<em> Ovo</emHepatosellüler karsinom Verimli Xenograftlarında Modeli olarak> Piliç Chorioallantoic Membran (CAM) Deneyi
Summary
The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.
Abstract
Civciv koriyoallantoik membran (CAM) CAM tümör implantasyonu için ideal bir sistem haline doğal bağışık yetmezliği ve çok kanlanan bir gübreleme gün sonra 7 gelişmeye başlar ve 12. gün olgunlaşır. Bundan başka, CAM tümör istilasını ve metastazını, çalışma için çekici bir model verme gibi, fibronektin, laminin, kolajen, integrin alfa (v) beta3 ve MMP-2 gibi hücre dışı matris proteinleri içerir. Bilim adamları uzun zamandır anjiyogenez bir model olarak kullanarak CAM fizyolojisi avantajlarından almış. Daha yakın zamanlarda, CAM assay'dir bazik in vitro çalışma ve daha karmaşık bir hayvan kanser modellerinde arasında bir köprü, muhtelif kanserler bakımından bir in vivo model sisteminde ksenograft olarak çalışmak için modifiye edilmiştir. CAM deneyi maliyet ve zaman etkin bir biçimde kullanılabilir biyolojik ilgili sisteminde tümör büyümesi, anti-tümör terapisi, ve pro-tümör molekül yollarının çalışması için izin verir. Burada, CAM xen gelişimini açıklarkadar% 93 embriyonik sağkalım oranları ve güvenilir tümör hepatosellüler karsinom (HCC) ve ograft modeli üç boyutlu, vaskülarize tümörlerin büyümesine yol açan take.
Introduction
Hepatosellüler karsinom (HCC) Dünyada 1 kanser ölümlerinin 3. önde gelen nedenidir. Şu anda HCC hastalarının sadece% 30 potansiyel küratif cerrahi tedavi 2 için uygundur, ve sistemik kemoterapi 3 etkili değildir. Bu nedenle yeni tedavilere HCC için acil bir karşılanmamış bir klinik ihtiyaç ve yeni maddelerin etkin bir test için uygun bir model sistemlerinde gelişme vardır. Tavuk koriallantoik zar (CAM) tahlili in vivo potansiyel anti-tümör ilaç test üretilebilir, uygun maliyetli ve hızlı, orta hacimli bir yöntem sağlar.
CAM tahlil anjiyogenez 4 incelemek için yaygın olarak kullanılır olmuştur. Ayrıca, başarılı bir şekilde glioblastoma 5, pankreas kanseri 6, melanoma 7-9 ve osteosarkom dahil olmak üzere 10-11, kanser, bir tümör ksenograft modeli geliştirilmiştir. Hem ovo 12 ve ex ovo içinde13 teknikleri protokol protokole değişen ayrıntıları literatürde kullanılmıştır. Yüzde 50 11-14 – CAM ksenograft modeli bir büyük zorluk 25 arasında değişen yayınlanan civciv embriyo ölüm oranları ile, yumurta manipülasyonu sonrası embriyonik ölüm nispeten yüksek insidansı.
Bu yazıda, güvenilir histolojik farklılaşmamış HCC benzer üç boyutlu, vaskülarize tümörlerin büyümesini üreten HCC ksenograft modelinde ovo bir in gelişimini açıklar. Biz ilk Ossowski ve ark. 14 tarafından açıklanan protokol adapte var ve son derece yüksek tümör engraftment ile% 93'e varan civciv embriyonik sağkalım oranları elde ettik.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu protokol Çeşitli önemli adımlar büyük olasılıkla gelişmiş embriyonik hayatta yanı sıra tümör büyümesi artan güvenilirlik oluşturmaktadır. Hava kesesi için emme uygulayarak uzak kabuk CAM Damlama (yumurta, künt diseksiyon, vb albümin kaldırmak için bir iğne kullanarak) diğer mevcut yöntemlere göre daha az invaziv. Bu yöntem için gerekli olan iki küçük delik oluşturmak için steril bir itme pimi kullanılarak protokolünün en zor kısmıdır. Çok fazla güç kullanarak raptiye ile a?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
A.S. was partially supported by grants from the National Institutes of Health (NIH) National Institute of Dental and Craniofacial Research (5R03DE021741-02) and the National Cancer Institute (1K08CA154963-01A1).
The Howard Hughes Medical Institute provided funding for M.L. through the HHMI Medical Research Fellows Program.
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Premium incubated eggs | Charles River | N/A | http://www.criver.com/files/pdfs/avian/av_c_spf_egg_price_list.aspx |
| Egg incubators | GQF | Hova-Bator 2362N | |
| Rotating egg trays | GQF | 1611 Automatic Egg Turner | |
| Egg candler | Lyon | Hi-Power 950-070 | |
| Dremel 100 rotary tool with 15/16 cut-off wheel | Dremel | 100-N/7 | |
| Sterile forceps, push pin, dissection scissors, Scotch tape | |||
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 | |
| Cryogenic vials, external thread with silicone washer | Corning | 430659 | |
| Collagenase from Clostridium histolyticum | Sigma | C9891 |
References
- Sangiovanni, A., et al. Increased survival of cirrhotic patients with a hepatocellular carcinoma detected during surveillance. Gastroenterology. 126 (4), 1005-1014 (2004).
- Lopez, P. M., Villanueva, A., Llovet, J. M. Systematic review: evidence-based management of hepatocellular carcinoma–an updated analysis of randomized controlled trials. Aliment Pharmacol Ther. 23 (11), 1535-1547 (2006).
- Llovet, J. M., Burroughs, A., Bruix, J. Hepatocellular carcinoma. Lancet. 362 (9399), 1907-1917 (2003).
- Folkman, J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent. J Natl Cancer Inst. 82, 4-6 (1990).
- Hagedorn, M., et al. Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).
- Dumartin, L., et al. Netrin-1 mediates early events in pancreatic adenocarcinoma progression, acting on tumor and endothelial cells. Gastroenterology. 138 (4), 1595-1606 (2010).
- Aguirre-Ghiso, J. A., Estrada, Y., Liu, D., Ossowski, L. ERK(MAPK) activity as a determinant of tumor growth and dormancy; regulation by p38(SAPK). Cancer Res. 63 (7), 1684-1695 (2003).
- Baroni, T. E., et al. Ribonomic and short hairpin RNA gene silencing methods to explore functional gene programs associated with tumor growth arrest. Methods Mol Biol. 383, 227-244 (2007).
- Lopez-Rivera, E., et al. Inducible nitric oxide synthase drives mTOR pathway activation and proliferation of human melanoma by reversible nitrosylation of TSC2. Cancer Res. 74 (4), 1067-1078 (2014).
- Balke, M., et al. A short-term in vivo model for giant cell tumor of bone. BMC Cancer. 11, 241 (2011).
- Balke, M., et al. Morphologic characterization of osteosarcoma growth on the chick chorioallantoic membrane. BMC Res Notes. 3, 58 (2010).
- Sys, G. M., et al. The in ovo CAM-assay as a xenograft model for sarcoma. J Vis Exp. (77), e50522 (2013).
- Dohle, D. S., et al. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J Vis Exp. (33), (2009).
- Ossowski, L., Reich, E. Experimental model for quantitative study of metastasis. Cancer Res. 40 (7), 2300-2309 (1980).
- Ghanekar, A., Ahmed, S., Chen, K., Adeyi, O. Endothelial cells do not arise from tumor-initiating cells in human hepatocellular carcinoma. BMC Cancer. 13, 485 (2013).
- Ho, J. W., et al. Effects of a novel immunomodulating agent, FTY720, on tumor growth and angiogenesis in hepatocellular carcinoma. Mol Cancer Ther. 4 (9), 1430-1438 (2005).
- Hagedorn, M., et al. VEGF coordinates interaction of pericytes and endothelial cells during vasculogenesis and experimental angiogenesis. Dev Dyn. 230 (1), 23-33 (2004).
