המאפיינים המכאניים של glycocalyx אנדותל נמדדו על ידי כניסה באמצעות כדורים בגודל מיקרון על cantilevers AFM. תאי אנדותל בתרבית בתא מותאם אישית תחת תנאי זרימה פיסיולוגיים לגרום ביטוי glycocalyx. נתונים נותחו באמצעות מודל סרט דק כדי לקבוע את העובי ומודולוס glycocalyx.
ההבנה של האינטראקציה של לויקוציטים ודופן כלי הדם במהלך לכידת יקוציט מוגבל על ידי הבנה חלקית של התכונות המכאניות של שכבת פני השטח האנדותל. זה ידוע כי מולקולות דבקות על תאי דם לבנים מופצות לא אחידה ביחס למשטח 3 טופוגרפיה, הטופוגרפיה שמגבילה היווצרות קשרים עם דבק משטחים אחרים 9, וכי כוחות המגע פיסיולוגיים (≈ 5.0-10.0 PN לmicrovillus) יכולים לדחוס את microvilli כל קטן כשליש מאורך המנוחה שלהם, להגדיל את הנגישות של מולקולות על פני השטח היריב 3, 7. אנו רואים האנדותל כמבנה דו שכבתי, גוף התא הקשיח יחסית, בתוספת glycocalyx, ציפוי סוכר מגן רך על פני שטח luminal 6. הוכח שglycocalyx יכול לפעול כמחסום להפחתת הידבקות של לויקוציטים לאנדותל 4 משטח.בדו"ח זה אנו מתחילים להתייחס deformability של משטחי אנדותל להבין כיצד הקשיחות המכאנית האנדותל עשויה להשפיע על היווצרות קשרים. תאי האנדותל הגדלים בתרבית סטטית אינם מבטאים glycocalyx חזק, אבל תאים שגודלו בתנאי זרימה פיסיולוגיות מתחילים המשוער glycocalyx נצפה בvivo 2. מודולוס של גוף התא האנדותל כבר נמדד באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי (AFM) כדי להיות כ 5-20 kPa 5. עובי המבנה של glycocalyx נחקרו באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים 8, ומודול של glycocalyx כבר מקורב תוך שימוש בשיטות עקיפות, אבל למיטב ידיעתנו, לא חל כל דו"חות רשמיים של מדידה ישירה של מודולוס glycocalyx בתאים חיים . במחקר זה, אנו מציגים ניסויים שנעשו עם הזחת רומן AFM בדיקה על תאים שכבר בתרבית בתנאים למקסם ביטוי glycocalyx למאמדידה ישירה של ke מודולוס והעובי של glycocalyx אנדותל.
אנחנו השתמשנו ערכים מחושבים מהמודל דו שכבתי ותאורית הרץ למודל האינטראקציה של יקוציט במחזור הדם עם קיר אנדותל. אנו כי יש לחשב את microvillus על יקוציט בקוטר של 50 ננומטר בעומס 10 PN הייתי כניסה כ 150 ננומטר לglycocalyx, רק חלק קטן מהעובי הכולל. זה מצביע על כך glycocalyx, עם מאפיינים כפי שנמ?…
The authors have nothing to disclose.
המחברים מבקשים להודות לאלנה Lomakina, ריצ'רד Bauserman, מרגרט יונגמן, השי וקנין, ג'סיקה סניידר, כריס Striemer, Nakul Nataraj, האנג לי צ'ונג, Tejas Khire, ואריק לאם על סיועם בפרויקט זה. פרויקט זה מומן על ידי NIH # PO1 HL 018208.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
McCoy’s Medium | Gibco | 16600-082 | |
Fetal Calf Serum | Hyclone | SH30070 | |
Endothelial Cell Growth Medium | Vec Technologies | MCDB-131 | |
Pooled Human Umbilical Vein Endothelial Cells | Vec Technologies | PHUVEC/T-25 | |
Sulfuric Acid | JT Baker | 9681-02 | |
Hydrogen Peroxide | VWR | BDH3742-1 | |
(3-aminopropyl)triethoxysilane | Aldrich | 440140-100ML | |
Isopropyl Alcohol | VWR | BDH8999-4 | |
Trypsin | Cellgro | 25-054-C1 | |
Hank’s Buffered Salt Solution | Gibco | 14175-095 | |
sulfo-NHS-LC-Biotin | Thermo Scientific | 21335 | |
Streptavadin beads | Dynabeads | 112.06D | |
MFP-3D AFM | Asylum Research | ||
Tipless Cantilevers | Nanoworld | ARROW-TL1-50 | |
Silhouette SD | Quickutz | Silhouette-SD | |
Silicone Rubber | Stockwell Elastomerics | SE50-RS | |
30 ml Syringes | Benton Dickinson | 309650 | |
18 gauge needles | Benton Dickinson | 305196 | |
Extension Sets | Hospira | 4429-48 | |
4 way valves | Teleflex | W21372 | |
Male/Female Port Caps | Smith’s Medical | MX491B | |
Peristaltic Pump | Watson-Marlow | 401U/D | |
Peristaltic Tubing | Watson-Marlow | 903.0016.016 | |
sterile filters | Pall Life Science | 4652 |