유도 및 실험적인 근 Murine 모델의 평가

Summary

이 프로토콜에서 우리 실험 근 유도 사용 하 여 마우스에 새롭게 설계 된 안경, 눈 매개 변수 측정에 안정적이 고 재현 가능한 결과 달성 하기 위한 필요한 기술의 전체 과정을 설명 합니다.

Abstract

근 시의 murine 모델 비교적 쉬운 유전자 조작으로 인해 근 연구를 위한 강력한 도구를 수 있습니다. 동물에서 근 시를 유발 하는 한 가지 방법은 주 (유도 하는 렌즈 근 시 임) 눈 앞에서 렌즈 뺀 분명 넣어 하는 것입니다. 그러나, 유도 및 평가 대 한 현존 프로토콜 연구실 실험실에서 다릅니다. 여기, 우리가 새로 설계 하는 마우스를 사용 하 여에 임 안경 유도를 매우 실용적이 고 재현 가능한 방법을 설명 합니다. 방법 수정 하면서 마우스 눈 앞 안정적으로 렌즈 수 있습니다 국 소 또는 청소를 위해 이륙 하는 렌즈 관리 마약. 표현 형 강력 하 고 효율적 이며 분산 작습니다. 여기 설명 하는 방법은 마우스는 실험에 대 한 가능한 기간 연장 이유 후 바로 적용할 수 있습니다. 우리는 또한 준 기술 굴절 및 축 길이 측정에서 재현 가능한 결과 달성 하기 위한 조언. 우리 여기에서 설명 하는 단계별 프로토콜 희망과 상세한 기사 myopia 근 시 실험을 더 원활 하 게 수행 하 고 데이터 비교 연구소에서 연구원을 도울 수 있다.

Introduction

근 시의 보급 최근에 극적으로 증가 했다, 그것의 발병 및 진행의 메커니즘은 여전히 크게 unknow¹. 근 시의 가장 특징적인 표현 형의 축 길이 (알), 망막 합병증 이나 심지어 실명²에 대 한 위험 증가 신장 이다. 근 시의 병 인을 이해 하 고 효과적인 치료법을 개발에 강력한 근 시 동물 모델 및 안정적인 표현 형 평가 필요 하다.

짧게, 두 가지 방법을 유도 하는 동물에서 근 시 상태에 대 한 존재: 모양 박탈 근 시 (FDM)와 렌즈 유도 근 (임)³. 전 눈 앞 디퓨저를 장소 또는 근 표현 형에 따른 안구의 정상적인 발전을 좌우 하는 이미지를 보이지 않게 하기 위해 눈 꺼 풀 sutures. 렌즈는 망막 뒤에 초점을 이동 하는 눈 앞에 마이너스 후자의 장소. 망막 초점의 변화를 감지 하 고 망막 및 초점을 다시 맞추고 하 안구 elongates. FDM, 눈 꺼 풀 닫히거나 디퓨저, 눈 앞에서 수정 되었습니다 후 거의 추가 정비 필요 합니다. 임, 렌즈 투명 유지 하기 위해 청소를 위해 이륙 해야 합니다. 따라서, FDM 기술적으로 유도를 상대적으로 쉽습니다. 그러나, FDM과 임의 메커니즘은 서로 다른, 그리고 어떤 방법을 모방한 인간의 근 시 더 나은 아직 논쟁³. 임의 장점 중 하나는 마우스⁴의 경우 적어도 FDM, 비해 강한 표현 형.

근 시 유도에 사용 된 동물 등 여자⁵, 원숭이⁶, 트리 shrews⁷, 기니 돼지⁸, 마우스⁴. 유전자 조작, 풍부한 제공 항 체, 그리고 번 식에 대 한 낮은 비용의 가능성을 고려 하면 쥐 되었을 수 있습니다 첫 번째 선택 myopia의 동물 모델. 그러나, 다른 더 큰 동물에 비해, 렌즈 또는 마우스 눈 앞 디퓨저 수정은 상대적으로 젊은 마우스 오른쪽 등 특히 어려운 이유 후. 국 소 의약품 안전 청 또는 여러 중간 아이 측정을 필요로 하는 실험, 이동식 수 프레임에 필요한 이기도 합니다. 또 다른 도전은 정교한 기술 및 평가 하는 장치는 마우스 안구의 작은 형태학 변화 이다. 날짜 하려면, 다른 유도 및 다른 연구 팀에서 사용 되는 프로토콜을 측정 그것은 어렵게 만들 비교 하 고 결과 반복 하 여 실험실에서. 세부 표준 프로토콜은 필요 합니다.

이전 작품 렌즈 또는 확산 기⁹,¹⁰ 및 머리 거치가 글 프레임^11,12바느질을 붙이는 등 마우스 눈 앞에서 해결 하기 위해 여러 방법을 설명 합니다. 쥐에 강력 하 고 효율적인 실험 근 시 유도 위한 ameliorated 프로토콜을 개발 하기 위해 우리의 새롭게 설계 된 프레임에 함께 존재가 글 헤드 장착 기술^11,12,13 하 고. 프로토콜은 출생 후 하루 21 (p21) 이유 직후 젊은 쥐에 적용할 수 있습니다. 우리는 또한 고기 굴절 등 알의 안정적이 고 정확한 평가 위해 프로세스를 최적화 합니다. 우리는이 표준화 된 프로토콜 근 쥐 근 시 연구에 대 한 더 쉽게 접근할 수 있는 모델을 만들 수 있습니다 바랍니다.

Protocol

모든 절차는 게이오 대학의 학부의 동물 연구 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 ARVO 문을 안과 및 비전 연구, 동물 실험에서 게이오에 기관 지침에 동물의 사용에 대 한 준수 대학, 그리고 동물 연구: 연구에 있는 동물의 사용에 대 한 보고의 Vivo 실험 (도착) 지침. 1. 쥐에 대 한 안경 조립 안경 (그림 1a) 조립에 필요한 부품을 준비 합니다. 각 마우스?…

Representative Results

에 먼저, 모든 필요한 부품 (그림 1a) 준비 하는 경우 확인 합니다. 조립된 안경의 작품의 예는 그림 1b에서 표시 됩니다. 프레임과 너트의 본체를 제외한 모든 다른 부품은 각 마우스에 대 한 일회용입니다. 완성 된 안경의 집합 그림 1 c에 표시 됩니다. 다른 연령대와 마우스에 맞게 두 프레임 사이의 각도 ?…

Discussion

있는지 확인 하려면 마우스 머리에 안정적으로 고정 될 안경,이 프로토콜의 여러 단계 큰 관심을 지불 될 필요가 있다. 과 치과 접착제 시스템을 사용 하기 전에 완전히 제거 되어야 합니다. 두개골에 피는 또한 주의 정리 될 필요가 있다. 약간 미세 하 게 조정 하는 것은 직후에 접착제의 응용 프로그램 허용, 접착 시스템을 건조 하기 전에 자주 메모리를 이동 하지 마십시오. 신중 하 게, 접착 시스…

Materials

screw	NBK	SNZS-M1.4-10
washer	MonotaRO	42166397
nut	MonotaRO	42214243
stick	DMM Make	none	designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make.
frame	DMM Make	none	designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make.
lenses	RAINBOW CONTACT LENS	none	customized for mice use by the company
cyanoacrylate glue	OK MODEL	MP 20g
dental adhesive resin cement	SUN MEDICAL	super bond	contains the etching liquid used for removing the periosteum of the mouse skull
infrared photorefractor	Steinbeis Transfer Center	none	designed and offered by Dr. Frank Schaeffel from university of Tübingen
Spectral domain OCT	Leica	R4310
Tropicamide, Penylephrine Hydrochloride solution	Santen	Mydrin-P
midazolam	Sandoz K.K.	SANDOZ	components for the anesthetic
medetomidine	Orion Corporation	Domitor	components for the anesthetic
butorphanol tartrate	Meiji Seika Pharma	Vetorphale	components for the anesthetic
0.1 % purified sodium hyaluronate	Santen	Hyalein
atipamezole hydrochloride	Zenoaq	antisedan