Technik der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung bei Mäusen für Induktion der linken Ventricular Hypertrophie
Summary
Ziel dieses Protokolls ist es, Schritt für Schritt beschreiben die Technik der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung (TAC) bei Mäusen. Durch Beseitigung der Intubation und Belüftung sind obligatorisch für häufig verwendete Standardverfahren, minimal-invasive TAC das operative Vorgehen vereinfacht und reduziert die Belastung auf das Tier setzen.
Abstract
Transversale Aortenstenose Verengung (TAC) bei Mäusen ist eines der am häufigsten verwendeten chirurgischen Techniken für die experimentelle Untersuchung von Druck Überlast-induzierte Herzinsuffizienz linksventrikulären Hypertrophie (LVH) und seine Weiterentwicklung überlassen. In der Mehrzahl der gemeldeten Untersuchungen ist dieser Vorgang mit Intubation und Beatmung des Tieres das macht es anspruchsvoll und zeitraubend und fügt die chirurgische Belastung für das Tier. Das Ziel dieses Protokolls ist eine vereinfachte Technik der minimal-invasiven TAC ohne Intubation und Beatmung von Mäusen zu beschreiben. Wichtige Schritte der Technik werden betont, um geringe Mortalität und hohe Effizienz bei der Induktion von LVH zu erreichen.
Männlichen C57BL/6 Mäusen (10 Wochen alten, 25-30 g, n = 60) wurden mit einer einzigen intraperitoneale Injektion einer Mischung von Ketamin und Xylazin betäubt. Spontan atmen Tier nach einer 3-4 mm oberen teilweise Sternotomie, ein Segment von 6/0 Seide Naht durch das Auge einer Ligatur Beihilfe eingefädelt war unter den Aortenbogen übergeben und über einen abgestumpften 27-Gauge-Nadel gebunden. Sham-betrieben Tiere unterzog die gleiche OP-Vorbereitung, aber ohne Aortenstenose Verengung. Die Wirksamkeit des Verfahrens bei der Induktion von LVH ist durch eine signifikante Zunahme der Herz/Körper-Gewichts-Verhältnis bescheinigt. Dieses Verhältnis erhält man bei 3, 7, 14 und 28 Tage nach der Operation (n = 6-10 in jeder Gruppe und jedem Zeitpunkt). Mit unserer Technik wird LVH TAC im Vergleich zum Schein Tiere von Tag 7 bis Tag 28 beobachtet. Operative und späten (über 28 Tage) Todesfälle sind beide mit 1,7 % sehr gering.
Zusammenfassend unsere kostengünstige Technik der minimal-invasiven TAC bei Mäusen führt sehr geringe operative und postoperative Sterblichkeit und ist hoch effizient bei der Induktion von LVH. Das operative Vorgehen vereinfacht und reduziert die Belastung auf das Tier setzen. Es kann einfach durchgeführt werden, indem Sie kritische Schritte in diesem Protokoll beschrieben.
Introduction
In den letzten Jahren wurde die Studie an Herzversagen im durchgeführt lebensfähig Tiermodelle1. Im Vergleich zu großen Tiermodellen der Herzinsuffizienz, haben kleiner Tiermodelle zahlreiche potenzielle Vorteile. Neben niedrigeren Kosten für Gehäuse und Wartung sind kleiner Tiermodelle für mehr Forscher aufgrund der weniger komplexen Einrichtungen benötigt2zugänglich.
Herzinsuffizienz Mausmodellen bieten viele der gleichen Vorteile wie die Ratte-Modelle. Zusätzlich zu reduzierten Gehäuse kostet3, Maus-Modelle profitieren von der Verfügbarkeit der relevanten transgenen und Knockout (KO)-Stämme. Die Möglichkeit der Zelle typspezifische, induzierbaren KO oder transgene Strategien machen der Maus ein unschätzbares Werkzeug, die Pathogenese der Herzinsuffizienz zu studieren und zu versuchen, neue therapeutische Schemata3identifizieren.
Unter der Maus Modelle der Herzinsuffizienz verwendet derzeit4, quer Aortenstenose Verengung (TAC), erstmals von Rockman5 beschrieben wurde, ist das bevorzugte Modell erzeugen Druck Überlast-induzierte linken ventricular Hypertrophie (LVH)1 , 3. der größte Vorteil dieses Modells ist die Möglichkeit, die Schichtung der LVH2, obwohl ventrikuläre links Umbau in Reaktion auf TAC ist variabel zwischen verschiedenen Mausstämme. Insbesondere entwickeln C57BL/6 Mäusen schnelle LV-Dilatation nach TAC, die nicht mit anderen Stämmen4,6,7auftreten können.
Das plötzliche Auftreten von Bluthochdruck mit TAC Ursachen erreicht eine ca. 50 % Zunahme der LV Masse innerhalb von 2 Wochen, damit die Aktivität der pharmakologischen oder molekulare Interventionen mit dem Ziel modulieren die Entwicklung des LVH4rasch prüfen. Die akute Induktion von schwerer Hypertonie durch TAC ist nicht genau reproduzieren der progressiven linken ventricular Hypertrophie und Umbau in der klinischen Einstellung der Aortenstenose oder arterielle Hypertonie beobachtet. Dennoch ist dieses Modell von vielen Forschern verwendet, um zu identifizieren und neue therapeutische Targets in Herzinsuffizienz4ändern.
TAC in Mäusen die Durchführung erfordert größere chirurgische Kompetenz als erforderlich für andere Techniken verwendet, um LVH und anschließende Herzinsuffizienz2induzieren. Die meisten Autoren führen Sie diesen Vorgang durch Sondenschaft und Belüften der tierischen2,8, die macht dieses Verfahren mehr anspruchsvoll und zeitraubend und fügt die chirurgische Belastung für das Tier. Nur wenige Forscher haben in ihrer Studie mit kurzen Verweis auf den chirurgischen Eingriff9,10,11minimalinvasive TAC verwendet.
Ziel dieses Protokolls ist es, Schritt für Schritt beschreiben eine vereinfachte und benutzerfreundliche Technik der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung in den Mäusen, Hervorhebung der kritischen Phasen des Verfahrens. Anhand dieser wichtigen Schritte kann man diese Technik leicht durchführen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Das Ziel dieses Protokolls ist, eine schrittweise Darstellung der Operationstechnik für minimal-invasive quer Aortenstenose Verengung bei Mäusen zu präsentieren. Ausführliche technische Beschreibung der transversalen Aortenstenose Verengung bei Mäusen wurde von anderen Autoren2,8berichtet. Aber diese Ermittler operieren nach Intubation und Beatmung von Tieren. Die Verwendung von einen zusätzlichen Schritt der Intubation Beatmung erhöht die Komplexität und…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde unterstützt durch einen Zuschuss (Nr. 32016) der Herz-Kreislauf-Stiftung Schweiz, RT
Materials
| Surgical microscope | Olympus | SZX2-TR30 | |
| Razor | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| Sutures: | |||
| Polypropylene 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| Polypropylene 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| Silk 6/0 ligature | FST | 18020-60 | |
| Polypropylene 4/0 | Ethicon | 8683 | |
| Polypropylene 5/0 | Ethicon | Z303 | |
| Drugs: | |||
| Ketamin | Merial | Imalgène 1000, LBM154AD | |
| Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
| Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
| Instruments: | |||
| Bone nippers | Fine Surgical Tools | 16101-10 | |
| Ligation aid | Fine Surgical Tools | 18062-12 | |
| Tying forceps | Fine Surgical Tools | 18026-10 | |
| Needle holder Crile-Wood | Fine Surgical Tools | 12003-15 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11003-12 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11002-12 | |
| Tissue forceps | Fine Surgical Tools | 11021-12 | |
| Microsurgery needle holder | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
| Microsurgery scissors | Fine Surgical Tools | 91501-09 | |
| Mayo scissors | Fine Surgical Tools | 14511-15 | |
| 11-blade knife | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
| RNA extraction and qPCR: | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit Fluorimetric RNA assay | Fisher Scientific | 10034622 | |
| RNA 6000 Nano kit | Agilent | 5067-1511 | |
| High Capacity cDNA kit | Fisher Scientific | 10400745 | |
| Taqman Master Mix | Fisher Scientific | 10157154 | |
| Taqman BNP primers | Fisher Scientific | Mm01255770_g1 | |
| Taqman ANP primers | Fisher Scientific | Mm01255747_g1 | |
| Taqman ACE primers | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 primers | Fisher Scientific | Mm00801666_g1 | |
| Taqman TGFb primers | Fisher Scientific | Mm01178820_m1 | |
| Taqman Gapdh primers | Fisher Scientific | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| Software: | |||
| GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
| Animal food | |||
| Complete diet for adult rats/mice | Safe | UB220610R |
References
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