왼쪽된 심 실 비 대의 유도 대 한 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 기술
Summary
이 프로토콜의 목표는 단계별로 설명 하는 최소 침 습 가로 대동맥 수축 (TAC) 생쥐에서의 기술. 삽 관 법 그리고 일반적으로 사용 되는 표준 절차 필수는 환기의 제거, 최소 침 습 전술 수술 절차를 간소화 하 고 동물에 긴장을 감소 시킨다.
Abstract
마우스에 가로 대동맥 수축 (TAC) 왼쪽 심 실 비 대 (LVH) 및 그것의 진행 성을 심장 마비에 압력 과부하 유발 실험 조사를 위한 가장 일반적으로 사용 된 수술 기법 중 하나입니다. 대부분의 보고 된 조사,이 절차는 삽 관 법 및 환기를 요구 하 고 시간이 걸리는 그것을 렌더링 하 고 동물을 수술 부담을 추가 동물의 수행 됩니다. 이 프로토콜의 목표는 삽 관 법 없이 침 습 전술의 단순화 된 기술과 쥐의 환기를 설명 하는. 기술의 중요 한 단계 낮은 사망률과 LVH 유도에 높은 효율을 달성 하기 위하여 강조 된다.
남성 C57BL/6 마우스 (10 주 오래 된, 25-30 g, n = 60) 마 취 제와 xylazine의 혼합물의 단일 복 주사로 마 취 되었다. 자발적 호흡에 다음 3-4 m m 상단 부분 sternotomy 동물 6/0 비단 봉합 결 찰 원조의 눈을 통해 스레드 세그먼트 대동맥 아치 아래에 전달 되었고 무딘된 27 게이지 주사 바늘에 연결. 운영 하는 가짜 동물 수술 같은 수술 준비 대동맥 수축 하지 않고. LVH 유도에 절차의 효능은 심장/몸 무게 비율에 있는 상당한 증가 의해 증명 된다. 이 비율은 3, 7, 14, 28 일 수술 후에 얻은 것입니다 (n = 6-10 각 그룹 및 각 시간 점). 우리의 기술을 사용 하 여, LVH 주 7 일 28 통해에서 가짜 동물에 비해 전술에서 관찰 됩니다. 요원 하 고 늦은 (이상 28 일) mortalities는 둘 다 매우 낮은 1.7%에.
결론적으로, 마우스에 최소한 침략 적 전술의 우리의 비용 효과적인 기술 매우 낮은 수술 및 수술 후 mortalities을 실시 하 고 LVH 유도에 매우 효율적입니다. 그것은 수술 절차를 간소화 하 고 동물에 긴장을 감소 시킨다. 그것은이 프로토콜에서 설명 하는 중요 한 단계를 수행 하 여 쉽게 수행할 수 있습니다.
Introduction
지난 년 동안 심장 마비의 연구에서 실시 되었습니다 가능한 동물 모델1. 심장 마비의 대형 동물 모델에 비해, 작은 동물 모델 수많은 잠재적인 이점이 있다. 주택 및 유지 보수 비용 절감, 옆에 작은 동물 모델 때문에 덜 복잡 한 필요 시설2더 많은 연구를 액세스할 수 있습니다.
마우스 심장 마비 모델 쥐 모델과 동일한 이점의 많은 제공합니다. 또한에 감소 된 주택 비용3, 마우스 모델 혜택 관련 유전자 변형 및 녹아웃 (KO) 긴장의 가용성. 셀 형식 관련, 유도할 수 있는 코 또는 유전자 변형 전략의 가능성에서 심장 마비의 병 인을 공부 하 고 새로운 치료 regimens3을 식별 하려고 하는 귀중 한 도구가 마우스를 확인 합니다.
마우스 가운데 심장 마비의 모델에는 현재4사용, 가로 대동맥 수축 (TAC) Rockman5 에 의해 처음으로 설명 하는 압력 과부하 유발 왼쪽된 심 실 비 대 (LVH)1 을 생성 하는 기본 모델 , 3.이 모델의 가장 큰 장점은 LVH2층 리를 수 있도록 하는 기능입니다, 비록 왼쪽 심 실 개장 하는 전술에 대 한 응답에는 다른 마우스 긴장 중 변수. 특히, C57BL/6 마우스 개발 다른 긴장4,,67발생 하지 않을 수 있습니다 전술 후 빠른 LV 팽창 합니다.
전술 원인으로 달성 하는 고혈압의 갑작스런 발병은 약 50% 증가 LV 질량에 2 주 이내 빠르게 변조 LVH4의 개발을 목표로 하는 약리학 또는 분자 개입의 활동을 검사 허용. 전술에 의해 심한 고혈압의 급성 유도 않습니다 정확 하 게 진보적인 왼쪽된 심 실 비 대를 재현 하 고 대동맥 협 착 증 또는 동맥 고혈압의 임상 설정에서 관찰 개장. 그럼에도 불구 하 고,이 모델 많은 조사자에 의해 식별 하 고 심장 마비4소설 치료 목표를 수정 하는 데 사용 됩니다.
마우스에 전술 수행 LVH 및 후속 심장 마비2를 유도 하는 데 사용 하는 다른 기술에 대 한 필요한 것 보다 더 큰 외과 전문을 필요 합니다. 대부분 작성자 intubating 및 환기는 동물2,8, 더 요구 하 고 시간이 걸리는이 절차를이 수행 하 게 하 고 동물에 대 한 수술 부담을 추가 하 여이 절차를 수행 합니다. 몇 가지 조사 수술9,,1011에 대 한 간략 한 참조와 함께 그들의 연구에서 최소한 침략 적 전술을 사용 했습니다.
이 프로토콜의 목표는 단계별로 설명 하는 절차의 중요 한 단계를 강조 하는 쥐의 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 단순 하 고 사용 하기 쉬운 기술. 이러한 주요 단계에 따라, 하나 쉽게이 기술을 수행할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 프로토콜의 목표 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축에 대 한 수술 방법의 단계별 그림을 제시 하는입니다. 마우스에 가로 대동맥 수축의 자세한 기술 설명 다른 저자2,8에 의해 보고 되었습니다. 그러나이 수술을 수행 하는, 삽 관 법 및 동물의 환기. 삽 관 법-환기의 추가 단계를 사용 하 여 복잡성과 전체 절차의 기간은 증가 하 고 글로벌 스트레?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 실시간에 스위스 심장 재단의 그랜트 (N ° 32016)에 의해 지원 되었다
Materials
| Surgical microscope | Olympus | SZX2-TR30 | |
| Razor | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| Sutures: | |||
| Polypropylene 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| Polypropylene 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| Silk 6/0 ligature | FST | 18020-60 | |
| Polypropylene 4/0 | Ethicon | 8683 | |
| Polypropylene 5/0 | Ethicon | Z303 | |
| Drugs: | |||
| Ketamin | Merial | Imalgène 1000, LBM154AD | |
| Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
| Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
| Instruments: | |||
| Bone nippers | Fine Surgical Tools | 16101-10 | |
| Ligation aid | Fine Surgical Tools | 18062-12 | |
| Tying forceps | Fine Surgical Tools | 18026-10 | |
| Needle holder Crile-Wood | Fine Surgical Tools | 12003-15 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11003-12 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11002-12 | |
| Tissue forceps | Fine Surgical Tools | 11021-12 | |
| Microsurgery needle holder | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
| Microsurgery scissors | Fine Surgical Tools | 91501-09 | |
| Mayo scissors | Fine Surgical Tools | 14511-15 | |
| 11-blade knife | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
| RNA extraction and qPCR: | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit Fluorimetric RNA assay | Fisher Scientific | 10034622 | |
| RNA 6000 Nano kit | Agilent | 5067-1511 | |
| High Capacity cDNA kit | Fisher Scientific | 10400745 | |
| Taqman Master Mix | Fisher Scientific | 10157154 | |
| Taqman BNP primers | Fisher Scientific | Mm01255770_g1 | |
| Taqman ANP primers | Fisher Scientific | Mm01255747_g1 | |
| Taqman ACE primers | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 primers | Fisher Scientific | Mm00801666_g1 | |
| Taqman TGFb primers | Fisher Scientific | Mm01178820_m1 | |
| Taqman Gapdh primers | Fisher Scientific | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| Software: | |||
| GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
| Animal food | |||
| Complete diet for adult rats/mice | Safe | UB220610R |
References
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