神経、地帯、および蛍光色素で脊髄根の逆行ローディング
Summary
我々は、ニューロンまたはポリエチレン吸引ピペットを使用して、任意の神経管に蛍光カルシウム感受性色素を高濃度に導入するための簡単かつ低コストの手法を説明します。
Abstract
ニューロンの逆行性標識はまた、ニューロンの3月6日に、カルシウムや電位感受性色素をロードするために使用されている標準的な解剖学的方法1,2です。一般的に、色素が固体結晶として、あるいはガラスピペットを使用してローカルの圧力注入により適用されます。しかし、これはいくつかの時間が染料拡散するために必要な場合は特に、染料と還元の標識強度の希釈になる可能性があります。ここでは、色素溶液を充填したポリエチレン吸引ピペットを用いて神経細胞に蛍光灯やイオン感受性色素を導入するためのシンプルで低コストの手法を示しています。このメソッドは、ロード処理全体の軸索と接触している染料の高濃度を維持するための信頼できる方法を提供しています。
Protocol
蛍光デキストランは、解剖学的ツールとして、イメージング神経活動1-4使用されています。フィールドら 、（2009）4は、モデル系として脊髄を中心とした軸索路にイオンと電位感受性色素を適用するためのプロトコルを公開しました。ここでは、 インビトロ optophysiologicalおよび形態学的研究のためにカット腹根、後根または脊髄のいずれかの神経管に蛍光及び/?…
Discussion
<p class="jove_content">ここでは神経細胞、神経や脊髄路に色素を導入するための簡単かつ費用対効果の高いプロトコルを記述します。このメソッドは、ロードプロセスの間、高濃度の色素溶液に識別解剖学的経路を公開することが含まれます。 microinjections、バス·アプリケーションおよびエレクトロポレーション法に比べて少し背景を持つターゲット·サイトの逆行性標識法で、この結果。しかし、この方?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
<p class="jove_content">この作品は、国立衛生研究所の神経疾患や脳卒中の国立研究所の学内プログラムによってサポートされていました。また、メソッドには、図3のデータへの彼の以前の貢献のために博士ジョージMentisに感謝します。</p
Materials
| Material Name | Company | Catalogue number | Comments | |
| Tubing | PE90 (IDxOD:0.034″x0.050″; Wall Thikness:0.008″) | Clay Adams Brand Intermedic | 427421 | For Type I & Type II pipettes |
| NSF-51(IDxOD:1/16×1/8; Wall Thikness:1/32) | PharMed BPT, Cole-Parmer | AY242002 | For Flexible tubing | |
| Syringe | 1ml insulin Syringe U-100 | Becton Dickenson | 329650 | |
| Needle | 19G x1-1/2″ Metal Hub Needle | MONOJECT | 200136 | Connecting Type II pipette to syringe |
| Alcohol Lamp | ||||
| Stopcock | Three-way Stopcock with Male Luer Slip Adapter | Baxter Healthcare Corp. | 2C6241 | Use with syringe |
| Holder | H-1 electrode holder | Narishige | H-1/12 | |
| Magnet stand | Narishige | GJ-8 | ||
| Micromanipulator | Narishige | M-3333 | ||
| Tweezers | S&T DUMONT Swiss 00632-11 | DUMONT | JF-5 TC | |
*Those are suggested materials. Can be replaced with any compatible products
References
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Cite This Article
Blivis, D., O’Donovan, M. J. Retrograde Loading of Nerves, Tracts, and Spinal Roots with Fluorescent Dyes. J. Vis. Exp. (62), e4008, doi:10.3791/4008 (2012).