Co transplantation de tissu ovarien humain avec des cellules endothéliales ingénieries : une combinaison de stratégie basés sur les cellules accéléré la Perfusion avec livraison directe Paracrine

Résumé

Pour certains patients, la seule option pour la préservation de la fertilité est cryopréservation de tissu ovarien. Malheureusement, revascularisation tardive sape la viabilité folliculaire. Nous présentons ici un protocole co transplantation de tissu ovarien humain avec des cellules endothéliales pour utilisation comme une stratégie axée sur la cellule qui combinerait accélérée de perfusion avec une livraison directe paracrine de molécules bioactives.

Résumé

L’infertilité est un effet secondaire fréquent de la chimiothérapie et/ou radiothérapie et pour certains patients, la cryopréservation d’ovocytes ou d’embryons n’est pas une option. Comme alternative, un nombre croissant de ces patients choisissent de cryopréserver des tissus ovariens pour autogreffe après récupération et remise. Malgré des améliorations dans les résultats chez les patients subissant une auto-transplantation de tissu ovarien cryopréservé, efficace revascularisation du tissu greffé demeure un obstacle majeur. Pour atténuer l’ischémie et ainsi améliorer les résultats chez les patients qui doivent subir une auto, nous avons développé une stratégie axée sur les cellules vasculaire pour accélérer la perfusion des tissus ovariens. Nous décrivons une méthode pour la transplantation de cellules endothéliales exogènes (ExECs) Co avec tissu ovarien cryopréservé dans un modèle de xénogreffe de souris. Nous étendre cette approche à employer des ExECs qui ont été conçus pour exprimer constitutivement hormone Anti-Müller (AMH), permettant ainsi soutenue paracrine signalisation entrée aux greffes de l’ovaires. Transplantation Co avec ExECs ont augmenté de volume folliculaire et le développement de follicules antraux améliorée, et exprimant l’AMH ExECs promu rétention des follicules primordiaux quiescentes. Cette stratégie combinée peut être un outil utile pour atténuer l’ischémie et moduler l’activation folliculaire dans le contexte de la préservation de la fertilité ou de stérilité dans son ensemble.

Introduction

Le cancer demeure parmi les principales causes de décès dans le monde développé, mais des décennies de recherches ont abouti à des progrès significatifs pour la plupart des types de cancer et dans certains cas presque doublé de survie taux¹. Malheureusement, les chimiothérapies sont souvent gonadotoxiques, appauvrissant la réserve de follicules primordiaux dans les ovaires et la réduction de la fertilité². Cette croissance de la population peut bénéficier de diverses méthodes de préservation de la fertilité dont la cryopréservation d’ovocytes ou d’embryons, cependant, les patients nécessitant un lancement rapide de la th....

Protocole

Toutes les procédures impliquant des sujets animaux ont été approuvés par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) au Weill Cornell Medical College. Toutes les expériences de xénotransplantation, à l’aide de tissus ovariens ont été effectuées conformément aux règlements et aux lignes directrices pertinentes. De tissu ovarien humain ont été recueilli chez des patients à la demande pour la chimiothérapie ou la radiothérapie pour le traitement du cancer ou de la transplantation de moelle épinière préalable. La Commission de révision institutionnelle (CISR) Comité du Weill Cornell Medical College a approuvé la collection de tissus pour usage autologue pote....

Résultats

Pour déterminer si la transplantation Co de ExECs fournit un avantage pour les tissus malades, bandes corticales ovariennes décongelés ont été divisés en morceaux de taille égale et implantés bilatéral en immuno-déprimées, de gamma NOD scid (NSG), souris. Avec un côté intégré dans un seul caillot de fibrine (aucun ECs) et les autres ExECs contenant (Figure 1 a), chaque souris a servi son propre témoin. ExECs ont été obtenus par l’isolement de l’endothélium pr.......

Discussion

Nous démontrons que co transplantation d’exECs fournit un avantage important pour la viabilité des tissus ovariens et fonction après xénogreffe chez la souris. Normes relatives à l’application clinique des auto-transplantation de tissu ovarien pour la préservation de la fertilité n’ont pas été ensemble et les paramètres optimaux (taille, site de transplantation, durée de la prothèse, etc.) ^{32 , 33 , 34} pour la récupérat.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Leibovitz' s L-15 moyen	Gibco	11415064
Antibiotique-antimycosique	Gibco	15240062	Anti-Anti X100
Saccharose	Sigma	S 1888
Fibrinogène	Sigma	F 8630	à partir de plasma bovin
Thrombine	Sigma	T 1063	à partir de plasma humain
DMSO	Sigma	D 2650
DMEM	Gibco	12491015
Enzyme Détachement cellulaire Milieu	Invitrogen	00-4555-56	Accutase
Film de paraffine plastique	Bemis NA		Parafilm M
Ruban de papier chirurgical 2,5 cm	3M	1530-1	Micropore
Ruban de papier chirurgical 1,25 cm	3M	1530-0	Micropore
Plastique perforé Ruban chirurgical 1,25 cm	3M	1527-0	Transpore
Monofilament Suture Résorbable	Covidien	UM-203	Biosyn
Suture Résorbable	Tressée Covidien	GL-889	Polysorb
Povidone-iode Solution USP 10 %	Purdue Products	67618-153-01	Bétadine Solution Écouvillon
Cryoviales	Nunc	377267	CryoTube
stérile oculaire lubrifiant	Dechra	17033-211-38	Puralube
1,7 ml micro-centrifugeuse tube	Denville	C-2172	Eppendorf
Système d’anesthésie	VetEquip	V-1 système de table avec balayage
Cellules endothéliales	Angiocrine Biosciences, Inc., San Diego, CA, USA		Isolé, transfecté avec E4-ORF-1 et cellules endothéliales marquées
Coloration trichrome	Sigma	HT15-1kt	Coloration Trichrome (Masson)
Kit Isolectine	Invitrogen	I32450	ISOLECTINE GS-IB4 De Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor&trade ; 647 Conjugué