誘因とマウス実験近視モデルの評価
Summary
このプロトコルはマウス実験近視モデル新たに設計を使用してマウスで誘導眼鏡と眼のパラメーター測定の安定性と再現性のある結果を達成するために必要な技術の完全なプロセスをについて説明します。
Abstract
近視のマウスモデルでは、比較的簡単な遺伝的操作のため近視研究の強力なツールをすることができます。動物で近視を誘発する 1 つの方法は、週間 (レンズによる近視、LIM) 明確なマイナス レンズを目の前に置くことです。ただし、研究所から研究所する誘因と評価の現存するプロトコルによって異なります。ここでは、新たに設計を使用してマウスの LIM 眼鏡を誘導する、実践的な再現性のある方法について述べる。安定しながらマウスの目の前に、レンズにより、レンズ洗浄用または局所にメソッドの修正は薬剤管理です。表現型は、堅牢で効率的との差異は小さい。ここで説明した方法は、実験のため可能な限りの期間を拡張する離乳直後後のマウスに適用できます。我々 はまた与えた技術屈折と軸の長さの測定で再現性のある結果を達成するためのアドバイスします。ここで説明した手順のプロトコルと思います、詳しい記事は近視と近視実験をよりスムーズに行う研究室データに匹敵する研究者を助けることができます。
Introduction
近視の有病率が近年、その発症と進行のメカニズムはまだほとんど知りませんが1。近視の最も特徴的な表現型は、網膜の合併症や2も失明のリスクを増加させる軸長さ (AL) の伸びです。近視の病態を理解し、効果的な治療法の開発、堅牢な近視眼的な動物モデルと安定した表現型の評価が必要です。
動物で近視状態を誘導するため簡単に、2 つの方法が存在する: フォーム剥奪の近視 (FDM) とレンズによる近視 (LIM)3。前者は目の前にディフューザーを配置または近視の表現型の結果、眼球の正常な発展に影響を与えるイメージをあいまいにする眼瞼縫合糸します。後者の場所は、網膜の後ろに焦点を移動する目の前にレンズを引いた。網膜は、フォーカスのシフトを検出し、網膜とフォーカル ポイントを再配置する眼球の伸長します。FDM、まぶたが閉じているか、目の前にディフューザーを修正されています後ほとんどないさらにメンテナンスが必要です。林は、レンズがそれを透明に保つために洗浄するため取られる必要があります。したがって、FDM は誘導されることが技術的には比較的簡単です。FDM と LIM のメカニズムが異なるし、どの方法を模倣人間で近視よりはまだ議論3中。LIM の強みの一つは、FDM、少なくともマウス4の場合に比べてより強い表現です。
近視を誘導するために使用されている動物は、マウス4モルモット8、木ジネズミ目7サル6雛5に含まれます。繁殖のため低コスト、豊富なの入手可能な抗体遺伝子操作の可能性を考慮したマウスことができた最初の選択肢近視の動物モデルとして。しかし、他のより大きい動物と比較して、レンズまたはマウスの目の前にディフューザーを修正は比較的困難など若いマウスの特に離乳後。局所投与または複数の中間アイ測定を必要とする実験、またリムーバブル フレームに必要なとしてます。もう一つの課題は、洗練された技術とデバイスを評価する必要がありますマウスの眼球の小さな形態変化です。までに、異なる誘導と異なる研究チームで使用されるプロトコルを測定を比較し、研究所全体の結果を繰り返すは難しいです。詳細で標準的なプロトコルが必要です。
以前の作品は、レンズまたは接着する9、10とヘッド マウント型ゴーグル フレーム11,12のステッチなど、マウスの目の前にディフューザーを修正する複数の方法を説明します。我々 は堅牢で効率的なマウス実験近視を誘発する ameliorated プロトコルを開発する当社の新設計フレームと存在するヘッド マウント型ゴーグル テクニクス11,12,13を組み合わせます。プロトコルは、生後 21 (p21) 離乳後すぐに若いマウスに適用できます。我々 も屈折や AL などの表現型の安定性と正確な評価プロセスの最適化。我々 はこの標準化されたプロトコルは、近視眼的なマウスの近視研究のより簡単にアクセス可能なモデルを作成する助けることができる願っています。
Protocol
Representative Results
Discussion
このプロトコルのいくつかのステップは確実にマウスの頭に安定して固定するのに眼鏡を偉大な注意を払われる必要があります。骨膜は、歯科用接着システムを使用する前に完全に削除する必要があります。頭蓋骨には、血液も注意してクリーンアップする必要があります。接着剤のアプリケーションの直後に若干の調整は受け入れ、頻繁系接着剤が乾燥する前にスティックを移動しないで?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SDOCT、屈折、角膜曲率、M. 宮内; 立体骨組データを再現するため氏山椒魚の測定に関するアドバイス ・ f ・ Schaeffel についてのアドバイスありがとうティルソン ・ パルデューK. 坪田;裕一田中;近藤;C. 正田;M. 伊吹。Y. 美和。Y. 萩原;石田;祐富田;Y. 堅田;E. 四倉;高橋;泰王重要な議論のため。この仕事は科学研究 (科研費、数 15 K 10881) 文部科学省からトケラウ諸島に助成金 inAid によって支えられました。この作品は坪田研究所 (東京) から近視研究助成でもサポートされます。
Materials
| screw | NBK | SNZS-M1.4-10 | |
| washer | MonotaRO | 42166397 | |
| nut | MonotaRO | 42214243 | |
| stick | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| frame | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| lenses | RAINBOW CONTACT LENS | none | customized for mice use by the company |
| cyanoacrylate glue | OK MODEL | MP 20g | |
| dental adhesive resin cement | SUN MEDICAL | super bond | contains the etching liquid used for removing the periosteum of the mouse skull |
| infrared photorefractor | Steinbeis Transfer Center | none | designed and offered by Dr. Frank Schaeffel from university of Tübingen |
| Spectral domain OCT | Leica | R4310 | |
| Tropicamide, Penylephrine Hydrochloride solution | Santen | Mydrin-P | |
| midazolam | Sandoz K.K. | SANDOZ | components for the anesthetic |
| medetomidine | Orion Corporation | Domitor | components for the anesthetic |
| butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | components for the anesthetic |
| 0.1 % purified sodium hyaluronate | Santen | Hyalein | |
| atipamezole hydrochloride | Zenoaq | antisedan |
References
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