Co transplantation de tissu ovarien humain avec des cellules endothéliales ingénieries : une combinaison de stratégie basés sur les cellules accéléré la Perfusion avec livraison directe Paracrine
Summary
Pour certains patients, la seule option pour la préservation de la fertilité est cryopréservation de tissu ovarien. Malheureusement, revascularisation tardive sape la viabilité folliculaire. Nous présentons ici un protocole co transplantation de tissu ovarien humain avec des cellules endothéliales pour utilisation comme une stratégie axée sur la cellule qui combinerait accélérée de perfusion avec une livraison directe paracrine de molécules bioactives.
Abstract
L’infertilité est un effet secondaire fréquent de la chimiothérapie et/ou radiothérapie et pour certains patients, la cryopréservation d’ovocytes ou d’embryons n’est pas une option. Comme alternative, un nombre croissant de ces patients choisissent de cryopréserver des tissus ovariens pour autogreffe après récupération et remise. Malgré des améliorations dans les résultats chez les patients subissant une auto-transplantation de tissu ovarien cryopréservé, efficace revascularisation du tissu greffé demeure un obstacle majeur. Pour atténuer l’ischémie et ainsi améliorer les résultats chez les patients qui doivent subir une auto, nous avons développé une stratégie axée sur les cellules vasculaire pour accélérer la perfusion des tissus ovariens. Nous décrivons une méthode pour la transplantation de cellules endothéliales exogènes (ExECs) Co avec tissu ovarien cryopréservé dans un modèle de xénogreffe de souris. Nous étendre cette approche à employer des ExECs qui ont été conçus pour exprimer constitutivement hormone Anti-Müller (AMH), permettant ainsi soutenue paracrine signalisation entrée aux greffes de l’ovaires. Transplantation Co avec ExECs ont augmenté de volume folliculaire et le développement de follicules antraux améliorée, et exprimant l’AMH ExECs promu rétention des follicules primordiaux quiescentes. Cette stratégie combinée peut être un outil utile pour atténuer l’ischémie et moduler l’activation folliculaire dans le contexte de la préservation de la fertilité ou de stérilité dans son ensemble.
Introduction
Le cancer demeure parmi les principales causes de décès dans le monde développé, mais des décennies de recherches ont abouti à des progrès significatifs pour la plupart des types de cancer et dans certains cas presque doublé de survie taux1. Malheureusement, les chimiothérapies sont souvent gonadotoxiques, appauvrissant la réserve de follicules primordiaux dans les ovaires et la réduction de la fertilité2. Cette croissance de la population peut bénéficier de diverses méthodes de préservation de la fertilité dont la cryopréservation d’ovocytes ou d’embryons, cependant, les patients nécessitant un lancement rapide de la thérapie contre le cancer et les patients prépubères ne sont pas admissibles pour ces options. Comme alternative, certains patients ont choisi de cryopréserver tissu ovarien avant d’entreprendre leur régime thérapeutique et sur la récupération et la rémission, auto-transplantation de tissus pour restaurer la fertilité3. Pourtant, à ce jour, survie du greffon et folliculaire sortie auto-TRANSPLATATION demeurent relativement faible4, principalement en raison de tissu ischémie et l’hypoxie5,6,7. Malgré les nombreux efforts visant à améliorer la viabilité des greffons de corticales ovariennes à l’aide des anti-oxydants8,9, pro-angiogénique cytokines10,11,12,1 3, ou des manipulations mécaniques14, ischémie greffon dans une post-transplantation de fenêtre de 5 à 7 jours sape la viabilité et la survie du greffon7. Pour y remédier, nous avons développé une stratégie de base de cellules pour faciliter l’anastomose des vaisseaux hôte et prothèse et ainsi accélérer une reperfusion de tissu ovarien.
En plus de l’accident ischémique de tissu ovarien greffé dans la fenêtre suivant la greffe, la perturbation de la signalisation inter folliculaire peut contribuer à l’appauvrissement de la piscine15,16. Car les cellules endothéliales exogènes (ExECs) contribuent à bateaux stable et fonctionnel dans la périphérie de la prothèse, ils présentent une opportunité unique de transmettre une entrée moléculaire définie au tissu transplanté. Comme une preuve de principe, ExECs ont été machinés pour niveaux express Super-physiologiques de l’hormone Anti-Müller (AMH), un membre de la superfamille de bêta (TGFβ) facteur de croissance transformant qui a été montré pour limiter la croissance folliculaire17. Comparaison de la distribution folliculaire dans les greffons transplantés conjointement avec le contrôle et les cellules exprimant l’AMH vérifie l’activité biologique et la puissance d’exECs machinés.
En résumé, en améliorant la greffe la viabilité et la suppression de mobilisation prématurée du pool de follicules, cette approche peut augmenter la productivité des tissus ovariens transplantés auto dans les patients subissant une préservation de la fertilité. De plus, la plate-forme ExEC permet interrogatoire expérimentale des régulateurs moléculaires qui ont été impliqués dans le développement folliculaire.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nous démontrons que co transplantation d’exECs fournit un avantage important pour la viabilité des tissus ovariens et fonction après xénogreffe chez la souris. Normes relatives à l’application clinique des auto-transplantation de tissu ovarien pour la préservation de la fertilité n’ont pas été ensemble et les paramètres optimaux (taille, site de transplantation, durée de la prothèse, etc.) 32 , 33 , 34…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Omar Alexander Man pour les illustrations.
L.M. a été soutenue par une bourse de pilote de la clinique de Cornell et de subvention de recherche translationnelle Science Center et l’ASRM.
Les auteurs tiennent à remercier James lab membres pour une lecture critique du manuscrit.
Materials
| Leibovitz’s L-15 medium | Gibco | 11415064 | |
| Antibiotic-Antimycotic | Gibco | 15240062 | Anti-Anti X100 |
| Sucrose | Sigma | S 1888 | |
| Fibrinogen | Sigma | F 8630 | from bovine plasma |
| Thrombin | Sigma | T 1063 | from human plasma |
| DMSO | Sigma | D 2650 | |
| DMEM | Gibco | 12491015 | |
| Enzyme Cell Detachment Medium | Invitrogen | 00-4555-56 | Accutase |
| Plastic paraffin film | Bemis NA | Parafilm M | |
| Surgical paper tape 2.5 cm | 3M | 1530-1 | Micropore |
| Surgical Paper tape 1.25 cm | 3M | 1530-0 | Micropore |
| Perforated plastic Surgical tape 1.25 cm | 3M | 1527-0 | Transpore |
| Monofilament Absorbable Suture | Covidien | UM-203 | Biosyn |
| Braided Absorbable Suture | Covidien | GL-889 | Polysorb |
| Povidone-iodine Solution USP 10% | Purdue Products | 67618-153-01 | Betadine Solution Swab Stick |
| Cryoviales | Nunc | 377267 | CryoTube |
| sterile ocular lubricant | Dechra | 17033-211-38 | Puralube |
| 1.7 ml micro-centrifuge tube | Denville | C-2172 | Eppendorf |
| Anasthesia system | VetEquip | V-1 table top system with scavenging | |
| Endothelial cells | Angiocrine Biosciences, Inc., San Diego, CA, USA | Isolated, transfected with E4-ORF- 1 and labeled endothelial cells | |
| Trichrome stain | Sigma | HT15-1kt | Trichrome Stain (Masson) Kit |
| Isolectin | Invitrogen | I32450 | isolectin GS-IB4 From Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor™ 647 Conjugate |
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