Summary
Dette papir giver en detaljeret beskrivelse af, hvordan man opbygger en dyremodel af den anheptiske fase (leveriskæmi) hos rotter for at lette grundforskning i iskæmi-reperfusionsskade efter levertransplantation.
Abstract
Ortopisk levertransplantation (OLT) hos rotter er en afprøvet og dokumenteret dyremodel, der anvendes til præoperative, intraoperative og postoperative undersøgelser, herunder iskæmi-reperfusionsskader (IRI) af ekstrahepatisk organer. Denne model kræver adskillige eksperimenter og enheder. Varigheden af anhepatisk fase er tæt forbundet med tiden til at udvikle IRI efter transplantation. I dette eksperiment brugte vi hæmodynamiske ændringer til at fremkalde ekstrahepatisk organskade hos rotter og bestemte den maksimale tolerancetid. Tiden indtil den mest alvorlige organskade varierede for forskellige organer. Denne metode kan let kopieres og kan også bruges til at studere IRI af de ekstrahepatiske organer efter levertransplantation.
Introduction
Iskæmi-reperfusion skade (IRI) er en almindelig komplikation efter levertransplantation. Hepatisk IRI er en patologisk proces, der involverer iskæmi-medieret celleskade og unormal forringelse af leverafvisende. Hepatisk IRI og den lokale medfødte immunrespons kan opdeles i varm og kold IRI, alt efter forskelle i det kliniske miljø1. Hot IRI er induceret af stamcelleskade, normalt som følge af levertransplantation, chok, og traumer2. Kold IRI er en komplikation af levertransplantation forårsaget af endotelceller og perifercirkulation 3. Kliniske rapporter har vist, at lever-IRI er forbundet med 10% af tidlige organsvigt og kan øge forekomsten af akut og kronisk afvisning4,5. Derudover kan lever IRI også fremkalde flere organ dysfunktion syndromer eller systemisk inflammatorisk respons syndrom, med højdødelighed 6. Patienter med ekstrahepatisk organinddragelse har tendens til at blive længere på hospitalet, bruge flere penge og have en dårligere prognose7. Udviklingen af komplikationer er tæt forbundet med længden af den anheptiske fase af levertransplantation8.
Ortopisk levertransplantation (OLT) hos rotter blev først rapporteret af den amerikanske professor Lee i 1973. Den eksperimentelle operation simulerede trinene i klinisk levertransplantation og anastomose hos blodkar og den fælles galdegang (CBD) ved hjælp af suturmetoden. Proceduren er vanskelig og tidskrævende med en lav succesrate9. I 1979 foretog Kamada et al. en betydelig forbedring af OLT hos rotter ved kreativt at anvende »to-manchetmetoden« til anastomose i portalåren for at kontrollere den anhepatiske fase inden for 26 minutterog 10. Samme år foreslog Zimmermann "enkelt galdestentmetoden". På grundlag af Lees arbejde brugte Zimmermann polyethylenrør til direkte at anastomose CBD hos donoren og modtageren, forenklede genopbygningen af CBD og bevarede sphincters funktion, og denne metode blev standarden for galderekonstruktion af OLT-modeller11. I 1980 foreslog Miyata et al. den "tre-manchet metode", hvor portalen vene (PV), suprahepatic vena cava (SVC), og intrahepatic vena cava (IVC) blev anastomosed af manchetten metode. Der er dog risiko for forvrængning af kanylen med denne metode, hvilket kan føre til obstruktion af ringere vena cava refluks12. I 1983 blev metoden med »to manchetter« foreslået ved hjælp af manchetmetoden for anastomose i PV og IVC, men ved at anvende suturmetoden for SVC13. Denne metode blev vedtaget af forskere globalt for at etablere OLT-modeller. Siden da er manchet anastomosetrinnene blevet forbedret for at forkorte den anhepatisk fase og forbedre overlevelsesraten for rotterne14. Tilsvarende anvendes forbedrede metoder i klinisk praksis til at forkorte den anheptiske fase15. Grundforskning i IRI efter levertransplantation har imidlertid vist, at overlevelsesraten er omvendt relateret til graden af skade på ekstrahepatiske organer. Derfor er der behov for yderligere forskning, og der er behov for en enkel og reproducerbar dyremodel for at simulere IRI efter levertransplantation.
Baseret på definitionen af den anhepatisk fase simulerede vi de hæmodynamiske ændringer i levertransplantation, hvilket resulterede i IRI af ekstrahepatiske organer hos rotter. Heri giver vi en detaljeret beskrivelse af, hvordan man opbygger en dyremodel af den anheptiske fase (leveriskæmi) hos rotter for at lette grundforskning i IRI efter levertransplantation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Animal Ethics Committee godkendte forsøget med Guangxi Medical University (nr. 20190920). Alle dyr blev leveret af Animal Experiment Center i Guangxi Medical University. Vi brugte SPF mandlige Sprague Dawley rotter (200-250 g, 10-12 uger), holdes under stuetemperatur på 25 ± 2 ° C og fugtighed på 50 ± 10%. Fodring blev stoppet 24 timer før drift; der blev dog leveret vand.
BEMÆRK: En operatør kan udføre alle operationer uden mikrokirurgi eller kirurgisk mikroskop.
1. Operation
- Efter vejning bedøves rotterne med isoflurane (5%) ved hjælp af et dyr anæstesi maskine.
- Efter 1-2 minutter klemmes rotternes tæer forsigtigt med pincet. Hvis rotten ikke reagerer efter klemning, er den gået ind i en tilstand af anæstesi. Brug dyrlægen salve på øjnene for at forhindre tørhed. Brug varmelamper til at holde rotternes kropstemperatur ved 37-38 °C.
- Efter abdominal desinfektion (povidone jodopløsning) fastgøres rotten på dyrets dissektionstabel. Lav et medianindsnit på 3 cm under xiphoidprocessen ved hjælp af pincet og saks.
- Åbn bukhulen, udsætte leveren ved hjælp af en retractor, og mobilisere hepatogastriske ledbånd. Brug vatpinde til at vende den midterste lap af leveren forsigtigt og drej den opad for at udsætte porta hepatis. Identificer CBD, PV og HA.
- Skub tyndtarmen mod venstre nedre bughulen ved hjælp af vatpinde, dække det med våd gaze, og flytte intrahepatisk vena cava til højre nyre vene.
- Isoler portalen vene, leverarterie, og ringere vena cava over højre nyre vene med en intraokulær linse og pincet markeret med 3-0 silke tråd, hver med en slip knude.
- Skær venstre og højre nedre ende af huden og eksponer lårbenets vene ved hjælp af oftalmiske pincet. Injicer langsomt lav molekylvægt heparin 625 IE/kg gennem lårbenets vene for at heparinere hele kroppen.
- Ligate portalen vene, leverarterie, og ringere vena cava over højre nyre vene med Nr. 3-0 suturer, der varer 45 minutter (Figur 1). Udskift tyndtarmen i bughulen og dække det med gaze. Reducer indånding anæstesi i disse perioder.
- Efter 45 minutter, slip portalen vene, leverarterie, og ringere vena cava over højre nyre vene.
- Sutur musklen og huden, lag for lag, og opsige inhalational anæstesi. Der tilfør postoperativ analgesi ved hjælp af subkutan morfin på 5 mg/kg hver 4. time.
- Overhold rotten, indtil den er vågen og foder under en temperatur på 25 ± 2 °C og fugtighed på 50 ± 10%. Dyreopvarmningslamper er nødvendige.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Rotters tolerance over for leveriskæmi
I denne dyremodel er de steder, hvor blodkarrene blev ligeret under drift, vist i figur 1. Rotterne blev tilfældigt opdelt i 5 grupper for iskæmi i 15 minutter (I15 gruppe), 30 minutter (I30 gruppe), 45 minutter (I45 gruppe), 60 minutter (I60), og fingeret gruppe, med 10 rotter i hver gruppe. Overlevelsesraten for hver gruppe blev observeret 14 dage efter operationen. Alle rotter overlevede i I15-gruppen, I30-gruppen og sham-gruppen. Otte overlevede i 14 dage i I45-gruppen, og kun 2 overlevede i I60-gruppen. Disse resultater tyder på, at rotterne kan tåle den anhepatisk fase i højst 45 minutter (tabel 1).
Virkninger af vaskulær ligation på cirkulationen hos rotter
Under forsøget registrerede Biosystems pulsen og blodtrykket (højre indre halspulsåre intubation) før og efter den anhepatiske fase. Vi fandt, at pulsen og det gennemsnitlige arterielt tryk (MAP) af rotter ændrede sig dramatisk efter vaskulær ligation (Figur 2).
Virkninger på ekstrahepatisk organer
Hepatisk iskæmi overbelastning og ødem blev fundet i tarmene, mave varices, og splenomegaly efter ligation. Firs rotter blev tilfældigt opdelt i 8 grupper for iskæmi i 45 minutter (T0), reperfusion i 6 timer (T6), 12 timer (T12), 24 timer (T24), 48 timer (T48), 72 timer (T72), 7 dage (D7) og 14 dage (D14). Efter rotterne blev ofret, blev væv fra nyrerne, bugspytkirtlen, tyndtarmen, hjertet og lungerne taget og farvet med hematoxylin-eosin (HE). Hele farvningsprocessen består af fem trin: afvoksning, farvning, dehydrering, gennemsigtighed og forsegling. Bortset fra hjertet blev patologiske scoringer tildelt som tidligere beskrevet16,17,18,19.
Tiden indtil den maksimale skade på de ekstrahepatiske organer varierede; det var 6-24 timer efter operationen for bugspytkirtlen og 24-48 timer for lungerne. Tarmkanalen og nyrerne blev hårdest kvæstet efter 45 minutters iskæmi. Der var ingen åbenlys abnormitet af tarmslimhinden 24 timer efter operationen, og nyrerne kom sig efter 48 timer. Efter reperfusion blev lokal myokardiecellenekrose, cellefragmentering og opløsning, inflammatorisk celleinfiltration og lokal vasodilation og overbelastning fundet i hjertet 24-48 timer efter operationen (Figur 3).
Lunger
Neutrofil infiltration blev fundet i lungevævet efter iskæmi. Med stigningen i reperfusionstid (T0,T6) kunne slim af bronkial lumen også ses i lungevævet. Inflammatorisk celleinfiltration fandt sted i alveolarvæggen, som blev alvorligt fortykket. Alveolar sammenbrud og forsvinden af alveolar hulrum kunne også findes i nogle væv. Der var ingen signifikant alveolar ødem eller kapillær overbelastning i alveolar vægge. De blev hårdest såret 24-48 timer efter operationen, hvor nogle rotter viste dyspnea og andre manifestationer 7 dage efter operationen. HE farvning resultater foreslog lymfadenitis i luftvejene, mild inflammatorisk celle infiltration i alveolar væggen, og lokal blødning (Figur 3A, Figur 4).
Nyrer
En lille mængde eosinofilt stof blev fundet i nyrerør efter iskæmi i fase T0, men ingen inflammatorisk celleinfiltration og andre abnormiteter blev set. Men hævede nyre rørformede epitelceller, porøse eller vakuolated cytoplasma, nekrotiske celler i få lumen, karyopyknosis, fragmentering, børste grænse tab, og rørformede sure gruppe i mange lumen blev set 6-48 timer efter operationen. Derudover blev et lille antal nyrerørformede epitelceller set med granulær degeneration, og porøs og let farvet cytoplasma set 48 timer efter operationen. Signifikant interstitiel telangiectasia, men ingen alvorlig inflammatorisk celleinfiltration, blev fundet (Figur 3B, Figur 5).
Tyndtarmen
Tyndtarmen blev hårdest såret efter iskæmi (T0). Der var svær inflammatorisk celle infiltration, slimhinde epitel kaste, og telangiectasia. Med stigningen i reperfusionstid helede skaden hurtigt. Slimhindeepitelet blev genoprettet helt 24 timer efter operationen, og kun mild inflammatorisk celleinfiltration blev set (Figur 3C, Figur 6).
Bugspytkirtlen
Alvorlige inflammatoriske celler infiltreret omkring bugspytkirtlen væv i fase T0. Men, bugspytkirtlen læsioner var ikke ensartet. Seks ud af 10 havde nekrose i bugspytkirtlen og inflammatorisk infiltration 24 timer efter operationen, og de andre 4 havde ingen tilsyneladende abnormiteter. Fireogtyve timer efter operationen var der ud over infiltration af inflammatoriske celler ødem, udvidelse af interlobular rum, blødning, nekrose af et lille antal acinarceller, uklar afgrænsning af cellerne, nuklear fragmentering og opløsning og mild inflammatorisk celleinfiltration i synsfeltet. Derefter forsvandt betændelsen langsomt (Figur 3D, Figur 7 ).
Hjertet
Ved fase T0 blev hjerte myocytter arrangeret regelmæssigt med klar afgrænsning, normal cellemorfologi, lokal interstitiel overbelastning og mild brun-gul pigmentaflejring. Desuden blev inflammatorisk celleinfiltration observeret i myokardie interstitielle og perivaskulære regioner. Med stigningen i reperfusionstid blev lokal myokardiecellenekrose, cellefragmentering og opløsning, inflammatorisk celleinfiltration, lokal vasodilation og overbelastning fundet i væv 24-48 timer efter operationen. Ventrikulær dilatation, porøs struktur, øget myokardie interstitium, og mild inflammatorisk celle infiltration blev set i nogle prøver. Efter 48 timer forsvandt lokale kardiomyocytter og blev erstattet af en lille mængde fiberforbindelsesvæv med mild inflammatorisk celleinfiltration. På det tidspunkt blev der ikke set andre åbenlyse abnormiteter (figur 8).
Virkninger af hæmodynamiske ændringer på lever, nyre, bugspytkirtel, og hjerte serologiske indekser
Serum blev indsamlet, og niveauerne af alanin aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), kreatinin og amylase blev opdaget af en automatisk biokemisk analysator. Alle indikatorer toppede ved 24-48 timer, i modsætning til de patologiske ændringer. Selv om disse niveauer var normale 48 timer efter operationen, fortsatte de patologiske skader (figur 9).
Figur 1: Placering af ligatur: PV, HA, IVC øverst til højre nyre vene. Klik her for at se en større version af dette tal.
| Gruppe | N | overlevelse ved 24 timer, n (%) | overlevelse ved 7 d, n (%) | overlevelse ved 14 d, n (%) |
| Sham | 10 | 10 | — | — |
| I 15 min. | 10 | 10/10 | 10 (100) | 10 (100) |
| I 30 min. | 10 | 10/10 | 10 (100) | 10 (100) |
| I 45 min. | 10 | 8/10 | 8/10 (80) | 8/10 (80) |
| I 60 min. | 10 | 2/10 | 2/10 (20) | 2/10 (20) |
Tabel 1: Rotters tolerance over for leverkemi
Figur 2: Hæmodynamiske ændringer i I45 min gruppe. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Snesevis af organ histologi. b) nyrer; c) tarmen; d) bugspytkirtel; *Statistisk signifikant i forhold til sham-gruppen (P < 0,05). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4:Patologiske ændringer i lungerne efter operationen. (A)Sham-gruppen; b) Ischemia-koncernen (T0-gruppen) (C) Reperfusion 6 timer (T6) gruppe; D) Reperfusionsgruppe 12 timer (T12) (E)Reperfusion 12 timer (T12) gruppe; f) Reperfusion 24 timer (T24) gruppe; (G)Reperfusion 48 timer (T48) gruppe; (H) Gruppen Reperfusion 7 dage (D7) (I) Reperfusionsgruppe 14 dage (D14) (skala 50 μm). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: Patologiske ændringer i nyrerne efter operationen. (A)Sham-gruppen; b) Ischemia-koncernen (T0-gruppen) (C) Reperfusion 6 timer (T6) gruppe; D) Reperfusionsgruppe 12 timer (T12) (E)Reperfusion 12 timer (T12) gruppe; f) Reperfusion 24 timer (T24) gruppe; (G)Reperfusion 48 timer (T48) gruppe; (H) Gruppen Reperfusion 7 dage (D7) (I) Reperfusionsgruppe 14 dage (D14) (skala 50 μm). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6: Patologiske ændringer i tyndtarmen efter operationen. b) Ischemia-koncernen (T0-gruppen) (C) Reperfusion 6 timer (T6) gruppe; D) Reperfusionsgruppe 12 timer (T12) (E)Reperfusion 12 timer (T12) gruppe; f) Reperfusion 24 timer (T24) gruppe; (G)Reperfusion 48 timer (T48) gruppe; (H) Gruppen Reperfusion 7 dage (D7) (I) Reperfusionsgruppe 14 dage (D14) (skala 50 μm). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 7: Patologiske ændringer i bugspytkirtlen efter operationen. b) Ischemia-koncernen (T0-gruppen) (C) Reperfusion 6 timer (T6) gruppe; D) Reperfusionsgruppe 12 timer (T12) (E)Reperfusion 12 timer (T12) gruppe; f) Reperfusion 24 timer (T24) gruppe; (G)Reperfusion 48 timer (T48) gruppe; (H) Gruppen Reperfusion 7 dage (D7) I) Gruppe 14 dage (D14)(A- og D-skala 50 μm; BCEFGHI-skala 50 μm). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 8:Patologiske ændringer i hjertet efter operationen. (A)Sham-gruppen; b) Ischemia-koncernen (T0-gruppen) (C) Reperfusion 6 timer (T6) gruppe; D) Reperfusionsgruppe 12 timer (T12) (E)Reperfusion 12 timer (T12) gruppe; f) Reperfusion 24 timer (T24) gruppe; (G)Reperfusion 48 timer (T48) gruppe; (H) Gruppen Reperfusion 7 dage (D7) (I) Reperfusionsgruppe 14 dage (D14)(A-skala 50 μm; BCDEFGHI-skala 100 μm). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 9: Ændringer i ALT, AST, kreatinin (Cr) og amylase i hver gruppe; *Statistisk signifikant i forhold til sham-gruppen (P<0,05). Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
OLT hos rotter er en ideel model til undersøgelse af organbevarelse i levertransplantation, IRI, transplantationsafstødning, immuntolerance, transplantationspatologi og farmakologi, homotransplantation og xenotransplantation. På nuværende tidspunkt er det meget udbredt i den eksperimentelle forskning i levertransplantation.
Under pilotundersøgelser administrerede vi først pentobarbital natrium intraperitoneal anæstesi og fandt ud af, at dette førte til høj postoperativ dødelighed og kort tolerance over for hæmodynamiske ændringer. Således brugte vi inhalationsbedøvelse i efterfølgende forsøg med henblik på hurtig virkning og hurtig udelukkelse af in vitro-egenskaber. Overgangen til inhalationsbedøvelse forbedrede tolerancetiden og rotternes overlevelse efter operative. Efterforskere bør være opmærksomme på rottens vejrtrækning og hjertefrekvenser for at forhindre overdosis af bedøvelsen. Biosystemer kan bruges til at overvåge puls og blodtryk. Vi observerede også virkningen af kirurgisk suturtykkelse på ligationen af blodkar. Selv om linjer mindre end 3-0 perfekt kunne ligate blodkarrene, de var vanskelige at løsne og kan føre til brud på blodkarrene. Tværtimod kan linjer større end 3-0 resultere i ufuldstændig vaskulær okklusion, som forhindrer hæmodynamiske ændringer. Disse materielle problemer vil blive forbedret i fremtidige forsøg. Der er nogle begrænsninger i vores protokol. Varmelamper anbefales ikke til temperaturvedligeholdelse på grund af deres potentiale for overophedning; alternative varmeforslag, såsom recirkulerende vandtæpper, anbefales til dyrets fordel.
Der er mange grunde til distal organskade efter OLT. For det første kan skade være forårsaget af kold konservering af donorlever in vitro20. For det andet kan IRI forekomme og forårsage vævsskader, når blodforsyningen vender tilbage til væv (reperfusion) efter en lang periode med iskæmi. Iskæmi er den hyppigste årsag til skade, og reperfusion er den proces, hvor skaden opstår. Efter samtidig blokering af IVC og PV i den anheptiske fase opstod der en stor mængde blod stasis i underekstremiteterne og indre organer. Den effektive cirkulerende volumen (ECV) faldt kraftigt, og MAP faldt. Men på grund af vagus nervestimulation var der ingen kompenserende stigning i pulsen hos rotter. I dette eksperiment fandt vi, at rotter gennemgik betydelige hæmodynamiske ændringer inden for 5 minutter efter ligation og karfrigivelse, som opfyldte definitionen af iskæmi-reperfusionssyndromet.
Iskæmi forekom i nogle væv uden for leveren. Efter den anhepatiske fase steg ECV. MAP vendte tilbage til normal efter IVC og PV blev blokeret, med skader, der forekommer uden for leveren efter reperfusion. Desuden producerede IRI af donorens lever inflammatoriske mæglere (TNF-α, interleukin-1, interleukin-6, interleukin-8), der angreb distale organer21. I dette eksperiment blev hæmodynamikken i den anhepatisk fase simuleret, hvilket forårsagede passiv overbelastning af IVC og nyre, skade på mave-tarmbarrieren, bakteriel translokation, organernes iskæmi (f.eks. lunge, hjerte, bugspytkirtel, nyre osv.), hvor SVC er placeret, og IRI til de ekstrahepatiske organer.
De patologiske fund viste, at toppen af iskæmisk skade og restitutionstiden var forskellig i hvert organ. Selv om køleopbevaring og skader forårsaget af immunfaktorer ikke kunne simuleres i denne undersøgelse, kan anhepatisk IRI replikeres og sammenlignes med andre dyremodeller for at forske i ekstrahepatisk organskade. Vores model og OLT-model kan sammenlignes og observeres for at danne grundlag for forskningen i ekstrahepatisk organskade. Desuden ligner vores model nogle kliniske leveroperationer, såsom for Hilar cholangiocarcinoma. Hilar cholangiocarcinoma er en ondartet tumor, der ofte invaderer PV eller IVC og ofte kræver PV fastspænding under operation22. Hepatisk portal genopbygning blev udført; når tumoren invaderer IVC, er intraoperativ fastspænding af IVC også påkrævet, og de resulterende hæmodynamiske ændringer er i overensstemmelse med vores model.
For at opsummere er vores model i rotter nem at bruge og ligetil uden mikrokirurgi og danner grundlag for grundforskning i IRI af ekstrahepatisk organer efter leverisk iskæmi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne af dette manuskript har ingen interessekonflikter at afsløre.
Acknowledgments
Vi vil gerne anerkende de nyttige forslag fra Dr. Wen-tao Li og Dr. Ji-hua Wu fra det andet tilknyttede hospital i Guangxi Medical University. Forfatterne vil gerne takke vores holdkammerater for nyttige kommentarer og diskussioner. Forfatterne vil også gerne takke de anonyme anmeldere og redaktører af JoVE for deres kommentarer. En særlig tak bør gå til Dr. Yuan forældre for deres fortsatte støtte og opmuntring. Arbejdet blev støttet af Ningbo Natural Science Foundation (2014A610248).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4% paraformaldehyde solution | Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd | P804536 | |
| air drying oven | Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd. | BPG | |
| Alanine aminotransferase (ALT)Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K235-S | |
| ammonia | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10002118 | |
| amylase Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K005-M | |
| anhydrous ethanol | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 100092183 | |
| Animal anesthesia machine | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | R640 | |
| aspartate aminotransferase (AST)kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| automatic biochemical analyzer. | SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosystems (when nessary) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | BL-420F | |
| Centrifuge | Baiyang Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | |
| cover glass | Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd | 10212432C | |
| creatinine Kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03076 | |
| dewatering machine | Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd | Donatello Series 2 | |
| embedding machine | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL1 | |
| frozen machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| hematoxylin-eosin dye solution | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G1005 | |
| high-efficiency paraffin wax | Shanghai huayong paraffin wax co., Ltd | Q/YSQN40-91 | |
| hydrochloric acid | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10011018 | |
| intraocular lens (IOL)forceps | Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd. | JTZRN | |
| Isoflurane | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | — | |
| micro Scissors(when nessary) | Shanghai Surgical Instrument Factory | WA1010 | |
| needle holders | Shanghai Surgical Instrument Factory | J32010 | |
| neutral gum | Shanghai Huashen Healing Equipment Co.,Ltd. | — | |
| normal optical microscope | Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd | Nikon Eclipse CI | |
| ophthalmic forceps | Shanghai Surgical Instrument Factory | J3CO30 | straight |
| ophthalmic forceps | Shanghai Surgical Instrument Factory | JD1060 | bending |
| ophthalmic Scissors | Shanghai Surgical Instrument Factory | J1E0 | |
| pathological slicer | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | |
| pipettes | Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd. | 7010101008 | |
| retractors | Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd. | JNT-KXQ | |
| scanner | Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd | Pannoramic 250 | |
| slide | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G6004 | |
| xylene | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 1330-20-7 |
References
- Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms. Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).
- Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q. Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy. World Journal of Gastroenterology. 21 (45), 12822-12834 (2015).
- Liu, Y., et al. Activation of YAP attenuates hepatic damage and fibrosis in liver ischemia-reperfusion injury. Journal of Hepatology. 71 (4), 719-730 (2019).
- Hirao, H., Dery, K. J., Kageyama, S., Nakamura, K., Kupiec-Weglinski, J. W. Heme Oxygenase-1 in liver transplant ischemia-reperfusion injury: From bench-to-bedside. Free Radical Biology and Medicine. 157, 75-82 (2020).
- Motiño, O., et al. Protective role of hepatocyte cyclooxygenase-2 expression against liver ischemia-reperfusion injury in mice. Hepatology. 70 (2), 650-665 (2019).
- Guo, W. A. The search for a magic bullet to fight multiple organ failure secondary to ischemia/reperfusion injury and abdominal compartment syndrome. Journal of Surgical Research. 184 (2), 792-793 (2013).
- Elham, M., Mahmoudi, M., Nassiri-Toosi, M., Baghfalaki, T., Zeraati, H. Post liver transplantation survival and related prognostic factors among adult recipients in tehran liver transplant center; 2002-2019. Archives of Iranian Medicine. 1 (23), 326-334 (2020).
- Kim, E. H., Ko, J. S., Gwak, M. S., Lee, S. K., Kim, G. S. Incidence and clinical significance of hyperfibrinolysis during living donor liver transplantation. Blood Coagulation and Fibrinolysis. 29 (3), 322-326 (2018).
- Czigány, Z. Improving research practice in rat orthotopic and partial orthotopic liver transplantation: a review, recommendation, and publication guide. European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).
- Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).
- Zimmermann, F. A., et al. Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts. Transplantation Proceedings. 11 (1), 571-577 (1979).
- Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses. Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).
- Kamada, N. A., Calne, R. Y. Surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat. Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).
- Yang, L. F., et al. A rat model of orthotopic liver transplantation using a novel magnetic anastomosis technique for suprahepatic vena cava reconstruction. Journal of Visualized Experiments. 19 (133), e56933 (2018).
- Liu, L. X., He, C., Huang, T., Gu, J. Development of a new technique for reconstruction of hepatic artery during liver transplantation in sprague-dawley rat. PLoS One. 10 (12), 0145662 (2015).
- Paller, M. S., Hoidal, J. R., Ferris, T. F. Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure In the rat. Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1156-1164 (1984).
- Schmidt, J., Lewandrowsi, K., Warshaw, A. L., Compton, C. C., Rattner, D. W. Morphometric characteristics and homogeneity of a new model of acute pancreatitis in the rat. International Journal of Pancreatology. 12 (1), 41-51 (1992).
- Chui, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal. Archives of Surgery. 101 (4), 478-483 (1970).
- Kozian, A., et al. One-lung ventilation induces hyperfusion and alveolar damage in the ventilated lung:an experimental study. British Journal of Anaesthesia. 100 (4), 549-559 (2008).
- Shimada, S., et al. Heavy water (D2O) containing preservation solution reduces hepatic cold preservation and reperfusion injury in an isolated perfused rat liver (IPRL) model. Journal of Clinical Medicine. 8 (11), 1818 (2019).
- Nakamura, K. Sirtuin 1 attenuates inflammation and hepatocellular damage in liver transplant ischemia/reperfusion: from mouse to human. Liver Transplantation. 23 (10), 1282-1293 (2017).
- Blaire, A., et al.
