पैक्स 8 में एंडोमेट्रियल कैंसर की प्रगति का गैर-इनवेसिव अल्ट्रासाउंड मूल्यांकन- चूहों में ट्यूमर सप्रेसर्स एरिड 1 ए और पीटीईएन के निर्देशित विलोपन
Summary
यह प्रोटोकॉल सकल और हिस्टोलॉजिकल परिवर्तनों के सहसंबंध के साथ अल्ट्रासाउंड इमेजिंग का उपयोग करके एंडोमेट्रियल कैंसर के इंड्यूसेबल माउस मॉडल में गर्भाशय में समय के साथ रूपात्मक परिवर्तनों की प्रगति की निगरानी के लिए एक विधि का वर्णन करता है।
Abstract
इन मॉडलों में हैंडलिंग और आनुवंशिक हेरफेर में आसानी के कारण चूहों में गर्भाशय के कैंसर का अध्ययन किया जा सकता है। हालांकि, ये अध्ययन अक्सर विभिन्न समूहों में कई समय बिंदुओं पर इच्छामृत्यु वाले जानवरों में पैथोलॉजी पोस्ट-मॉर्टम का आकलन करने तक सीमित होते हैं, जिससे अध्ययन के लिए आवश्यक चूहों की संख्या बढ़ जाती है। अनुदैर्ध्य अध्ययन में इमेजिंग चूहे व्यक्तिगत जानवरों में बीमारी की प्रगति को ट्रैक कर सकते हैं, जिससे चूहों की संख्या कम हो सकती है। अल्ट्रासाउंड प्रौद्योगिकी में प्रगति ने ऊतकों में माइक्रोमीटर-स्तर के परिवर्तनों का पता लगाने की अनुमति दी है। अल्ट्रासाउंड का उपयोग अंडाशय में कूप परिपक्वता और जेनोग्राफ्ट विकास का अध्ययन करने के लिए किया गया है, लेकिन माउस गर्भाशय में रूपात्मक परिवर्तनों पर लागू नहीं किया गया है। यह प्रोटोकॉल एक प्रेरित एंडोमेट्रियल कैंसर माउस मॉडल में विवो इमेजिंग तुलना के साथ पैथोलॉजी के जुड़ाव की जांच करता है। अल्ट्रासाउंड द्वारा देखी गई विशेषताएं सकल पैथोलॉजी और हिस्टोलॉजी द्वारा देखे गए परिवर्तन की डिग्री के अनुरूप थीं। अल्ट्रासाउंड को देखे गए पैथोलॉजी का अत्यधिक पूर्वानुमान लगाने वाला पाया गया, जो चूहों में कैंसर जैसे गर्भाशय रोगों के अनुदैर्ध्य अध्ययन में अल्ट्रासोनोग्राफी को शामिल करने का समर्थन करता है।
Introduction
चूहे प्रजनन संबंधी विकारों के लिए सबसे महत्वपूर्ण पशु मॉडल में से एक बने हुएहैं 1,2,3. डिम्बग्रंथि और गर्भाशय के कैंसर के कई आनुवंशिक रूप से संशोधित या प्रेरित कृंतक मॉडल हैं। ये अध्ययन आम तौर पर आकृति विज्ञान और पैथोलॉजिकल परिवर्तनों में अनुदैर्ध्य रुझानों को पकड़ने के लिए अलग-अलग समय बिंदुओं पर इच्छामृत्यु के कई समूहों पर भरोसा करते हैं। यह एक व्यक्तिगत माउस में कैंसर के विकास पर निरंतर डेटा प्राप्त करने की क्षमता को रोकता है। इसके अतिरिक्त, व्यक्तिगत माउस रोग की प्रगति की स्थिति को जानने के बिना, हस्तक्षेप अध्ययन पूर्व निर्धारित समय बिंदुओं पर आधारित होते हैं और एक विशिष्ट जानवर 4,5 में प्रगति का पता लगाने के लिए व्यक्तिगत थ्रेसहोल्ड के बजाय पिछले समूहों के औसत निष्कर्ष होते हैं। इसलिए, इमेजिंग दृष्टिकोण जो जीवित जानवरों में अनुदैर्ध्य मूल्यांकन की अनुमति देते हैं, नई दवाओं या यौगिकों के परीक्षण के लिए प्रीक्लिनिकल मॉडल की सुविधा के लिए आवश्यक हैं और कठोरता और प्रजनन क्षमता को बढ़ाते हुए पैथोबायोलॉजी की समझ में तेजी लातेहैं।
अल्ट्रासाउंड इमेजिंग (यूएस) माउस गर्भाशय कैंसर की प्रगति की अनुदैर्ध्य निगरानी के लिए एक आकर्षक विधि है क्योंकि यह अन्य इमेजिंग विधियों की तुलना में अपेक्षाकृत आसान और सस्ती है, प्रदर्शन करना आसान है, और उल्लेखनीय संकल्प 6,7 हो सकता है। यह गैर-इनवेसिव साधन जागृत चूहों में माइक्रोन स्केल पर या 5-10 मिनट की परीक्षा का उपयोग करके संक्षिप्त बेहोशी के तहत चूहों के साथ सुविधाओं को पकड़ सकता है। अल्ट्रासाउंड माइक्रोस्कोपी को माउस डिम्बग्रंथि कूप विकास 8 और प्रत्यारोपित या प्रेरित नियोप्लासिया 9,10,11 के विकास को मापने के लिए एक विधि के रूप में मान्य किया गया है। उच्च आवृत्ति वाले यूएस का उपयोग पर्क्यूटेनियस अंतर्गर्भाशयी इंजेक्शन12 और एस्ट्रस चक्र13 में चूहे के गर्भाशय के परिवर्तन को देखने के लिए भी किया गया है। उच्च-आवृत्ति यूएस का उपयोग विशेष स्थिर प्लेटफार्मों पर चूहों के साथ किया जा सकता है जो मानकीकृत स्थिति और दबाव के साथ उच्च-रिज़ॉल्यूशन छवियों को कैप्चर करने के लिए ट्रांसड्यूसर / प्रोब को पकड़ने के लिए रेल प्रणाली का उपयोग करते हैं; हालांकि, यह उपकरण सभी संस्थानों में उपलब्ध नहीं है। हैंड-हेल्ड ट्रांसड्यूसर स्कैनिंग विधियों को कम समर्पित उपकरणों के साथ अपनाया जा सकता है और चूहों में नैदानिक निदान और अनुसंधान अनुप्रयोगों दोनों के लिए उपयोग किया जा सकता है।
सवाल यह है कि क्या कई हफ्तों में गर्भाशय के कैंसर के विकास की निगरानी के लिए हैंड-हेल्ड, उच्च-आवृत्ति जांच के साथ यूएस इमेजिंग का उपयोग किया जा सकता है। आंतों के समान, कृंतक गर्भाशय एक पतली दीवार वाली, पतली संरचना है जो पेट के भीतर बहुत गतिशील है और कई ऊतक गहराई के माध्यम से सन्निहित है, जिससे गुर्दे जैसे अपेक्षाकृत गतिहीन अंगों की तुलना में इमेजिंग अधिक चुनौतीपूर्ण हो जाती है। इस अध्ययन ने अल्ट्रासाउंड और हिस्टोपैथोलॉजी द्वारा देखे गए ऊतकों के बीच सहसंबंध स्थापित करने, माउस गर्भाशय का पता लगाने के लिए स्थलों को परिभाषित करने और एंडोमेट्रियल कैंसर के अनुदैर्ध्य मूल्यांकन की व्यवहार्यता निर्धारित करने की मांग की। यह अध्ययन यूएस और हिस्टोपैथोलॉजी द्वारा चित्रित यूटेरी की उपस्थिति के साथ-साथ कई हफ्तों में चूहों की सीरियल इमेजिंग के बीच गुणात्मक पत्राचार दिखाने वाले डेटा प्रस्तुत करता है। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि चूहों में एंडोमेट्रियल कैंसर के विकास की निगरानी के लिए हाथ से पकड़े गए यूएस का उपयोग किया जा सकता है, इस प्रकार समर्पित उपकरणों की आवश्यकता के बिना गर्भाशय के कैंसर का अध्ययन करने के लिए व्यक्तिगत माउस अनुदैर्ध्य डेटा एकत्र करने का अवसर पैदा होता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
यह प्रोटोकॉल चूहों में गर्भाशय में एडेनोकार्सिनोमा की प्रगति में गर्भाशय रूपात्मक परिवर्तनों का आकलन करने के लिए अल्ट्रासाउंड की उपयोगिता की जांच करता है। इस अध्ययन में, चूहों में अनुदैर्ध्य रूप से …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम एनसीआई डिम्बग्रंथि के कैंसर बीजाणु कार्यक्रम पी 50 सीए 228 9 9 1, पोस्ट-डॉक्टरेट प्रशिक्षण कार्यक्रम 5 टी 32 ओडी 011089 और रिचर्ड डब्ल्यू टेलिंडे एंडोमेंट, जॉन्स हॉपकिंस विश्वविद्यालय से वित्त पोषण के लिए आभारी हैं। परियोजना को आंशिक रूप से जापान के निजी स्कूलों के लिए संवर्धन और पारस्परिक सहायता निगम से उच्च शिक्षा के निजी संस्थानों को वर्तमान व्यय के लिए सब्सिडी द्वारा वित्त पोषित किया गया था।
Materials
| Reagents and Equipment Used for Animal Care | |||
| Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline) | Envigio | TD.01306 | Mouse Feed |
| Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging | |||
| 10 mL injectable 0.9% NaCl | Hospira, Inc | RL-7302 | Isotonic Fluid |
| Absorbent Pad with Plastic Backing | Daigger | EF8313 | Absorbant Pads |
| Anesthesia Induction Chambers | Harvard Apparatus | 75-2029 | Induction Chamber |
| Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, & adapters | CWE, Inc | 13-20000 | Nose Cone and Tubing |
| Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter) | Parker Laboratoies | 08-03 | Ultrasound Gel |
| BD Plastipak 3 mL Syringe | BD Biosciences | 309657 | Syringe |
| F/Air Scavenger Charcoal Canister | OMNICON | 80120 | Scavenging System for Anesthesia |
| Isoflurane, USP | Vet One | 502017 | Anesthesia Agent |
| M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine | Scivena Scientific | M1050 | Anestheic Vaporizer |
| MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear | VisualSonics | MX550S | Ultrasound Transducer (Probe) |
| Nair Hair Aloe & Lanolin Hair Removal Lotion – 9.0 oz | Nair | Depilliating Cream | |
| Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000 | Philips North America | MG7750 | Clippers |
| PrecisionGlide 25 G 1" Needle | BD Biosciences | 305125 | Needle |
| Puralube Ophthalmic Ointment | Dechra | 17033-211-38 | Lubricating Eye Drops |
| Vevo 3100 Imaging System | VisualSonics | Vevo 3100 | Ultrasound Machine |
| Vevo LAB 5.6.1 | VisualSonics | Vevo LAB 5.6.1 | Ultrasound Analysis Software |
| Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15" | Sunbeam | 731-500-000R | Heating Pad |
| Wd Elements 2TB Basic Storage | Western Digital Elements | WDBU6Y0020BBK-WESN | Data Storage |
| Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry | |||
| 10% w/v Formalin | Fischer Scientific | SF98-4 | Tissue Fixation Buffer |
| Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U. | Vector Laboratories Inc. | SP5035 | Antibody Blocker |
| Charged Super Frost Plus Glass Slides | VWR | 4831-703 | Tissue Mounting Slides |
| Citrate Buffer | MilliporeSigma | C9999-1000ML | Epitope Retrival Buffer (pTEN) |
| Cytoseal – 60 | Thermo Scientific | 8310-4 | Resin for Slide Sealing |
| Gold Seal Cover Glass | Thermo Scientific | 3322 | Coverslide |
| Harris Modified Hematoxylin | MilliporeSigma | HHS32-1L | Counterstain Buffer |
| Hybridization Incubator (Dual Chamber) | Fischer Scientific | 13-247-30Q | Oven to Melt Parraffin |
| ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP) | Vector Laboratories Inc. | SK-4105 | Signal Development Substrate |
| ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase | Vector Laboratories Inc. | MP-7451 | Secondary IHC Antibody |
| Oster 5712 Digital Food Steamer | Oster | 5712 | Vegetable Steamer for Epitope Retrival |
| rabbit mAB anti-ARID1a | abcam | ab182560 | Primary IHC Antibody (1:1,000) |
| rabbit mAB anti-PTEN | Cell Signaling | 9559 | Primary IHC Antibody (1:100) |
| Scotts Tap Water Substitute | MilliporeSigma | S5134-100ML | "Blueing" Buffer |
| Tissue Path IV Cassette | Fischer Scientific | 22272416 | Tissue Fixation Cassette |
| Trilogy Buffer | Cell Marque | 920P-10 | Epitope Retrival Buffer (ARID1a) |
References
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