Summary
이 방법은 xenobiotics에 드러날 때 S. 알바 잎에 있는 신진 대사 과정을 이해하기 위하여 질량 분광법 화상 진찰 (MSI)를 이용합니다. 이 방법을 사용하면 관심 있는 화합물과 예측된 대사산물의 공간 적 국소화를 특정, 그대로 조직 내에서 할 수 있습니다.
Abstract
제시된 방법은 xenobiotics에 드러날 때 S. 알바 잎의 신진 대사 단면도를 확립하기 위하여 질량 분광법 화상 진찰 (MSI)를 이용합니다. 비표적 접근법을 사용하여 식물 대사 산물과 관심있는 제노바이오틱을 식별하고 식물 조직에서 국소화하여 특정 분포 패턴을 발견합니다. 이어서, 확인된 제노바이오틱으로부터 잠재적 대사산물(즉, 이화산물 및 회인)의 실리코 예측이 수행된다. xenobiotic 대사 산물이 조직에 위치할 때, 식물에 의한 변경에 관여하는 효소의 종류가 기록됩니다. 이러한 결과는 잎에 있는 xenobiotic 축적에 응하여 S. Alba 잎에서 생기는 생물학 반응의 다른 모형을 기술하기 위하여 이용되었습니다. 대사 산물은 2 대에 예측되었다, 잎 조직에 있는 xenobiotics를 변환하는 연속한 생물학 반응의 문서화를 허용했습니다.
Introduction
제노바이오틱스는 인간의 활동으로 인해 전 세계에 널리 분포되어 있습니다. 이들 화합물 중 일부는 수용성이며 토양1에흡수되며 식물 조직2,3,4에축적되면 먹이 사슬에 들어간다. 식물은 곤충과 초식 동물에 의해 먹습니다. 일부 제노바이오틱스의 섭취와 식물의 건강에 미치는 영향은5,6,7,8로설명되었지만 최근에는 조직 수준9에서만설명되었다. 따라서, 제노바이오틱의 대사가 어디에서 어떻게 발생하는지, 또는 특정 식물 대사산물이 특정 조직에서 제노바이오틱 축적과 상관관계가 있는지 는 아직불분명하다(10). 더욱이, 대부분의 연구는 식물에 있는 xenobiotics 그리고 그들의 대사산물의 물질 대사를 간과했습니다, 그래서 식물 조직에 있는 이 반응에 관하여 거의 알려지지 않습니다.
여기서 제안된 것은 기판의 조직 국소화와 반응의 산물과 연관될 수 있는 생물학적 샘플에서 효소 반응을 조사하는 방법이다. 이 방법은 분석이 비표적화되고 관심 있는 분석물의 사용자 지정 목록을 사용하여 조사할 수 있기 때문에 한 실험에서 생물학적 샘플의 완전한 대사 프로파일을 그릴 수 있다. 제공된 원래 데이터 집합에서 추적된 후보자 목록입니다. 샘플에 관심 있는 하나 또는 여러 개의 별표가 지적되는 경우, 특정 조직 국소화는 관련 생물학적 과정에 중요한 정보를 제공할 수 있다. 관심의 질량은 가능한 제품/대사 산물을 검색하기 위하여 관련 생물학 법률을 사용하여 실리코에서 수정될 수 있습니다. 얻어진 대사산물의 목록은 관련효소를 식별하고 조직에 있는 반응을 현지화해서 본래 데이터를 분석하기 위하여 그 때 이용되고, 따라서 일어나는 신진 대사 과정을 이해하는 것을 돕습니다. 다른 방법은 생물학적 샘플에서 발생하는 반응의 유형, 관심 있는 화합물의 국소화 및 관련 대사 산물에 대한 정보를 제공하지 않습니다. 이 방법은 신선하고 손상되지 않은 조직이 이용 가능하고 관심있는 화합물이 이온화될 수 있게 되면 모든 유형의 생물학적 물질에 사용될 수 있다. 제안 된 프로토콜은 Villette 외12에 발표되었으며 과학 계에서 사용하기 위해 여기에 자세히 설명되어 있습니다.
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Protocol
1. 샘플 준비
- 생물학적 샘플을 얻고 신선하고 온전하게 유지 (예를 들어, 튜브로 강요하지 마십시오) 또는 동결. 제안된 프로토콜은 특정 조직에서 화합물을 국소화하기 위해 모든 유형의 고체 생물학적 샘플(즉, 식물, 동물 또는 인간 조직)에 적용됩니다.
- 저온마이크로토메를 -20°C로 식힙니다. 샘플 홀더와 블레이드를 동일한 온도로 유지합니다.
- 필요한 경우 절단 중에 물체를 보존하기 위해 M1 포함 매체에 개체를 포함시면 보존합니다.
- 저온 마이크로 토메 챔버에 배치 플라스틱 금형에 일부 매트릭스를 부어. 신속하게 샘플을 추가하고 그것을 커버하기 위해 좀 더 포함 매체를 부어. 냉각하는 동안 매트릭스가 고화될 때 금형 중앙에 샘플을 유지합니다.
참고: 모든 생물학적 개체에 포함이 필요하지 는 않습니다. 마우스 뇌와 같은 동질적인 물체는 중간을 포함 할 필요가 없으며 냉동 절단 할 수 있습니다.
- 저온 마이크로 토메 챔버에 배치 플라스틱 금형에 일부 매트릭스를 부어. 신속하게 샘플을 추가하고 그것을 커버하기 위해 좀 더 포함 매체를 부어. 냉각하는 동안 매트릭스가 고화될 때 금형 중앙에 샘플을 유지합니다.
- 임베디드 또는 냉동 샘플을 극저온마이크로톤 홀더에 놓고 날카로운 블레이드로 자른다. 5-30 μm의 두께는 식물 샘플에 적합하며, 이질성으로 인해 절단하기가 어렵습니다. 절삭 두께와 온도를 시료에 적용하여 최상의 조건을 찾기 위해 여러 컷을 만듭니다. 제공된 예에서, 샘플은 -20°C에서 절단되었다. 샘플 분해를 피하기 위해 샘플을 0°C 이하로 유지하는 것이 좋습니다.
참고: 저온 마이크로토메 옆에 배치된 쌍안경 현미경을 사용하면 슬라이스의 품질을 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다. 조직은 그대로 유지되어야 합니다. - 조심스럽게 집게 또는 작은 페인트 브러시를 사용하여 ITO 코팅 슬라이드로 슬라이스를 이동한 다음 슬라이드 아래에 손가락을 배치하여 샘플을 따뜻하게하고 건조시. 모든 샘플이 준비될 때까지 미온 마이크로토메 챔버에 슬라이드를 보관하십시오. 열 충격을 피하기 위해 천천히 챔버에서 슬라이드를 꺼내.
참고: 슬라이드의 어느 쪽이 ITO 코팅되어 있는지 확인하려면 실온(RT)에서 슬라이드에 물 한 방울을 놓습니다. 드롭은 ITO 코팅 된 측면에 라운드 또는 코팅되지 않은 측면에 평평하게 유지됩니다. - 얇은 마커 펜 또는 보정 유체를 사용하여 슬라이드에 마크를 그리고 매트릭스 증착 전에 고해상도 스캐너로 스캔합니다. 마크는 질량 분광계에 있을 때 슬라이드에서 샘플의 정확한 위치를 결정하는 데 사용됩니다. 정확한 기준점을 얻는 가장 좋은 방법은 십자가를 그리는 것입니다.
2. 매트릭스 증착
- MALDI 매트릭스 준비: α-시아노-4-하이드록시신나산(HCCA) 매트릭스의 70 mg을 계량하고 0.2% TFA로 물과 메탄올 용액(50:50)의 10mL로 희석합니다. RT에서 10분 동안 매트릭스를 초음파 처리합니다. 초음파 처리 후 추가 고체 매트릭스가있을 수 있습니다.
참고: 관심 있는 문체에 따라 다양한 유형의 MALDI 행렬을 사용할 수 있습니다. - 매트릭스 증착 로봇을 100% 메탄올로 청소합니다.
- 메탄올과 정밀 물티슈를 사용하여 슬라이드를 청소하고 샘플을 만지지 않고 마크를 제거하지 않고 보관하십시오. 샘플없이 지역의 슬라이드 위에 깨끗한 커버 슬립을 추가합니다. 그런 다음 슬라이드의 해당 부분을 광학 검출기 위에 배치하여 매트릭스 증착을 추적합니다.
참고: 매트릭스 두께를 광학적으로 추적하려면 슬라이드와 커버슬립이 매우 깨끗해야 합니다. - 매트릭스 증착을 위해 로봇을 사용하십시오: 저수지에 매트릭스 용액의 6mL만 배치하고, 총 8mL의 총 부피에 대해 100% 메탄올의 2mL를 추가합니다.
참고: 증착을 따라 매트릭스 두께를 기록하는 것은 자동이며 USB 스틱을 사용하여 복구할 수 있습니다. 살포 방법의 개발은 여기에 자세히 설명되어 있지 않습니다.
3. 데이터 수집
- 매트릭스 피크를 참조로 사용하여 질량 분광계를 보정하기 위해 MALDI 플레이트에 매트릭스의 1 μL을 배치합니다. 질량 분광계에 대한 획득 방법의 개발은 여기에 자세히 설명되어 있지 않습니다.
- 소스에 MALDI 플레이트를 삽입하고 ftmsControl 소프트웨어에서"로드 대상"을클릭하고 플레이트가 로드될 때까지 기다립니다.
- MALDI 플레이트를 나타내는 이미지의 그 자리를 클릭하여 매트릭스 스팟의 위치를 선택합니다.
- 샘플 이름과 소프트웨어의"샘플 정보"탭의 폴더를 나타냅니다.
- "인수"를 클릭하여인수를시작합니다.
- "MALDI 비디오"탭의 마우스 포인터를 사용하여 획득 하는 동안 플레이트를 약간 이동하여 레이저가 다른 지점에서 점등되도록 합니다.
- 인수가 완료되면"교정"탭으로 이동하여 이차 모드에서 HCCA 교정 목록을 선택하고 자동을 클릭합니다. 전역 교정 결과는"교정 플롯"창에 표시되며 SolariX XR 7T의 경우 0.2ppm 미만이어야 합니다.
- 교정이 양호한 경우"수락"을클릭하고 메서드를 저장합니다.
- 샘플의 매트릭스 증착이 완료되면 슬라이드를 슬라이드 어댑터에 놓고 플라스틱 커버를 사용하여 마크의 위치를 검색합니다.
- flexImaging 소프트웨어에서 소프트웨어로 열리는 첫 번째 창을 사용하여 새 이미징 실행을 설정합니다.
- 이미징 실행이름을 지정하고 결과 디렉터리를선택하고 다음을 클릭합니다.
- 래스터 크기(즉, 사용자 정의 측정 영역)를 나타내고, 사용할 방법을 선택하고(섹션 3.1에서 보정됨)를 클릭하고 다음을 클릭합니다.
- 슬라이드를 스캔한 후 1.6단계에서 얻은 슬라이드의 광학 이미지를 로드하고 다음을 클릭합니다.
- 이미지가 더 넓은 창에서 열립니다. 슬라이드의 표시를 사용하여 슬라이드의 위치를 가르칩니다: ftmsControl에서MALDI 비디오 창의 대상을 마크의 정확한 위치에 배치한 다음 felxImaging로 돌아와 광학 이미지의 정확한 동일한 지점을 클릭합니다. 세 개의 독립적인 점에 대해 이 것을 반복합니다. 자국이 새겨진 플라스틱 커버는 MALDI 플레이트에 배치되어 위치를 회복하고 교육을 용이하게 합니다.
참고: 표식으로 표시가 만들어진 경우 슬라이드 뒷면에 흰색 보정 유체를 추가하면 가르치는 동안 눈에 띄는 수 있습니다.
- "측정영역 추가"도구를 사용하여 flexImaging 소프트웨어의 샘플에 대한 관심 영역을 그립니다.
- 여러 샘플을 분석해야 하는 경우 이미징 실행 및"AutoXecute 시퀀스"를저장합니다.
- 여러 샘플을 분석하는 경우"자동 제큐트 배치 러너"를사용하여 시퀀스를 시작합니다.
참고: 데이터를 정기적으로 안전한 위치에 동기화합니다.
4. 데이터 처리
- 원시 데이터를 시각화 소프트웨어(SCiLS Lab)로 가져오고 데이터 집합을 만듭니다. 이 작업은 이 소프트웨어의 두 단계에서 수행됩니다.
- "일괄가져오기"도구를 사용하고 원시 데이터를 선택하고 대상 디렉터리를 표시하고"가져오기"를 클릭합니다.
- 가져온 후 추가 분석을 위해 여러 데이터 집합을 결합할 수 있습니다. 데이터 집합을 결합하려면"File| 새로운| 데이터 집합" 도구.
- 획득에 사용되는 계측기 유형을 선택하고 "+""를 클릭하여 가져온 데이터 집합을 추가하고 개체를 클릭하고 드래그하여 이미지를 정렬합니다.
- 관심 범위를 표시하여 필요한 경우 질량 범위 설정을 확인하거나 수정합니다. 다음을 클릭하여 가져오기 요약을 보고 가져오기를 시작합니다.
- 샘플 및/또는 다른 샘플의 다른 조직에 관심 있는 m/z를 시각화합니다. 스펙트럼을 클릭하여 관심 있는 m/z를 선택하거나 m/z 상자에값을 입력하기만 하면 됩니다.
- 관심 있는 m/z를 결정하기 위해 서로 다른 조직 및/또는 다른 샘플 간의 공동 지역화 또는 차별적 값을 검색하는 데 필요한 경우 통계 테스트를 수행합니다. 도구는"도구"메뉴에서 사용할 수 있으며 이 프로토콜에 설명되지 않습니다.
- 관심 있는 m/z(예: 공동지역화된 차별 화합물)를 개체 탭에서 .csv 파일로 내보냅니다. 전체 데이터 집합이 너무 크지 않은 경우에도 내보낼 수 있습니다(예: 최대 60,000줄). 빨간색 화살표로 표시된 관심 영역의 오른쪽에 있는"내보내기"아이콘을 클릭합니다.
- .csv 파일을 가져와 서 어장 소프트웨어(메타보스케이프)에서 새 데이터 집합을 만듭니다. "프로젝트| 클릭 CSV 프로젝트가져오기 ". 정확한 m/z만 고려되고 동위원소 프로필이 손실됩니다.
참고: 5.0 소프트웨어 버전은 시각화 소프트웨어에서 직접 데이터를 가져올 수 있으므로 동위원소 프로파일을 고려할 수 있으므로 보다 정확한 음표를 사용할 수 있습니다. - 공개적으로 사용할 수 있는 데이터베이스에서 파생될 수 있는 사용자 지정 된 별언 목록으로 노츠합니다. 분석 목록을 만드는 소프트웨어에 의해 템플릿이 제공됩니다.
- 예측 소프트웨어(대사 산물 예측)를 사용하여 인음부 화합물의 대사 산물의 실리코 예측에서 수행한다. 관심 있는 화합물의 개발된 수식은 소프트웨어의 사용자가 그려지거나 .mol 파일로 가져온 것이 필요합니다. 그런 다음 메서드는 간단한 단계별 프로토콜입니다.
- 대사 산물 목록을 복구하고 분석 목록을 만들고, 분석 소프트웨어에서 사용하여 예측된 대사 산물로 원시 데이터에 인가합니다. 또는 대사 산물 목록이 짧은 경우 4.8 단계에서 수동으로 검색하십시오.
- 시각화 소프트웨어에서 원시 데이터에서 대사 산물의 조직 분포를 시각화합니다.
- 예측 된 대사 산물을 마우스 오른쪽 단추로 클릭하여 예측 소프트웨어의 대사 과정에 관련된 효소의 이름을 복구합니다.
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Representative Results
이 프로토콜은 환경의 제노바이오틱에 노출된 S. 알바 나무에서 샘플링된 신선한 잎에 적용되었다. 이 프로세스는 그림 1에묘사됩니다. 첫 번째 단계는 관심있는 샘플의 얇은 조각을 준비하는 것입니다. 식물 샘플은 조직이 이질적이며 물 및 / 또는 공기를 포함 할 수 있기 때문에 동물 샘플보다 절단하기가 더 어렵습니다. 이러한 난이도는 샘플 주위의 균일한 블록을 형성하는 포함 매체를 사용하여 처리됩니다. 매트릭스 증착은 로봇의 사용에 의해 촉진되어 손 조작을 피하고 재현 가능한 결과를 보장합니다. MALDI 매트릭스 레이어 두께는 전체 프로세스 중에 뒤따르고 기록될 수 있습니다. 데이터 수집은 고해상도 질량 분광계를 처리하고 조사 중인 샘플 및 화합물의 유형에 맞게 방법을 조정하는 학습이 필요합니다. 원시 데이터는 관심 있는 화합물을 검색하고 조직 국소화를 표시하기 위해 시각화 소프트웨어로 가져옵니다. 소프트웨어에서 사용할 수 있는 통계 도구를 사용하여 차별적 또는 공동화된 화합물을 찾을 수 있습니다. 이 단계에서 화합물의 정확한 m/z만 알려져 있습니다. 관심의 화합물은 다음 사용자가 정의 한 관심의 화합물의 사용자 정의 목록과 정확한 m /z를 비교할 수있는 애니트윗 소프트웨어로 내보내. 정확한 m/z가 관심 화합물의 m/z와 일치하는 경우, 그것은 에추가 됩니다. 대사 프로필 조사의 맥락에서, 음부 된 화합물은 대사 산물의 실리코 예측에 대 한 선택 됩니다. 대사 산물을 생성하는 데 사용되는 생물학적 반응 규칙의 유형은 대사 산물이 예측되는 세대의 수뿐만 아니라 사용자에 의해 쉽게 선택됩니다. 예측 된 대사 산물목록은 송어 데이터 정확한 m/z와 예측 대사 산물 m/z(그림 1)사이의일치를 검색하기 위해 애니피션 소프트웨어에 사용될 수 있다. 이 에 의해 추가된 대사산물은 시각화 소프트웨어에서 검색하여 조직 국소화(도2)를얻을 수 있다. 관심있는 원래 화합물의 대사에 관여하는 효소는 생물학적 샘플에서 발생하는 대사 반응을 그리기 위해 회수 될 수있다(도 3).
이 예에서, 약물 텔미사르탄은 식물 잎에서 확인되었다; 그것은 조직 전체에 배포되었다. 텔미사르탄의 대사산물은 원시 데이터에서 예측되고 검색되었습니다. 주석은 1세대(I) 대사산물이 잎의 내부 조직에서 검출되어 2세대(II) 대사산물로 더욱 저하되어 내부 조직에 국한되거나 모든 잎 조직에 보다 일반적으로 분포된 것으로나타났다(그림 2). 이러한 결과 나뭇잎에 활성 신진 대사 반응을 제안 하는 분 비 탄을 저하. 이 과정은 잎에 주석이 주석이 있는 여러 화합물에 적용되었으며, 반응에 관여하는 효소는 제노바이오틱축적에 대한 식물의 반응에서 그들의 역할을 조사하기 위해 회수되었다. 이것은 S. 알바 잎에서 제노바이오틱스 대사에 관여하는 효소에 대한 개요를 제공한다(도3).
그림 1. 방법의 일반적인 구조. 신선한 샘플을 잘라 적절한 MALDI 매트릭스로 분사된 ITO 코팅 슬라이드에 놓습니다. MALDI 획득은 SCiLS Lab 소프트웨어로 조직 내의 국소화를 관찰할 수 있는 원시 데이터를 제공합니다. 대사암경은 음표에 사용되며, 대사산물 예측(즉, 이화환및 회인) 예측에 사용된다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2. S. 알바에서 얻은 결과의 예는 xenobiotics에 노출된 잎. 텔미사르탄은 식물 잎에서 확인되었고 모든 조직에서 시각화되었습니다. 텔미사르탄 대사산물은 원시 데이터에 보고 하여 조직 국소화를 시각화했습니다. 1세대(I) 대사산물 C33H32N4O3는 주로 내부 조직에서 국한된 반면, 2세대(II) 대사산물은 때때로 더 일반적으로 분포되었다. 이 그림은 빌렛 외12의허가로 적응되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3. S. 알바에서 발생하는 잠재적인 반응에 대해 제안된 글로벌 효소 프로파일은 제노바이오틱스 노출에 대한 응답으로 남깁니다. 관심의 대상에 대사 산물 예측 및 음표 관심의 화합물의 물질 대사에 대 한 책임 잠재적인 효소 반응을 제안. 이 그림은 빌렛 외12의허가로 적응되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
이 프로토콜의 중요한 부분은 샘플 준비입니다: 샘플은 부드럽고 온전해야 합니다. 절단은 가장 어려운 부분이며, 시료의 온도와 두께는 연구된 시료의 종류에 따라 달라질 수 있다. 동물 조직은 일반적으로 균일하고 절단하기 쉽습니다. 식물 샘플은 종종 다른 구조를 통합하므로 블레이드가 부드럽고 단단하거나 빈 혈관 조직을 만날 때 그대로 유지하기가 더 어렵습니다. 식물 샘플과 함께 작업 할 때 친수 성 조직에서 얼음의 형성과 파괴를 피할 때 신선한 조직을 사용하는 것이 좋습니다. ITO 코팅 슬라이드에 증착할 때 슬라이스를 부드럽게 이동해야 합니다. MALDI 매트릭스는 매트릭스 결정으로 스프레이 시트의 막힘을 피하기 위해 약간 희석되었으며, 이는 100% 메탄올의 2mL이 2.4 단계에서 첨가되지 않으면 발생할 수 있다.
이 방법은 MALDI 매트릭스 증착을 위한 로봇의 사용으로 인해 재현 가능한 결과를 제공하는 쉬운 일일 샘플 준비 프로토콜을 제공합니다. 제안된 프로토콜은 조직 절단 및 질량 분광법 화상 진찰에 있는 능력을 필요로 하고 이온화될 수 있는 화합물에만 적용됩니다. 그러나, 면역히스토케(11)에 사용되는 바와 같이라벨링없이 분자 식별을 제공한다. 고감도는 화합물이 조직 또는 세포에서 직접 이온화되기 때문에 달성되며 추출프로토콜(12)에의해 생성된 희석 효과를 피한다. 샘플은 비표적 방식으로 분석되어 샘플내 내인성 또는 제노바이오틱스 화합물의 대규모 프로파일링을 가능하게 한다. 따라서, 외인성 화합물에 대한 생물학적 반응은 따를 수 있다. 비표적 분석에 결합된 대사산물의 실리코 예측은 조직에 축적될 외인성 화합물에 대한 사전 지식 없이 대사 반응을 모니터링할 수 있기 때문에 고전적인 질량 분석 이미징에 또 다른 차원을 추가합니다. 현재까지, 알려진 화합물과 몇 대사 산물만이 이 방법(예를 들어, 쥐에게 먹이는 관심의약)을 따랐다(13). 제안된 프로토콜을 통해, 본래 화합물및 그들의 대사산물은 조직 내에서 국소화될 수 있고, 외인성 화합물 및/또는 그들의 대사산물의 축적에 대한 생물학적 반응을 따를 수 있다.
이 프로토콜은 제노바이오틱에 대한 식물의 반응에적용될 뿐만 아니라 약물에 대한 반응으로 동물 대사를 이해하거나, 식물/곰팡이 상호 작용을 따르거나, 생물학적 또는 생물학적 스트레스에 대한 식물 반응을 따르거나, 질병의 진화를 이해하여 관심 있는 조직에서 대사 과정을 드러내는 데 사용될 수 있다.
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Disclosures
저자는 공개 할 것이 없습니다.
Acknowledgments
우리는 식물 샘플의 MALDI 이미징에 대한 샘플 준비에 관한 팁과 트릭찰스 피나우, 멜라니 라게리그와 레지스 라빈에게 감사드립니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cover slips | Bruker Daltonics | 267942 | |
| Cryomicrotome | Thermo Scientific | ||
| Excel | Microsoft corporation | ||
| flexImaging | Bruker Daltonics | ||
| ftmsControl | Bruker Daltonics | ||
| GTX primescan | GX Microscopes | ||
| HCCA MALDI matrix | Bruker Daltonics | 8201344 | |
| ImagePrep | Bruker Daltonics | ||
| ITO-coated slides | Bruker Daltonics | 237001 | |
| M1-embedding matrix | ThermoScientific | 1310 | |
| Metabolite Predict | Bruker Daltonics | ||
| Metaboscape | Bruker Daltonics | ||
| Methanol | Fisher Chemicals | No specific reference needed | |
| MX 35 Ultra blades | Thermo Scientific | 15835682 | |
| Plastic molds | No specific reference needed | ||
| SCiLS Lab | Bruker Daltonics | ||
| SolariX XR 7Tesla | Bruker Daltonics | The method proposed is not limited to this instrument | |
| Spray sheets for ImagePrep | Bruker Daltonics | 8261614 | |
| TFA | Sigma Aldrich | No specific reference needed |
References
- Zhang, D., Gersberg, R. M., Ng, W. J., Tan, S. K. Removal of pharmaceuticals and personal care products in aquatic plant-based systems: A review. Environmental Pollution. 184, 620-639 (2014).
- Adeel, M., Song, X., Wang, Y., Francis, D., Yang, Y. Environmental impact of estrogens on human, animal and plant life: A critical review. Environment International. 99, 107-119 (2017).
- Prosser, R. S., Sibley, P. K. Human health risk assessment of pharmaceuticals and personal care products in plant tissue due to biosolids and manure amendments, and wastewater irrigation. Environment International. 75, 223-233 (2015).
- Wang, J., et al. Application of biochar to soils may result in plant contamination and human cancer risk due to exposure of polycyclic aromatic hydrocarbons. Environment International. 121, 169-177 (2018).
- Marsik, P., et al. Metabolism of ibuprofen in higher plants: A model Arabidopsis thaliana cell suspension culture system. Environmental Pollution. 220, 383-392 (2017).
- He, Y., et al. Metabolism of ibuprofen by Phragmites australis: uptake and phytodegradation. Environmental Science and Technology. 51 (8), 4576-4584 (2017).
- Huber, C., Bartha, B., Harpaintner, R., Schröder, P. Metabolism of acetaminophen (paracetamol) in plants-two independent pathways result in the formation of a glutathione and a glucose conjugate. Environmental Science and Pollution Research. 16 (2), 206-213 (2009).
- Thomas, F., Cébron, A. Short-term rhizosphere effect on available carbon sources, phenanthrene degradation, and active microbiome in an aged-contaminated industrial soil. Frontiers in Microbiology. 7, 1-15 (2016).
- Villette, C., et al. In situ localization of micropollutants and associated stress response in Populus nigra leaves. Environment International. 126, 523-532 (2019).
- Sandermann, H. Plant metabolism of organic xenobiotics. Status and prospects of the 'Green Liver' concept. Plant Biotechnology and In Vitro Biology in the 21st Century. , 321-328 (1999).
- Sula, B., Deveci, E., Özevren, H., Ekinci, C., Elbey, B. Immunohistochemical and histopathological changes in the skin of rats after administration of lead acetate. International Journal of Morphology. 34 (3), 918-922 (2016).
- Villette, C., Maurer, L., Wanko, A., Heintz, D. Xenobiotics metabolization in Salix alba leaves uncovered by mass spectrometry imaging. Metabolomics. 15, 122 (2019).
- Khatib-Shahidi, S., Andersson, M., Herman, J. L., Gillespie, T. A., Caprioli, R. M. Direct Molecular Analysis of Whole-Body Animal Tissue Sections by Imaging MALDI Mass Spectrometry. Analytical Chemistry. 78 (18), 6448-6456 (2006).
