발생할 수 있습니다. 여기 염료 용액으로 가득 폴리에틸렌 흡입 피펫을 사용하여 뉴런으로 형광등 및 이온에 민감한 염료를 도입을위한 간단하고 저비 용의 기술을 보여줍니다. 이 방법은 로딩 과정 전반에 걸쳐 axons과 접촉 염료의 높은 농도를 유지하는 안정적인 방법을 제공합니다.
Protocol
형광등 dextrans은 해부 학적 도구로 및 이미징의 연결 활동 1-4 위해 사용되었습니다. 필드 외., 2009 년 4 모델 시스템으로 척수에 초점 axonal 책자로 이온 및 전압에 민감한 염료를 적용하기위한 프로토콜을 발표했다. 여기에서-체외 optophysiological 및 형태학의 연구를 위해 컷 복부 뿌리, 지느러미 뿌리 또는 척수의 넓이의 연결로 형광 및 / 또는 이온에 민감한 염료를 적?…
Discussion
<p class="jove_content"> 여기 뉴런, 신경 및 척수의 책자로 염료를 도입을위한 간단하고 비용 효율적인 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 로딩 과정의 기간 동안 고도의 농축 염료 용액에 확인된 해부 학적 경로를 노출하는 것입니다. 약간의 배경과 대상 사이트의 역행 라벨이 결과 microinjections, 욕조 응용 프로그램과 electroporation 기술에 비해. 그러나 방법은 axons의 넓이는 격리 수 신경계의 사이트로 제한됩니다. 염료…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
<p class="jove_content">이 작품은 국립 신경 장애의 연구소와 국립 보건원에서 뇌졸중의 교내 프로그램에 의해 지원되었다. 우리는 또한 메서드와 그림 3의 데이터에 대한 그의 이전 공헌 박사 조지 Mentis 감사드립니다.</p
Materials
| Material Name | Company | Catalogue number | Comments | |
| Tubing | PE90 (IDxOD:0.034″x0.050″; Wall Thikness:0.008″) | Clay Adams Brand Intermedic | 427421 | For Type I & Type II pipettes |
| NSF-51(IDxOD:1/16×1/8; Wall Thikness:1/32) | PharMed BPT, Cole-Parmer | AY242002 | For Flexible tubing | |
| Syringe | 1ml insulin Syringe U-100 | Becton Dickenson | 329650 | |
| Needle | 19G x1-1/2″ Metal Hub Needle | MONOJECT | 200136 | Connecting Type II pipette to syringe |
| Alcohol Lamp | ||||
| Stopcock | Three-way Stopcock with Male Luer Slip Adapter | Baxter Healthcare Corp. | 2C6241 | Use with syringe |
| Holder | H-1 electrode holder | Narishige | H-1/12 | |
| Magnet stand | Narishige | GJ-8 | ||
| Micromanipulator | Narishige | M-3333 | ||
| Tweezers | S&T DUMONT Swiss 00632-11 | DUMONT | JF-5 TC | |
*Those are suggested materials. Can be replaced with any compatible products
References
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Cite This Article
Blivis, D., O’Donovan, M. J. Retrograde Loading of Nerves, Tracts, and Spinal Roots with Fluorescent Dyes. J. Vis. Exp. (62), e4008, doi:10.3791/4008 (2012).