Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Поколения и по требованию начало деятельности острый приступ в грызунов и тканей человека

8.6K просмотров

DOI:

10.3791/57952

19 января 2019 г.

В этой статье

Краткое содержание

Острый захват модели имеют важное значение для изучения механизмов лежащие в основе эпилептиформный события. Кроме того способность генерировать эпилептиформный события по запросу предоставляет весьма эффективный метод для изучения точную последовательность событий, лежащие в основе их начала. Здесь мы описываем модели корковых захват острый 4-aminopyridine, создан в ткани человека и мыши.

Аннотация

Контроль изъятий остается сложной проблемой для медицинского сообщества. Чтобы добиться прогресса, исследователи нужен способ широко изучать динамику захват и расследовать его основополагающих механизмов. Острый захват модели удобны, предлагают возможность выполнять электрофизиологических записей и может генерировать большой объем электрографические захват как (во) событий. Многообещающие результаты от острой захват модели можно затем передовые модели хронической эпилепсии и клинических испытаний. Таким образом изучая изъятий в острый модели, которые точно повторяют электрографические и динамические подписи клинических конфискации будет необходимо для изготовления клинически значимых выводов. Изучение во события в моделях острый захват, приготовленный из тканей человека также имеет важное значение для создания результатов, которые клинически значимых. Основное внимание в настоящем документе уделяется корковых модель 4-AP благодаря своей универсальности в генерации противоречивых событий, как в естественных условиях , так и в пробирке исследования, а также в мышь и тканей человека. Методы в этом документе будет также описать альтернативный метод индукции захват с помощью нуль-мг2 + модели и предоставляют подробный обзор преимуществ и ограничений эпилептиформный как деятельности, созданных в различных острых захват модели. Кроме того воспользовавшись коммерчески доступных optogenetic мыши штаммов, Бриф (30 мс) светового импульса может использоваться для запуска противоречивых событий, идентичны тем, которые происходят спонтанно. Аналогичным образом 30-100 мс затяжек нейромедиаторов (гамма-амино-масляная кислота или глутамата) может применяться к человеческой ткани, чтобы спровоцировать приступ события, которые идентичны происходит спонтанно. Возможность вызвать приступ события по требованию в модели острого захват предлагает новообретенным способность соблюдать точную последовательность событий, которые лежат в основе динамики инициации захвата и эффективно оценить потенциальные Антиконфискации терапии.

Введение

Острый захват модели можно успешно воспроизвести электрографические подписей напоминает противоречивых событий, наблюдаемые в электроэнцефалограммы (ЭЭГ) лиц, испытывающих захват. Исследователи используют эти приступ как события (далее именуемая «приступ события») как суррогаты для захвата событий1. Клинически приступ события служат в качестве надежного прокси для захвата событий после изъятия являются неврологическое расстройство, которое исходит от мозга. В группе контроля эпилепсии неврологи полагаться при обнаружении противоречивых событий для подтверждения эпилептогенных область мозга и изолировать его резекции2. В ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все исследования, с участием пациентов была выполнена под протоколом, утвержденным Советом университета здравоохранения сети исследований этики, в соответствии с Хельсинкской декларации. Процедуры с участием животных были в соответствии с принципами, Канадского совета по лечению животных и утвержденных Комитетом Krembil исследовательский институт животное уход.

1. Протокол I: острые в vitro захват модель

  1. Подготовка решений диссекции и искусственных спинномозговой жидкости
    1. Carbogenate ультрачистая вода (вода фильтруется с удельным сопротивлением 18.2 MΩ·cm) с Карбоген (95% O2/5% CO

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Применение 100 мкм 4-AP для хорошего качества (неповрежденные) 450 мкм размера коры мозга фрагменты из несовершеннолетних VGAT-ChR2 надежно индуцированной повторяющихся приступ событий мыши (s > 5) в течение 15 мин (Рисунок 1АИ). Применение 100 мкм 4-AP к фрагментам низкого качества привело к разрывным события или пики активности (Рисунок 1Aii). В среднем 40% кусочков из каждой расчлененных мыши мозга успешно сгенерирован прот.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Срезы мозга относятся с proconvulsant наркотиков или изменены фаго perfusate увеличить нейросеть в возбудимости и содействовать осадков во события (электрографические захват подобных). Для мышей предпочтительным корональных ломтики области соматосенсорные Мотор должен содержать поясной коры, зона 2 (CG), но не в retrosplenial зоне (РС); Эти анатомические маркеры помогает определить спектр корональные срезы, которые лучше всего подходят для вызывающих приступ события. Дополнительные модификации для мышей ткани — пополам д.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Эта работа была поддержана канадской институтов медицинских исследований (СС 119603 Питер л Карлин и Taufik A. Valiante), Института мозга Онтарио (чтобы Taufik а. Valiante) и Mightex студенческий исследовательский грант (до Майкл Чанг). Мы хотели бы поблагодарить Liam долго за его помощь в съемках видео рукопись. Мы хотели бы признать Paria Baharikhoob, Abeeshan Selvabaskaran и Shadini Dematagoda за их помощь в составлении фигур и таблиц в этой рукописи. 1A цифры, , и 6A являются все оригинальные фигуры, сделанные из данных, опубликованных в Чанг et al. 16.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Пентобарбитал натрияН/ДПриобретен у поставщиков Западной больницы Торонто
Шприц 1 ммН/ДПриобретен в UT Med Store
25G 5/8" стерильная иглаН/Д Н/ДПриобретен в UT Med Store
Лезвие бритвы с одним лезвием (2x)Н/ДН/ДПриобретен в UT Med Store
Мгновенный клейН/ДПриобретен в UT Med Store
Бумага для линзН/ДКуплен в UT Med
Store Стеклянная чашка Петри (2x)Н/ДКуплен в UT Med
Store Щипцы для заноз (2x)Н/ДПриобретен в UT Med Store
Ручка из ПВХ микрошпательН/ДКуплен в UT Med
Магазинная микроложка с плоским концомН/ДПриобретена через UT Med Store
Щетка для детализации 5/0Н/ДКуплена в художественном бутике
Переводная пипетка с широким отверстиемН/ДПриобретена через UT Med
Store Стоматологический пинцетн/дПриобретен через UT Med
Store Термометр (цифровой)Н/ДН/ДПриобретено на Amazon.ca
Проверьте бак для карбогена (95%O2/5%CO2Н/ДН/ДПриобретено у поставщиков Западного госпиталя Торонто
VibratomeLeicaн/дПриобретено через инкубационную камеру для срезов мозга поставщиков Западного госпиталя Торонто
(также известное как хранитель среза мозга) Scientific Systems Design IncN/A
Sodium Chloride (NaCl)N/A/A N/AПриобретено в UT Med
Store Бикарбонат натрияN/A/AПриобретен в UT Med Store
DextroseN/A/AПриобретен в UT Med
Store Хлорид калия (KCl)N/A/AПриобретен в UT Med Store
Сульфат магния (MgSO4 H2O)N/AN/AПриобретен в UT Med
Store Моноосновной моногидрат фосфата натрия (HNaPO4· H2O)N/AN/AПриобретено через UT Med
Store Calcium Chloride (CaCl2· 2H2O)N/A/AПриобретено в UT Med Store
SucroseN/A/AПриобретено в UT Med Store
Н Н Н Н Н Н Н Н Н Н N N N N N N

Ссылки

  1. Jefferys, J. G. R. Advances in understanding basic mechanisms of epilepsy and seizures. Seizure. 19 (10), 638-646 (2010).
  2. Fujiwara, H., et al. Resection of ictal high-frequency oscillations leads to favorable surgical outcome in pediatric epilep....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

4 APACSF