이 원고는 약리학 제제 또는 신경 자극에 반응하여 평활근 수축을 평가하기위한 시험 관내 방법에있어서, 간단하지만 강력한을 제시한다. 주요 응용 프로그램은 약물 검사 및 이해 조직 생리학, 약리학, 병리학이다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
우리는 체외 방광 평활근 수축을 측정하는 방법, 및 약리학 적 및 생리 평활근의 성질뿐만 아니라 병리학 적 변화에 의한 조사에 대한 사용을 설명한다. 이 방법은 수술 및 약리학 적 제제의 안정성 및 생존에 영향을 조작, 인체 조직의 사용 및 / 또는 고가의 화학 물질의 사용과 같은 생체 내 실험에서 발생 주요 방법론적인 어려움을 극복하면서, 방광 기능을 이해하는데 중요한 정보를 제공한다. 또한 건강하고 병적 조건의 각 방광 성분 (즉, 평활근, 점막, 신경)의 성질을 조사하는 방법을 제공한다.
방광은 마취 된 동물, 크렙스 용액에 넣고, 스트립으로 절단 제거한다. 스트립 따뜻한 크렙스 용액으로 채워진 챔버에 배치됩니다. 일단 아이소 장력에 부착수축력을 측정하는 n 개의 트랜스 듀서, 타단은 고정 된로드에 부착된다. 티슈 직접 목욕 또는 생체 내에서 방광 수축을 유발 유사한 신경을 활성화 전기장 자극 전극에 의해 화합물을 추가로 자극한다. 우리는이 방법의 사용은 발전 과정 및 실험 척수 손상 후 자발 평활근 수축을 평가 보여, 신경 전달 (관련된 송신기 및 수용체), 평활근 활성의 조절에 관여하는 인자의 성질, 개별 블래 성분의 역할 종 및 약리 에이전트에 응답 기관의 차이. 또한, 송신기는 릴리스 수축 및 / 또는 평활근의 이완, 약물 구조 활성 관계 및 평가에 관련된 세포 내 경로를 조사를 위해 사용될 수있다.
체외 평활근 수축 방법은 광범위하게 사용되어왔다 FO오십년 이상 R, 크게 방광 기능에 대한 우리의 이해뿐만 아니라 현재 방광 관리를 위해 임상 적으로 사용되는 화합물의 제약 발전에 기여 데이터를 제공하고 있습니다.
서론
방광 평활근 소변 제거를 유도하기 위해 소변의 저장을 허용하도록 완화하고, 계약. 휴식은 내장 평활근 속성으로하고 배뇨근 베타 아드레날린 수용체 (β 인간의 3 AR)을 활성화 교감 신경에서 노르 에피네프린 (NE)의 토닉 릴리스에 의해 매개된다. 보이드는 교감 입력을 억제하고 아세틸 콜린 / ATP는 방광 평활근 일을 계약을 해제 부교감 신경을 활성화함으로써 달성된다. 뇌 및 / 또는 척수 손상, 신경 변성 질환, 당뇨병, 방광 출구 폐색 또는 간질 성 방광염 등 다양한 병적 상태, 뿌리깊 수명이 환자의 품질에 심각한 영향을주지 않고, 방광 기능을 변경할 수있다. 평활근, 원심성 또는 구 심성 신경 및 / 또는 이러한 조건은 하나의 블래 더에 영향을 미치는 요소에 의해 평활근의 수축을 변경할점막.
생체 내 및 방광 기능을 연구하기위한 생체 외 방법에서 여러 가지가 개발되어왔다. 생체은 방광 내압 측정은 방광 기능의 기본 측정이다. 이는 생리적 조건 하에서 주변 정보의 수집을 허용 그대로 제제이더라도, 평활근 스트립의 사용이 바람직하다하는 상황들이있다. 이러한 수술 및 / 또는 약리학 적....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
여기에 설명 된 모든 절차는 피츠버그 대학에서 IACUC위원회에 의해 승인됩니다.
1 솔루션
- 법에 따라 크렙스 솔루션을 준비합니다. 염화나트륨 (118)의 KCl 4.7, 염화칼슘 1.9, 황산 1.2, 탄산 수소 나트륨 24.9, KH 2 PO 4 1.2, 포도당 11.7 : MM의 조성.
- 95 % O 2, 5 % CO 2 크렙스을 공급하십시오 및 실험을하는 동안 사용되는 37 ºC 물을 욕조에 넣습니다. 제쳐 놓고 ~ 실온에서 폭기 된 크렙스 용액 200 ㎖를 조직 절제술에 사용되는.
- 화난 크렙스의 산도 (~ 7.4)와 삼투압 (~ 300 mOsm)를 측정한다.
2 실험 장치 (회로도 그림 1A)
- (95 % O 2, 5 % CO 2) 10 ㎖의 크 레브와 챔버 화난 채 웁니다.
- 37 ° C에 챔버를 가열하는 순환 수 펌프를 시작합니다; 필요한 장비를 켜 : 앰프 (들), 자극 (들) 및 기록 소프트웨어입니다.....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
자발적인 근육 조직 활동
자발적인 근육 조직 활동은 출생 후의 개발 6-9 병리 (예를 들어, SCI, BOO) 3-5으로 변화를 겪는 중요한 평활근 특징입니다. 이 액티비티는 과민성 방광 (OAB) (2)의 증상에 기여하는 것으로 생각되기 때문에, 변조 수용체, 세포 내 경로 및 약리 제의 평가는 OAB 및 기타 평활근 장애에 대한 효과적인 치료법을 개발하기위한 높은 관심사이다. . 여기에 제시된 방법은 쉽게, 청소년이 질문을 조사이 신생아 (I)의 개발 과정, 근원 자연 활동의 다른 패턴을 보여줍니다 수 있습니다 그림 (II) 성인 (III)와 척수 손상 쥐 (SCI, ⅳ). 신생아 쥐에서 스트립은 큰 진폭, 낮은 주파수 리듬 수축 (그림 2AI)를 전시하면서 성인 쥐에서 스트립.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
본 논문에서는 방광 생리학 및 병리학뿐만 아니라, 방광 기능 장애를 치료하기위한 새로운 약물의 발견을 돕는 관련된 중요한 과학적 문제들을 해결하는데 사용할 수있는 시험 관내 평활근 수축 방법에서 간단한 설명. 우리는 방광 평활근 수축의 발달 병리학 적 및 약리학 적 특성 (그림 2-4), 신경 전달 변조 (그림 5-7A), 종의 차이 (그림 4), 장기의 차이를 평가하는이 방법의 사용을 설명했다 (그림 6) 특정 성분의 방광 관련성 (예를 들어, 점막,도 7b). 여기에 도시되지 않은 부가 기능이 추가되는 약물 3,10,11, 다양한 약 22 ~ 24, 또는 평가 / 송신기 rele의 정량 구조 - 활성 관계를 이용하여 세포 내 경로의 평가를 포함신경 자극 25 후 ASE.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 그들이 더 경쟁 금전적 이해 관계가 없다고 선언합니다.
감사의 글
이 연구는 (LB)에 NIH R37 DK54824 및 R01 DK57284 보조금에 의해 지원되었다
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Equipment | |||
| Tissue Bath System with Reservoir | Radnoti, LLC | 159920 | 격리된 조직 목욕 따뜻한 |
| 물 재순환기 펌프 | Kent Scientific Corporation | TPZ-749 | 는 조직 목욕을 37 °으로 유지합니다. C |
| 컴퓨터 | |||
| 데이터 수집 시스템 | DataQ 기기 | DI-710-UH | 데이터 보기, 기록 및 분석 트랜스 |
| 브리지 변환기 증폭기 | 세계 정밀 기기 | SYS-TBM4M | 변환기 증폭기 |
| 잔디 자극기 | 잔디 기술 | 모델 S88 | 자극기 |
| 마취 시스템 | 켄트 사이언티픽 코퍼레이션 | ACV-1205S | 동물을 마취시키기 위해 |
| 마취 상자 | 하버드 기구 | 500116 | 동물을 마취하기 위해 |
| 마취 마스크 | Kent Scientific Corporation | AC-09508 | 동물 |
| 재료 및 수술 기구 | |||
| Sylgard | Dow Corning Corp | 184 SIL ELAST KIT | 핀, 해부 및 절단 조직 |
| 페트리 접시 | Corning | 3160-152 | 조직 해부/절단 |
| 곤충 핀 | ENTOMORAVIA Austerlitz 곤충 핀 | 크기 5 | 조직 핀 핀 |
| 벤치 패드 | VWR International | 56617-014 | 흡수성 벤치 언더패드 |
| 랫 수술 키트 | Kent Scientific Corporation | INSRATKIT | 조직 제거 및 해부 |
| 2 Dumont #3 Forceps | Kent Scientific Corporation | INS500064 | 제거하고 해부하기 위해 |
| INS500092 | 조직 제거 및 해부 | ||
| Scalpel | Kent Scientific Corporation | INS500236 | 조직을 제거하고 해부하기 위해 |
| 메스 블레이드 | Kent Scientific Corporation | INS500239 | 조직을 제거하고 해부하기 위해 |
| 전문 클리퍼 | 브레인트리 사이언티픽, Inc. | CLP-223 45 | 털을 제거하려면 |
| 봉합사 실 | Fine Science Tools | 18020-50 | 타이 티슈 |
| 클립 | Radnoti, LLC | 158802 | 막대/변환기에 티슈 |
| 부착 1 g 무게 | Mettler Toledo | 11119525 | 변환기 교정 |
| Chemicals | |||
| Krebs Solution: Sodium chloride Potassium chloride Monobasic Potassium phosphate Magnesium sulfate Dextrose Sodium bicarbonate Calcium chloride Magnesium chloride | Sigma Fisher Fisher Fisher Fisher Sigma EMD Baker | S7653 P217-500 P285-3 M65-500 D16-500 S5761 CX0130-2 2444 | Krebs 용액 |
| Isoflurane | Henry Schein | 029405 | To 동물을 마취하다 |
| 산소 탱크 | Matheson Tri Gas | ox251 | 마취 시스템과 함께 사용하기 위한 |
| Carbogen Tank (95% 산소; 5% 이산화탄소) | Matheson Tri Gas | Moxn00hn36D | 크렙스 솔루션을 폭기시키기 위해 |
참고문헌
- Fowler, C. J., Griffiths, D., de Groat, W. C. The neural control of micturition. Nat Rev Neurosci. 9, 453-466 (2008).
- Andersson, K. E. Detrusor myocyte activity and afferent signaling. Neurourol Urodyn. 29, 97-106 (2010).
- Artim, D. E., et al.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
