Detta dokument beskriver ischemia-reperfusion (I/R) modellering i en 3-dagars kyckling embryo med hjälp av en spinal nål anpassade krok för att bättre förstå I/R utveckling och behandling. Denna modell är enkel, snabb och billig.
Ischemi och reperfusion (I/R) störningar, såsom hjärtinfarkt, stroke och perifera vaskulär sjukdom, är några av de främsta orsakerna till sjukdom och död. Många in vitro- och in vivo-modeller finns för närvarande tillgängliga för att studera I/R-mekanismen i sjukdom eller skadade vävnader. Hittills har dock ingen i ovo I/R-modell rapporterats, vilket skulle möjliggöra en bättre förståelse för I/R-mekanismer och snabbare läkemedelsscreening. Detta dokument beskriver I/R modellering med hjälp av en spinal nål anpassade krok i en 3-dagars kyckling embryo för att förstå I/R utveckling och behandling mekanismer. Vår modell kan användas för att undersöka anomalier på DNA-, RNA- och proteinnivåerna. Denna metod är enkel, snabb och billig. Den nuvarande modellen kan användas oberoende eller i kombination med befintliga in vitro- och in vivo I/R-modeller.
Ischemia-reperfusion vävnad skada har kopplats till ett antal patologier, inklusive hjärtinfarkt, skandinavisk stroke, trauma och perifera vaskulär sjukdom1,2,3,4,5. Detta beror främst på bristande en omfattande förståelse för sjukdomsprogressionen och avsaknaden av en effektiv forskningsmodell. Ischemisk skada uppstår när blodtillförseln till ett visst område av vävnaden är avskuren. Som ett resultat, ischemisk vävnad så småningom necrotizes, även om hastigheten varierar beroende på vävnaden. Därför kan återställande av blodtillförseln bidra till att mildra skadorna. Det har dock observerats, i vissa fall, att reperfusion orsakar mer vävnadsskador än ischemi ensam gör6,7,8. Därför krävs förståelse för de molekylära och cellulära mekanismerna för ischemi-reperfusion för att utveckla en effektiv terapeutisk intervention. För närvarande är ingen effektiv behandling för I/ R skador känd. Denna skillnad har lett till skapandet av nya experimentella modeller, allt från in vitro till in vivo-modeller, för att ta itu med det befintliga problemet9,10,11,12,13.
Kycklingembryon (Gallus gallus domesticus) används ofta i forskning på grund av deras lättillgänglighet, etisk acceptans, relativt stor storlek (jämfört med andra embryon), låg kostnad och snabb tillväxt14. Vi använde en kyckling embryo vid 72 h av utveckling för att skapa en in ovo I/R genom att ocklusive och släppa rätt vitelline gatan med hjälp av en spinal nål. Vi döpte den till Hook-I/R ischemia-reperfusion-modellen (figur 1). Modellen som används i denna studie kan exakt simulera alla nedströmsprocesser, inklusive oxidativa och inflammatoriska vägar, som ofta är förknippade med I/R-skador15,16,17.
Målet med ischemi-reperfusion forskning är att skapa terapeutiska strategier som förhindrar celldöd och främja återhämtning29,30. För att övervinna nuvarande begränsningar i I/R-forskning utformade vi en Hook I/R chick embryo modell för att producera en pålitlig och reproducerbar I/R-modell. Såvitt vi vet är vår första I/R-modell som någonsin skapats i ett 3-dagars kycklingembryon för rutinmässiga I/R-experiment, förutom att studera stresssign…
The authors have nothing to disclose.
Vi vill uttrycka vår tacksamhet till Hari Shankar för hans kritiska ingångar under videografi och redigering, Mr. Baqer Hussain för voice-over, Mr. Asghar Rizvi för videoredigering, Mr. Mohammad Haider för videoinspelningar, Mr. Mohammad Danish Siddiqui för hjälp under experimenten.
(-80°C) freezer | Haier, China | – | |
1.5mL Centrifuge tube | TARSONS, India | 500010X | |
100mm Petri dish (sterile) | Tarsons, India | 460050 | |
18G Needle (18G×1.5 (1.25×38mm) | Ramsons, India | 13990 | |
1mL Syringe | DISPO VAN | – | |
26G Needle (26G×1/2 (10.45x13mm) | DISPO VAN, india | 30722D | |
37°C egg incubator with adjustable percentage humidity | Gentek, India | GL-100 | |
37°C laboratory incubator | SCIENCE TECH, India | CB 101-14 | |
3-Methyladenine (3-MA) | Sigma Aldrich, USA | M9281 | |
3mL Pasture Pipette | TARSONS, India | 940050 | |
50mL Beaker | TARSONS, India | – | |
5mL Syringe | DISPO VAN, India | IP53 | |
70% ethanol | Merck Millipore, United States | 64-17-5 | |
Adhesive tape/Cello tape | Sunrise, India | – | |
Ambra1 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00387943_m1 | |
Anti-mouse IgG | Cell Signaling Technology, USA | 7076S | |
Anti-Rabbit IgG | Jackson Immuno Research Laboratories, USA | 711-035-152 | |
Atg7 | R&D Systems, USA | MAB6608 | |
Atg7 primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs00893766_m1 | |
Autoclave Bag | Tarsons, India | 550022 | |
Autoclave Machine | Local made, Lucknow, India | – | |
Beclin-1 | Proteintech, USA | 66665-1-Ig | |
Beta Actin | ImmunoTag, USA | ITT07018 | |
Bovine Serum Albumin | Himedia, Mumbai, India | TC194 | |
Calcium Chloride | Himedia, Mumbai, India | GRM534 | |
Catalase | ImmunoTag, USA | ITT5155 | |
Cleaning wipes | Kimberly-Clark, India | 370080 | |
Cleaved Caspase3 | ImmunoTag, USA | ITT07022 | |
di-Sodium hydrogen phosphate heptahydrate | Himedia, Mumbai, India | GRM39611 | |
Doppler blood flowmeter | Moors instrument, United Kingdom | moorVMS-LDF1 | |
Egg rack | – | – | |
Egg rack | – | – | |
GAPDH | ImmunoTag, USA | M1000110 | |
GAPDH primers | Applied Biosystems, Foster city, USA | Hs02758991_g1 | |
Glycine | Himedia, Mumbai, India | MB013 | |
Kidney tray | HOSPITO | – | |
LC3A/B | Cell Signaling Technology, USA | 4108S | |
Methanol | Rankem laboratories, Mumbai, India | M0252 | |
Micromanipulator | Narishige, Japan | M-152 | |
N-acetyl-L-cysteine (NAC) | Sigma Aldrich, USA | A7250 | |
Naringenin | Sigma Aldrich, USA | 67604-48-2 | |
NF-kβ | Thermo Fisher Scientific, USA | 51-0500 | |
NLRP3 | ImmunoTag, USA | ITT07438 | |
Nose plier | Local made, Lucknow, India | – | |
Ocular forceps | Stoelting, Germany | 52106-40 | |
Ocular iris | Tufft Surgical Instruments, Jaipur, India | Hard Age Vannas Micro Scissors Angled 8CM / 3 1/8" | |
OHP marker pen | Camlin, India | – | |
ORP-150 | ImmunoTag, USA | ITT08329 | |
Pointed sharp edge scissor | Stoelting, Germany | 52132-11 | |
Potassium Chloride | Himedia, Mumbai, India | MB043 | |
Potassium phosphate monobasic anhydrous | Himedia, Mumbai, India | MB050 | |
Protease Inhibitor | Abcam, United States | Ab65621 | |
SOD-1 | ImmunoTag, USA | ITT4364 | |
Sodium Chloride | Fisher Scientific, Mumbai, India | 27605 | |
Sodium dodecyl sulphate | Himedia, Mumbai, India | GRM886 | |
Spinal needle 25GA; 3.50 IN (90.51 X 90mm) | Ramson, India | GS-2029 | |
Stereo Zoom surgical microscope | Olympus, Japan | SZ2-STU3 | |
Syringe discarder | BIOHAZARD | 882210 | |
Toothed forceps | Stoelting, Germany | 52102-30 | |
Tris Base | G Biosciences, United States | RC1217 | |
Tris Hydrochloric Acid | Himedia, Mumbai, India | MB030 | |
Tween 20 | G Biosciences, United States | RC1227 | |
White Leghorn Chicken 0-day eggs | – | – | |
Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK | MP Biomedicals, LLC, USA | FK009 |