라이브 마우스의 혈관 염증과 혈전 형성하는 동안 활성화 내피에 Heterotypic 혈소판 - 호중구 상호 작용의 실시간 영상
Summary
여기 혈관 염증 및 라이브 쥐 혈전 형성되는 동안 활성화 내피에 heterotypic 혈소판 호중구 상호 작용을 시각화하는 형광 intravital 현미경의 실험 기술을보고합니다. 이 현미경 기술은 혈관 질환의 분자 메커니즘을 연구 할 수 있고 pathophysiological 조건에 따라 pharmacologic 요원을 테스트 할 가치가 있습니다.
Abstract
arteriolar 부상의 사이트에서 혈전 형성을하는 동안 활성화 된 내피의 mediates 혈전증과 혈관 염증에 활성화 된 혈소판 및 백혈구 (주로 호중구)의 상호 작용. 1,2, 활성화 내피와 subendothelial 매트릭스 단백질 자기편 혈소판은 호중구 압연과 접착력을 지원합니다. 3 반대로, venular 염증성 조건 하에서, 활성화 내피에 점착성의 호중구는 혈소판을 순환의 접착력과 축적을 지원할 수 있습니다. Heterotypic 혈소판 호중구 집계는 세포 사이의 특정 수용체 카운터 수용체의 상호 작용에 의해 순차적 프로세스를 필요로합니다. 4 그것은이 활성화 내피 세포는 따라서 높은 전단 조건 하에서 혈소판 부착 및 축적을 시작, 같은 폰 Willebrand 인자로 접착 분자를 풀어 알려져 있습니다. 5 또한, 활성화 내피 세포는 표현 selectins에 의한 호중구의 압연과 접착력을 지원D 세포 유착 분자 -1 (ICAM-1), 각각 낮은 전단 조건 하에서 4. 혈소판 P-selectin이 통과 호중구와 상호 작용하는 P-selectin 당 단백질 리간드-1 (PSGL-1),이를 호중구 β2 integrins 및 회사의 활성화를 유도 두 세포 유형 간의 접착. heterotypic 혈소판 호중구 상호 작용이 전체 혈액 또는 절연 세포, 6,7에서 결정되는 체외 실험에서의 발전에도 불구하고 그 연구는 혈관 질환 중 산화제 스트레스 조건을 조작 할 수 없습니다. 이 보고서에서, 혈소판 및 호중구 마커 마우스에 대한 휘황 라벨이 지정된 특정 항체를 사용하여, 우리는 TNF-α 유도 염증이나 레이저 유도에 따라하는 동안 활성화 된 내피에 혈소판과 호중구의 heterotypic 상호 작용을 모니터링 할 수있는 자세한 intravital 미세한 프로토콜을 설명 라이브 쥐 cremaster 근육 microvessels 부상.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기 혈관 염증과 혈전증 동안 활성화 내피에 heterotypic 혈소판 호중구 상호 작용을 시각화하는 실시간 형광 intravital 현미경에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다. 이전 유사한 형광 현미경 방법은 혈전 형성과 혈관 염증의 분자 메커니즘을 연구보고되었다. 8,12가 heterotypic 세포 세포의 상호 작용은 부상 사이트에 vaso-가림을 위해 중요 할 수 있기 때문에,이 기술은를위한 가치있는 도구가…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 건강의 국립 연구소에서 보조금 (JC에 P30 HL101302 및 RO1 HL109439)와 미국 심장 협회 (JC에 SDG 5270005)에 의해 부분적으로 지원되었다. A. Barazia은 T32HL007829 NIH 훈련 보조금에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| NaCl | Fisher Scientific | 7647-14-5 | |
| KCl | Sigma-Aldrich | 7447-40-7 | |
| CaCl2 2H2O | Sigma-Aldrich | 10035-04-8 | |
| MgCl2 6H2O | Fisher Scientific | 7791-18-6 | |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | 144-55-8 | |
| 0.9% NaCl Saline | Hospira | 0409-4888-10 | |
| Ketamine | Hospira | 0409-2051-05 | |
| Xylazine | Lloyd | ||
| Intramedic Tubing (PE 90) | BD Diagnostics | 427421 | |
| Intramedic Tubing (PE 10) | BD Diagnostics | 427401 | |
| Murine TNF-α | R&D Systems | 410-MT | |
| Dylight 488- labeled rat anti-mouse CD42b antibody | Emfret Analytics | X488 | |
| Alexa Fluor 647-conjugated anti-mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) Antibody | BioLegend | 108418 | |
| NESLAB EX water bath/circulator | Thermo-Scientific | ||
| Olympus BX61W microscope | Olympus | ||
| TH4-100 Power | Olympus | ||
| Lambda DG-4 | Sutter | ||
| MPC-200 multi-manipulator | Sutter | ||
| ROE-200 stage controller | Sutter | ||
| C9300 high-speed camera | Hamamatsu | ||
| Intensifier | Video Scope International | ||
| Ablation Laser | Photonic Instruments, Inc. | ||
| SlideBook 5.0 | Intelligent Imaging Innovations |
References
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