肿瘤病理学鼠肺的灌注和膨胀
Summary
该方法旨在为小鼠肺的灌注、膨胀和固定提供一种简单高效的方法，用于检查肺肿瘤病理学和对肺转移的评价。
Abstract
评估肺组织学的能力对肺癌研究和癌症转移领域至关重要。同样重要的是，在不牺牲所采购组织质量的情况下，从研究中快速有效地进行尸检。本协议的目标是提出一种方法，快速灌注，充气，并固定小鼠肺下游的病理学分析。这种方法不能规范肺部膨胀：因此，它不需要任何特殊的程序或设备，而是简单地通过气管直接灌输固定后，通过心脏灌注。这允许充分估计肿瘤大小，病理学和评分。这也允许在肺组织固定之前收集冷冻组织。这种方法是有限的，因为它不允许以后的肺的形态定量：然而，它足以从基因工程小鼠模型（GEMM）、合成模型以及异种移植肿瘤和转移研究进行肺肿瘤分析。
Introduction
从复杂的 GEMM 到致癌素诱导模型，再到合成和异种移植模型，存在各种小鼠模型，其中癌细胞通过内脏、胸内、尾静脉或其他方法在肺内注射。所有这些模型都有着对肺病理学和病理学进行病理学评估的共同需要。因此，有必要有一个强大而快速的方法，在给肺注入时对小鼠进行尸检，以去除多余的血液，并充气和固定肺部，以清晰地可视化肺部结构。速度是这个过程的关键组成部分，因为可能需要在一个时间点从几十只小鼠身上收集肺部。此程序可以在每个鼠标不到 6 分钟内执行。
虽然这个程序是足以评估肿瘤组织学，它不建议那些谁想要执行立体学或肺部的形态测量。这种测量要求肺膨胀标准化，肺的绝对表面积、绝对体积、肺活体大小和1号的计算也是如此。这种方法对于某些成像方法也不理想。例如，通过μCT对肺部进行成像，以便进行肺活体测量分析，要求肺部保持充满空气2。当空气空间和尺寸的保存是主要关注，建议修复肺部的灌注脱水技术3，4。这种模型最大的担忧之一是肺壁破裂的可能性，减少其在肺气肿研究中的使用：然而，建议的肺部固定程序，以研究肺气肿仍然相当相似，因为它建议修复肺部，无论是通过在恒定的液体压力下10%的体温（类似于这里描述的协议）或原位固定5。
这里描述的程序的优点是，它不需要恒定的液体压力，而是充气肺，直到他们完全扩大，从而减少了手术所需的时间。这里的程序与毒理病理学学会军械库建议的方法非常相似，该协会成立了一个小组委员会，为毒理学研究推荐最佳的肺固定方法。这个小组委员会中的大多数科学家建议用注射器在体内灌输来固定肺部，尽管关于肺留在固定6中的时间有不同的建议。因此，在存在多种肺部膨胀和固定方法的同时，本文所述的方法被认为是快速膨胀和固定肺部以进行下游肿瘤病理学评估的最佳方法。
Protocol
Representative Results
Discussion
上述用于小鼠肺的灌注、膨胀和固定的程序是快速高效地准备小鼠肺进行肺肿瘤病理学和病理分析的理想方法。该程序不需要任何特殊设备，每只鼠标可在 6 分钟内完成。该程序不需要固定的通货膨胀量，也不要求恒定的流动压力。由于此程序不标准化，因此不建议希望对肺部进行固态或形态学分析。需要这种标准化的程序已更好地描述1，7。
<p clas…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本出版物中报道的研究得到了国家促进转化科学中心的支持，奖励编号为UL1TR003096（MDE）、国家心脏、肺和血液研究所肺病培养计划5T32HL134640（MLD）的博士前研究金。
Materials
| 10% buffered formalin | Fisher | 23-245685 | |
| 22 G Needle | BD | 305155 | |
| 3 mL syringe | BD | 309656 | |
| 70% Ethanol | Decon | 2405 | |
| Forceps | Harvard Apparatus | 72-8595 | |
| Heparin | Fisher | H19 | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Corning | 21-030-CV | |
| Surgical scissors | Harvard Apparatus | 72-8428 |
References
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