एक संशोधित गैर सीवन कफ तकनीक का उपयोग कर Murine ग्रीवा महाधमनी प्रत्यारोपण मॉडल
Summary
यहाँ, हम एक गर्भाशय ग्रीवा murine मॉडल में गैर सीवन कफ तकनीक का उपयोग कर चूहों में विषमस्थानिक महाधमनी प्रत्यारोपण का एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इस मॉडल का उपयोग पुरानी एलोग्रैफ्ट वास्कुलोपैथी (सीएवी) की अंतर्निहित विकृति का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है और इसके गठन को रोकने के लिए नए चिकित्सीय एजेंटों का मूल्यांकन करने में मदद कर सकता है।
Abstract
शक्तिशाली इम्यूनोसप्रेसिव प्रोटोकॉल की शुरूआत के साथ, तीव्र अस्वीकृति एपिसोड की रोकथाम और चिकित्सा में अलग-अलग अग्रिम संभव हैं। हालांकि, पिछले दशकों में प्रतिरोपित ठोस अंगों के दीर्घकालिक परिणामों में केवल मामूली सुधार देखा जा सकता है। इस संदर्भ में, क्रोनिक एलोग्रैफ्ट वास्कुलोपैथी (सीएवी) अभी भी हृदय, गुर्दे और फुफ्फुसीय प्रत्यारोपण में देर से अंग विफलता के प्रमुख कारण का प्रतिनिधित्व करता है।
इस प्रकार अब तक, CAV विकास के अंतर्निहित रोगजनन स्पष्ट नहीं है, समझा क्यों प्रभावी उपचार रणनीतियों वर्तमान में याद कर रहे हैं और प्रासंगिक प्रयोगात्मक मॉडल के लिए एक की जरूरत पर बल देने के क्रम में अंतर्निहित pathophysiology के लिए अग्रणी अध्ययन करने के लिए CAV गठन. निम्नलिखित प्रोटोकॉल एक संशोधित गैर सीवन कफ तकनीक का उपयोग कर एक murine hetertopic गर्भाशय ग्रीवा महाधमनी प्रत्यारोपण मॉडल का वर्णन करता है। इस तकनीक में, वक्ष महाधमनी का एक खंड सही आम ग्रीवा धमनी में interpositioned है. गैर-सीवन कफ तकनीक के उपयोग के साथ, जानने के लिए एक आसान और पुनरुत्पाद्य मॉडल स्थापित किया जा सकता है, सीवन संवहनी सूक्ष्म एनास्टोमोस के संभावित विषमता को कम कर सकता है।
Introduction
पिछले छह दशकों में, ठोस अंग प्रत्यारोपण एक प्रयोगात्मक प्रक्रिया से अंत चरण अंग विफलता1के उपचार के लिए देखभाल के एक मानक के लिए विकसित किया गया है। एंटीमाइक्रोबियल एजेंटों, शल्य चिकित्सा तकनीकों और इम्यूनोसप्रेसिव रेजीमेंटों में प्रगति के कारण, पिछले दशकों में ठोस अंग प्रत्यारोपण की प्रारंभिक सफलता दर में काफी वृद्धि हुई है2.
हालांकि, लंबे समय तक भ्रष्टाचार जीवित रहने की दर में एक ही तरीके से काफी सुधार नहींहुआ है 3. सीएवी का विकास दीर्घकालिक अस्तित्व को सीमित करने वाला प्रमुख कारक है4,5,6. इस विकृति चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं से मिलकर एक गाढ़ा neointimal परत के गठन की विशेषता है, पोत के प्रगतिशील संकुचन और प्रत्यारोपित ठोस अंग के लगातार malperfusion के लिए अग्रणी. हृदय प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं में, CAV घावों प्रत्यारोपण7के बाद 3 साल रोगियों के 75% तक में निदान किया जा सकता है।
सीएवी की पैथोफिजियोलॉजी अभी तक पूरी तरह से समझ में नहीं आ रही है। यह कई इम्यूनोलॉजिकल और गैर-प्रतिरक्षा कारकों से संबंधित प्रतीत होता है, जिससे बाद के एंडोथेलियल सक्रियण और रोग8के साथ एंडोथेलियल क्षति होती है। इस प्रकार अब तक, कोई कारण उपचार विकल्प CAV की रोकथाम के लिए मौजूद है, एक reproduible छोटे पशु मॉडल के लिए की जरूरत पर बल देने के क्रम में गठन और CAV के संभावित चिकित्सा का अध्ययन.
murine महाधमनी प्रत्यारोपण मॉडल के उपयोग के साथ, घावों की तरह CAV प्रत्यारोपण के बाद 4 सप्ताह देखा जा सकता है. उन घावों में मुख्य रूप से संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं से मिलकर बनता है, जिससे मानव विकृति जैसा होता है। ट्रांसजेनिक की एक विस्तृत विविधता की वजह से और चूहों बाहर दस्तक, प्रत्यारोपण जुड़े रोगों में माउस मॉडल का उपयोग नए चिकित्सीय विकल्पों की पहचान करने और उनके विकास को समझने के लिए एक अनूठा अवसर प्रदान करता है। हालांकि प्रतिरोपित वाहिकाओं के छोटे व्यास के कारण, माउस मॉडल का उपयोग आमतौर पर लंबे समय तक सीखने के घटता और एक प्रारंभिक उच्च जटिलता दर9के साथ जुड़ा हुआ है। गैर सीवन कफ तकनीक की शुरूआत के साथ, ऑपरेशन के इस सबसे चुनौतीपूर्ण भाग को सुविधाजनक बनाया जा सकता है और एनास्टोमोसिस का व्यास स्थिर रखा जाता है10,11.
Protocol
Representative Results
Discussion
जीर्ण एलोग्रैफ्ट वाहिकाविकृति हृदय के ठोस अंग प्रत्यारोपण के बाद देर से कलम हानि का प्रमुख कारण है और संभावना गुर्दे और फेफड़ों allografts8. इस प्रकार अब तक, सीएवी के गठन को रोकने के लिए कोई कारण चिकि?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
कोई नहीं.
Materials
| Balb-c Mice (H2-d) | Charles River | Strain# 028 | Donor animal |
| Bipolar cautery system | ERBE | ICC 50 / 20195-023 | Bipolar cautery |
| C57BL/6J (H-2b) | Charles River | Strain# 027 | Recipient animal |
| Halsey Needle Holders | FST | 12501-12 | Needle Holder |
| Halsted-Mosquito Forceps | AESCULAP | BH111R | Curved Clamp |
| Medical Polyimide Tubing | Nordson MEDICAL | 141-0031 | Cuff-Material |
| Micro Serrefines | FST | 18055-04 | Micro Vessel Clip |
| Micro-Adson Forceps (serrated) | FST | 11018-12 | Standard Forceps |
| Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps | FST | 18057-14 | Clipapplicator |
| S&T Forceps – SuperGrip Tips (Angled 45°) | S&T | 00649-11 | Fine Forceps |
| S&T Vessel Dilating Forceps – Angled 10° (Tip diameter 0.2 mm) | S&T | 00125-11 | Vesseldilatator |
| Schott VisiLED Set | Schott | MC 1500 / S80-55 | Light |
| Stereoscopic microscope | ZEISS | SteREO Discovery.V8 | Microscope |
| Student Fine Scissors / Surgical Scissors – Sharp-Blunt | FST | 91460-11 / 14001-12 | Standard Sissors |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (curved, 8.5 cm) | FST | 15004-08 | Microsissors (curved) |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (straight, 8.5 cm) | FST | 15003-08 | Microsissors (straight) |
References
- Rana, A., et al. Survival benefit of solid-organ transplant in the United States. JAMA Surgery. 150 (3), 252-259 (2015).
- Rana, A., Godfrey, E. L. Outcomes in Solid-Organ Transplantation: Success and Stagnation. Texas Heart Institute Journal. 46 (1), 75-76 (2019).
- Meier-Kriesche, H. U., Schold, J. D., Srinivas, T. R., Kaplan, B. Lack of improvement in renal allograft survival despite a marked decrease in acute rejection rates over the most recent era. American Journal of Transplantation. 4 (3), 378-383 (2004).
- Bagnasco, S. M., Kraus, E. S. Intimal arteritis in renal allografts: new takes on an old lesion. Current Opinion in Organ Transplantation. 20 (3), 343-347 (2015).
- Hollis, I. B., Reed, B. N., Moranville, M. P. Medication management of cardiac allograft vasculopathy after heart transplantation. Pharmacotherapy. 35 (5), 489-501 (2015).
- Verleden, G. M., Raghu, G., Meyer, K. C., Glanville, A. R., Corris, P. A new classification system for chronic lung allograft dysfunction. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (2), 127-133 (2014).
- Ramzy, D., et al. Cardiac allograft vasculopathy: a review. Canadian Journal of Surgery. 48 (4), 319-327 (2005).
- Skoric, B., et al. Cardiac allograft vasculopathy: diagnosis, therapy, and prognosis. Croatian Medical Journal. 55 (6), 562-576 (2014).
- Koulack, J., et al. Development of a mouse aortic transplant model of chronic rejection. Microsurgery. 16 (2), 110-113 (1995).
- Rowinska, Z., et al. Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation – An Instructional Video. Journal of Visualized Experiments. (128), (2017).
- Dietrich, H., et al. Mouse model of transplant arteriosclerosis: role of intercellular adhesion molecule-1. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 20 (2), 343-352 (2000).
- Mähler Convenor, M., et al. FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Laboratory Animals. 48 (3), 178-192 (2014).
- Ollinger, R., et al. Blockade of p38 MAPK inhibits chronic allograft vasculopathy. Transplantation. 85 (2), 293-297 (2008).
- Thomas, M. N., et al. SDF-1/CXCR4/CXCR7 is pivotal for vascular smooth muscle cell proliferation and chronic allograft vasculopathy. Transplant International. 28 (12), 1426-1435 (2015).
- Ollinger, R., et al. Bilirubin: a natural inhibitor of vascular smooth muscle cell proliferation. Circulation. 112 (7), 1030-1039 (2005).
- Segura, A. M., Buja, L. M. Cardiac allograft vasculopathy: a complex multifactorial sequela of heart transplantation. Texas Heart Institute Journal. 40 (4), 400-402 (2013).
- McDaid, J., Scott, C. J., Kissenpfennig, A., Chen, H., Martins, P. N. The utility of animal models in developing immunosuppressive agents. European Journal of Pharmacology. 759, 295-302 (2015).
- Shi, C., Russell, M. E., Bianchi, C., Newell, J. B., Haber, E. Murine model of accelerated transplant arteriosclerosis. Circulation Research. 75 (2), 199-207 (1994).
- Koulack, J., et al. Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis. Clinical Immunology and Immunopathology. 80 (3 Pt 1), 273-277 (1996).
- Maglione, M., et al. A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis. Surgery. 141 (5), 682-689 (2007).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. Journal of Visualized Experiments. (92), e50753 (2014).
- Nakao, A., Ogino, Y., Tahara, K., Uchida, H., Kobayashi, E. Orthotopic intestinal transplantation using the cuff method in rats: a histopathological evaluation of the anastomosis. Microsurgery. 21 (1), 12-15 (2001).
