ザ・<em>卵内</em肝細胞癌の効率的な異種移植モデルとして>ニワトリ絨毛尿膜（CAM）アッセイ
Summary
The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.
Abstract
ヒヨコ漿尿膜（CAM）は、CAMはその腫瘍の移植のための理想的なシステム作り、自然免疫及び高度に血管新生である受精後7日目までに開発を開始し、12日目により成熟します。さらに、CAMはその腫瘍の浸潤や転移を研究するための魅力的なモデル作り、フィブロネクチン、ラミニン、コラーゲン、インテグリンα（v）のベータ3、およびMMP-2のような細胞外マトリックスタンパク質が含まれています。科学者は、長い血管形成のモデルとして使用することによってCAMの生理機能の利点をとっています。より最近では、CAMアッセイは、基本的なインビトロでの作業がより複雑な動物癌モデル間のギャップを埋めるために、種々の癌のインビボ異種移植モデルシステムとして動作するように変更されています。 CAMアッセイは、コストと時間が効果的である生物学的に関連するシステムにおける腫瘍増殖、抗腫瘍療法、およびプロ腫瘍分子経路の研究を可能にします。ここでは、CAMのXenの開発を説明最大93％の胚の生存率と肝細胞癌（HCC）のograftモデルと信頼性の腫瘍は、三次元の、血管新生化腫瘍の成長につながる取ります。
Introduction
肝細胞癌（HCC）は、世界1におけるがん死亡率の3 番目の主要な原因です。現在、HCC患者のわずか30％が治癒の可能性の外科的治療2、および全身化学療法の対象となる3有効ではありません。そのため、新たな肝細胞癌治療のための押し満たされていない臨床的必要性、および新しい薬剤の効率的な試験に適したモデル系の開発があります。ニワトリ絨毛尿膜（CAM）アッセイは、再現可能な、費用対効果、及びインビボでの潜在的な抗腫瘍薬を試験する迅速ミディアムスループット方法を提供します。
CAMアッセイは、血管新生4を研究するために広く使用されています。また、正常神経膠芽腫5、6膵臓癌、黒色腫7-9、および骨肉腫10-11含む、癌の腫瘍異種移植片モデルに開発されました。どちらOVO 12とEX卵内13の技術は、プロトコルからのプロトコルに様々な詳細は、文献に利用されてきました。 50％11-14 – CAM異種移植モデルに対する一つの大きな課題は、25に至るまで公表されたニワトリ胚死亡率で、卵の操作後胚死亡の発生率が比較的高いです。
この記事では、我々は確実に組織学的に未分化HCCに似ている三次元の、血管新生化腫瘍の増殖を生産HCCの卵内異種移植モデルの開発について説明します。まずオソウスキら 14によって記載されたプロトコルを適応していると非常に高い腫瘍の生着に93％までのヒヨコ胚の生存率を達成しています。
Protocol
Representative Results
Discussion
このプロトコルのいくつかの重要なステップは、ほとんど改善された胚の生存率だけでなく、腫瘍増殖の信頼性向上を占めています。気嚢に吸引を適用することにより、離れたシェルからCAMを削除すると（卵、鈍的切開などからアルブミンを除去するために、針を使用して）他の既存の方法よりも低侵襲性です。この方法のために必要な2つの小さな穴を作成するために、無菌のプッシュピン…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
A.S. was partially supported by grants from the National Institutes of Health (NIH) National Institute of Dental and Craniofacial Research (5R03DE021741-02) and the National Cancer Institute (1K08CA154963-01A1).
The Howard Hughes Medical Institute provided funding for M.L. through the HHMI Medical Research Fellows Program.
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Premium incubated eggs | Charles River | N/A | http://www.criver.com/files/pdfs/avian/av_c_spf_egg_price_list.aspx |
| Egg incubators | GQF | Hova-Bator 2362N | |
| Rotating egg trays | GQF | 1611 Automatic Egg Turner | |
| Egg candler | Lyon | Hi-Power 950-070 | |
| Dremel 100 rotary tool with 15/16 cut-off wheel | Dremel | 100-N/7 | |
| Sterile forceps, push pin, dissection scissors, Scotch tape | |||
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 | |
| Cryogenic vials, external thread with silicone washer | Corning | 430659 | |
| Collagenase from Clostridium histolyticum | Sigma | C9891 |
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