Summary
Der tilvejebringes en generel protokol for den kombinerede enzymatiske og halvautomatiske mekaniske dissociation af væv til generering af enkeltcellesuspensioner til downstream-analyser, såsom flowcytometri. Instruktioner til fremstilling, montering og drift af den billige mekaniske enhed, der er udviklet til denne protokol, er inkluderet.
Abstract
At kunne isolere og forberede enkeltceller til analyse af vævsprøver er hurtigt blevet afgørende for nye biomedicinske opdagelser og forskning. Manuelle protokoller til enkeltcelleisolering er meget tidskrævende og tilbøjelige til brugervariation. Automatiserede mekaniske protokoller er i stand til at reducere behandlingstid og prøvevariabilitet, men er ikke let tilgængelige eller omkostningseffektive i forskningsindstillinger med lavere ressourcer. Enheden beskrevet her blev designet til halvautomatisk vævsdissociation ved hjælp af kommercielt tilgængelige materialer som et billigt alternativ til akademiske laboratorier. Der er givet instruktioner til fremstilling, samling og betjening af enhedens design. Dissociationsprotokollen producerer pålideligt enkeltcellesuspensioner med sammenlignelige celleudbytter og prøvelevedygtighed til manuelle præparater på tværs af flere musevæv. Protokollen giver mulighed for at behandle op til 12 vævsprøver samtidigt pr. enhed, hvilket gør undersøgelser, der kræver store prøvestørrelser, mere håndterbare. Den ledsagende software giver også mulighed for tilpasning af enhedsprotokollen for at imødekomme forskellige væv og eksperimentelle begrænsninger.
Introduction
Enkeltcelleanalyse er hurtigt blevet afgørende for nye biomedicinske opdagelser, hvad enten det drejer sig om applikationer som flowcytometri, identifikation af forskellige celletyper, enkeltcellesekventering eller til identifikation af genomiske eller transkriptomiske variationer mellem celler1. Udførelse af sådanne celleisoleringer fra væv af interesse kræver hakning af dissekeret væv og skubbe dem gennem en fincellesil for at filtrere bindevæv fra de ønskede celler (figur 1A). Isolering af klæbende celletyper, såsom dendritiske celler eller makrofager eller celler fra særligt fibrøst væv, kræver yderligere mekaniske eller enzymatiske separationstrin 2,3,4. Denne proces udføres generelt manuelt, hvilket gør den meget tidskrævende og tilbøjelig til brugervariabilitet ved vurdering af celleudbytter og prøvelevedygtighed. Derfor er det afgørende at introducere tilpassede muligheder for automatiseret vævsdissociation. Selv om der er gjort visse forsøg på at designe sådanne systemer, er de eksisterende muligheder ikke altid let tilgængelige, især i akademiske laboratorier og miljøer med lavere ressourcer, hovedsagelig på grund af disse enheders omkostningsuoverkommelige karakter5. Desuden kan disse enheder ikke altid tilpasses til de individuelle behov i en forskningsgruppe6.
Her blev en vævsdissociatoranordning designet til at automatisere fordøjelsen af hele væv eller vævsstykker i enkeltcellesuspensioner ved hjælp af fordøjelsesenzymer og mekanisk forstyrrelse. Denne enhed kan let samles i laboratoriet, placeres i varme- eller kølekamre til temperaturregulering, tilpasses til det krævede antal væv til dissociering og programmeres med de ønskede dissociationsprotokoller. Den brede anvendelse af denne enhed kunne forbedre reproducerbarheden af celleekstraktionsprotokoller betydeligt og give et tidsbesparende alternativ til manuel dissociation.
Designet giver mulighed for samtidig fordøjelse af op til 12 væv gennem en automatiseret proces. Enheden består af 12 individuelle motorer, der er forbundet parallelt og drives af et standard vægstik gennem en AC / DC-adapter med et justerbart spændingshjul til styring af motorernes rotation / hastighed. Motorerne drejer en unbrakobolt, der passer tæt ind i toppen af C-rørene. C-rørene holdes på plads ved nedadgående spænding på en akrylplade, der låser på hver side til toppladen, hvor motorerne er fastgjort (figur 1B). Fordi motorerne er forbundet parallelt, bør deres hastighed ved en given spænding ikke variere meget, men belastningen (antallet af C-rør monteret på enheden) vil påvirke hastigheden, selv når spændingen holdes konstant. For at måle rotationer pr. minut (omdr./min.) er der indbygget et omdrejningstæller ved hjælp af en hall-effektsensor og en fast magnet på en af motorakslerne (supplerende figur 1). CAD-filerne til opbygning af motorarrays findes i supplerende kodningsfil 1. Der medfølger også en programmerbar kontakt til at vende rotationsretningen ved at vende de positive/negative ladninger, der leveres til motorerne. Alle disse funktioner er integreret ved hjælp af kodet software (Arduino IDE-software, se materialetabel) på en Arduino Nano (supplerende kodningsfil 2). Ved hjælp af tilsluttede knapper og et LCD-panel (supplerende figur 2) er det muligt at oprette og køre gemte og brugerdefinerede protokoller, automatisk vende rotationsretningen på bestemte tidspunkter af en protokol, justere hastigheden ved hjælp af spændingen (supplerende figur 3) og vise den aktuelle motorhastighed og den tid, der er tilbage til at fuldføre en programmeret protokol (supplerende figur 4).
Til denne undersøgelse blev enkeltcellesuspensioner fremstillet under anvendelse af både mekanisk-enzymatisk vævsdissociation med denne enhed og manuel-enzymatisk vævsdissociation for at bestemme eventuelle forskelle i celler, der blev genfundet til downstream-applikationer. Cellepræparaterne blev evalueret baseret på samlede celleudbytter pr. væv og procent cellelevedygtighed. Flowcytometri blev brugt til at sammenligne potentielle forskelle i overflademarkørekspression. Data blev analyseret ved hjælp af graftegning og statistisk analyse software. Uparrede Welch t-tests blev brugt til at sammenligne par af prøver eller grupper, hvor prøvestørrelser n > 4 mus repræsenterede 2 replikate eksperimenter. Detaljerede instruktioner til fremstilling og samling af denne enhed findes i supplerende fil 1. Materialer, der er nødvendige til denne protokol, er angivet i materialetabellen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne protokol blev godkendt af UMD Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Væv fra 7 til 9 uger gamle C57BL/6J-hunmus blev anvendt til disse undersøgelser. Dyrene blev hentet fra en kommerciel kilde (se materialetabel).
1. Manuel afkobling
BEMÆRK: Dette trin er tilpasset fra Maisel K. et al.7.
- Fjern dissekeret væv og læg det i koldcellekulturmedier med 5% føtalt bovint serum (FBS).
- Hak vævet ved hjælp af en skarp dissektionssaks, indtil fragmenterne er mindre end 1 mm i nogen dimension.
- Overfør hakket væv til et 15 ml konisk rør og tilsæt 5 ml medier.
- Tilføj fordøjelsesenzymer baseret på vævs- og celletyperne, der isoleres. Til de præsenterede eksperimenter skal du bruge Collagenase 4 (1 mg / ml), Collagenase D (1 mg / ml) og DNase (40 μg / ml).
- Der inkuberes på en shaker eller vipper i 1 time ved 37 °C med let omrøring under hele inkubationen. Prøven pipetteres op og ned 100 gange.
- Tilføj EDTA for at opnå et prøvevolumen med en koncentration på 5 mM. Prøven pipetteres op og ned 100 gange, og prøven pipetteres derefter kraftigt op og ned 100 gange.
- Før prøven gennem en 70 μm cellesil og opsaml den i et 50 ml eller 15 ml rør.
- De opsamlede celler centrifugeres ved 300 x g i 5 minutter ved 4 °C. Supernatanten fjernes med en pipette og resuspenderes cellerne i 1 ml cellestoppude for røde blodlegemer. Inkuber i 1 min ved stuetemperatur.
- Neutraliser lysisbufferen ved at tilsætte 9 ml koldt 1X fosfatbufret saltvand (PBS).
- De opsamlede celler centrifugeres igen ved 300 x g i 5 minutter ved 4 °C. Supernatanten fjernes med en pipette og opslæmmes cellerne igen i den ønskede buffer eller det ønskede medie.
2. Halvautomatisk mekanisk dissociation
- Placer dissekeret væv i koldcellekulturmedier med 5% føtalt bovint serum (FBS).
BEMÆRK: Denne protokol er beregnet til celleisolering fra fast væv. - Hak vævet ved hjælp af en skarp dissektionssaks, indtil vævsfragmenterne er ca. 5 mm i en hvilken som helst dimension. Overfør det hakkede væv til et C-rør og tilsæt 1 ml medie.
- Læg C-røret på enheden. Rørholderpladen (supplerende figur 1A) anbringes over de D-formede rørbunde.
- Fastgør rørene til motorpladen ved at låse spændearmene fast i akrylpladen (supplerende figur 3).
- Indstil et brugerdefineret program: Fremad, 30 s; Baglæns, 10 s; Løkke, 4 gange.
- Vælg Brugerdefineret tilstand i hovedmenuen ved at trykke på den blå knap.
- I den første brugerdefinerede tilstandsmenu skal du angive varigheden af fremadrotation til 30 s ved at trykke på den røde knap, indtil værdien på skærmen læser 30 s. Tryk på den blå knap for at vælge denne værdi og gå videre til næste menuskærm.
- I den anden brugerdefinerede tilstandsmenu skal du angive varigheden af omvendt rotation til 10 s ved at trykke på den røde knap, indtil værdien på skærmen læser 10 s. Tryk på den blå knap for at vælge denne værdi og gå videre til næste menuskærm.
- I den tredje brugerdefinerede tilstandsmenu skal du angive det antal gange, der skal gentages de valg, der er angivet i trin 2.5.2-2.5.3, ved at trykke på den røde knap, indtil værdien på skærmen læser 4X. Tryk på den blå knap for at vælge denne værdi og starte programmet.
BEMÆRK: Brugerdefinerede programmer gemmes ikke i enhedens hukommelse, men kan programmeres som et af de forudindstillede programmer til hurtigere drift (enhedsprogrammeringsinstruktioner findes i supplerende fil 1).
- Kør det brugerdefinerede program ved 200 o / min ved at justere spændingskontrolhjulet (supplerende figur 3), indtil den beregnede omdrejningstalsværdi i nederste højre hjørne af LCD-skærmen læser 200 (supplerende figur 4).
- Tilsæt fordøjelsesenzymer i 4 ml medier i henhold til vævs- og celletyperne, der isoleres.
BEMÆRK: Til de præsenterede eksperimenter skal du bruge Collagenase 4 (1 mg / ml), Collagenase D (1 mg / ml) og DNase (40 μg / ml). - Læg C-røret på enheden, og gentag trin 2.3-2.6 for at køre følgende program ved 200 o / min: Fremad, 30 s; Baglæns, 10 s; Løkke, 4 gange.
- Overfør apparatet med rørene stadig fyldt til en 37 °C inkubator i 45 minutter.
- Læg C-røret på enheden, og gentag trin 2.3-2.6 for at køre følgende program ved 50 o / min: Fremad, 270 s; Baglæns, 30 s; Løkke, 9 gange.
- Der tilsættes EDTA for at opnå en koncentration på 5 mM i prøven.
- Læg C-røret på enheden, og gentag trin 2.3-2.6 for at køre følgende program ved 100 o / min: Fremad, 30 s; Baglæns, 10 s; Løkke, 2 gange.
- Skub prøven gennem en 70 μm cellesil og opsaml den i et 50 ml eller 15 ml rør.
- De opsamlede celler centrifugeres ved 300 x g i 5 minutter ved 4 °C. Supernatanten kasseres med en pipette og resuspenderes cellerne i 1 ml lysebuffer for røde blodlegemer. Inkuber i 1 min ved stuetemperatur.
- Neutraliser lysisbufferen med 9 ml koldt fosfatbufret saltvand (PBS).
- De opsamlede celler centrifugeres igen ved 300 x g i 5 minutter ved 4 °C. Supernatanten kasseres med en pipette og cellerne resuspenderes i den ønskede buffer eller det ønskede medie.
3. Analyse af data
- Analyser dataene ved hjælp af en graf- og statistisk analysesoftware (se materialetabel).
- Brug uparrede Welch t-tests til at sammenligne par af prøver eller grupper, hvor prøvestørrelser n > 4 mus repræsenterer 2 replikate eksperimenter.
BEMÆRK: Forskelle blev betragtet som statistisk signifikante, når (p < 0,05). *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001, ****p < 0,0001.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Denne halvautomatiske mekaniske protokol kan replikere resultater fra eksperimenter, hvor celler blev behandlet manuelt. Cellesuspensioner fremstillet ved hjælp af denne enhed og ved manuel dissociation viser sammenlignelige celleudbytter og prøvelevedygtighed på tværs af muselunge-, nyre- og hjertevæv (figur 2A, B). Populationer af immunceller, såsom T-celler og dendritiske celler, blev ikke signifikant påvirket af en forskel i isolationsprotokol (figur 2C). Tilsvarende viser analysen af overflademarkørekspression på disse immuncellepopulationer lignende frekvenser af isolerede T-celler (figur 3A) og sammenlignelig gennemsnitlig fluorescensintensitet for antigenpræsentationsmarkøren MHC-II i dendritiske celler (figur 3B) mellem manuel isolering og enhedsisolering.
Figur 1: Procesdiagrammer. (A) Trin i processen med at forberede enkeltcellesuspension ved hjælp af en simpel dissociatoranordning vs. manuel dissociation. (B) Dissociatoranordningens design og funktioner. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Celleudbytte og levedygtighed mellem manuelle og mekaniske dissociationsprotokoller. (A) levedygtighed og (B) udbytte af celler fra forskellige væv umiddelbart efter fremstilling af cellesuspension talt med et hæmocytometer før flowfarvning. (C) Celletal for immuncellepopulationer identificeret ved flowcytometri. Uparrede Welch t-tests blev brugt til at sammenligne par af prøver eller grupper. Forskelle blev betragtet som statistisk signifikante, når p < 0,05. *p< 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001, ****p < 0,0001. Fejlbjælker repræsenterer SEM. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Sammenligning af immunofænotypisk analyse af enkeltcellesuspensioner. Flowcytometri sammenligning af overflademarkørekspression i enkeltcellesuspensioner fremstillet ved anvendelse af en mekanisk dissociatoranordning vs. manuel dissociation. (A) Lunge CD4 + og CD8 + T-cellepopulationer. B) Gennemsnitlig fluorescensintensitet (MFI) af overflade MHC-II på dendritiske lungeceller. Uparrede Welch t-tests blev brugt til at sammenligne par af prøver eller grupper. Forskelle blev betragtet som statistisk signifikante, når p < 0,05. *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001, ****p < 0,0001. Fejlbjælker repræsenterer SEM. Klik her for at se en større version af denne figur.
Supplerende figur 1: Motorsamling. (A) Billeder af CAD-filer af akrylplader. (B) Montering af motor/kobling/hex-bolt/motorafstandsenhed på motorpladen. c) Omdrejningstalssensor. (D) Motorarray. (E) Motorledningsdiagram. Klik her for at downloade denne fil.
Supplerende figur 2: Samling af kontrolpanel. (A) Billede af kontrolpanelets CAD-fil. (B) Ledningsdiagram over kontrolpanel/strømforsyning. Klik her for at downloade denne fil.
Supplerende figur 3: Betjening af enheden. (A) C-rør lastet på anordningen og fastgjort med rørholderpladen og spændingsarmene. (B) Variabel spændingsregulator med drejeknap. Klik her for at downloade denne fil.
Supplerende figur 4: Softwarebetjening - kontrolpaneltilstande. (A) LCD-skærme og tryk på knapper til forskellige former for betjening af enheden. Klik her for at downloade denne fil.
Supplerende fil 1: Instruktioner til fremstilling, samling og betjening af enheden. Klik her for at downloade denne fil.
Supplerende kodningsfil 1: CAD-filer til opbygning af motorarrays. Denne fil indeholder CAD-filer til opbygning af motor arrays af 2, 4, 6, 8, 10 og 12. Se supplerende fil 1 for detaljer. Klik her for at downloade denne fil.
Supplerende kodningsfil 2: Softwarekode til Arduino Nano. Klik her for at downloade denne fil.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne enhed er designet til nem montering i forskningsindstillingen for at tilvejebringe enkeltcellesuspensioner fra hele væv til efterfølgende enkeltcelleanalyse. Funktionerne, selvom de er grundlæggende, er tilstrækkelige til at imødekomme forskernes behov i akademiske omgivelser og videre. En vigtig fordel ved at bruge denne enhed er dens potentiale til at forbedre forberedelsen af enkeltcellesuspensioner ved at reducere variabiliteten. Derudover kan evnen til at behandle 12+ prøver samtidigt forbedre konsistensen fra prøve til prøve, hvilket kan påvirkes af den øgede tid, der kræves til manuelle dissociationsprotokoller. I forskningsinstitutioner og industriindstillinger giver enheder som denne og andre kommercielt tilgængelige enheder mulighed for hurtigere og tilpasselig vævsbehandling; Imidlertid er kommercielle enheder over 10 gange prisen på den enhed, der er beskrevet her, hvilket begrænser deres tilgængelighed, især i forskningsmiljøer med lave ressourcer 8,9. I akademiske laboratorier kan denne enhed gøre det muligt for praktikanter (bachelor- og kandidatstuderende) at gennemføre mere sofistikeret forskning ved at reducere den tid, der er nødvendig for at behandle væv til in vivo-analyser.
Den her beskrevne mekaniske dissociationsprotokol blev tilpasset fra en protokol, der regelmæssigt anvendes til at isolere immunceller fra lungevæv7. Tidskrævende manuelle trin, såsom finhakning og talrige eller kraftige pipettering, blev erstattet med automatiseret mekanisk behandling, hvilket sparer både tid og kræfter, der kræves for at producere resultater, der ligner den manuelle protokol. Dette kan vise sig at være ergonomisk gavnligt for slutbrugeren, fordi gentagen pipettering, som foreskrevet i den manuelle protokol, kan bidrage til udviklingen af neuromuskulære tilstande, såsom karpaltunnelsyndrom10.
Denne halvautomatiske proces kan bruges til at generere cellesuspensioner til forskellige applikationer, herunder flowcytometri og cellekultur. Det er vigtigt at bemærke, at alle prøver skal opbevares kolde eller på is, når de ikke inkuberes ved 37 °C, da dette kan påvirke cellernes levedygtighed. De enzymer, rotationshastigheder og inkubationstider, der er foreskrevet i den mekaniske protokol, kan tilpasses efter behov for tilpasning til andre protokoller eller ønskede målceller. Imidlertid er enhedens minimale og maksimale rotationshastigheder begrænset af specifikationerne for de anvendte motorer. For hastigheder langsommere end 50 o / min eller hurtigere end 200 o / min skal motorer med henholdsvis lavere eller højere maksimal hastighed vælges.
Anbefaling til ikke-tekniske laboratorier
Denne enhed blev bygget i samarbejde med Terrapin Works, fabrikations- og prototypecentret, der ligger i ingeniørafdelingen ved University of Maryland. Hvis det er tilgængeligt, bør de mekaniske, elektriske og softwareingeniører på enhver akademisk institution finde dette design relativt let at samle. Alternativt kan et universitets maskinværksted (hvis tilgængeligt) eller lokale mekaniske, elektriske og / eller softwaretekniske laboratorier være i stand til at hjælpe med fremstillingen eller rådgive om yderligere tilgængelige ressourcer.
Fremtidige tekniske forbedringer
Softwarekode er ikke udviklet til at eliminere det manuelle spændingshjul og automatisk justere motorhastigheden gennem programmering alene. Dette er muligt, men ville kræve hardwaretilføjelser, herunder en variabel spændingsregulator og mere sofistikeret software til at inkorporere denne funktion i de forudindstillede og brugerdefinerede programtilstande.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikter at oplyse.
Acknowledgments
Finansiering blev modtaget fra Fischell Department of Bioengineering (KM), T32 GM080201 (MA), Vogel Endowed Summer Fellowship (MA), LAM Foundation (KM) og American Lung Association (KM). Forfatterne ønsker at takke Michele Kaluzienski for hjælp med redigering.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ¼ inch acrylic sheet 12" x 24" | Acrylic Mega Store | N/A | |
| ½ inch acrylic sheet 12" x 12" | SimbaLux | SL-AS13-12x12 | |
| 12 G stainless steel wire (for tension arms) | Everbilt | 1000847413 | |
| 16 G electrical wire (stranded) | Best Connections | N/A | |
| 2 x 3 mm magnet | SU-CRO0587 | N/A | |
| 2-channel relay board (to reverse polarity of current to motors) | AEDIKO | AE06233 | |
| 37 mm Diameter DC Motors (12 V, 200 rpm) x 12 | Greartisan | N/A | Rated Torque: 2.2 Kg.cm Reduction Ratio: 1:22 Rated Current: 0.1 A D Shaped Output Shaft Size: 6 x 14mm (0.24" x 0.55") (D x L) Gearbox Size: 37 x 25 mm (1.46" x 0.98") (D x L) Motor Size: 36.2 x 33.3 mm (1.43" x 1.31") (D x L) Mounting Hole Size: M3 (not included) |
| AC/C Power Adapter with variable voltage controller (5 Amps, 3-12 volts) | Mo-gu | J19091-2-MG-US | |
| AC-DC 5 V 1 A Precision buck converter step down transformer | Walfront | 1A | (power adapter for powering Arduino Nano) |
| Arduino Nano (Lafvin) | LAFVIN | 8541582500 | |
| Buttons | Awpeye | Push-button | |
| C57BL6/J mice | Jackson Laboratory | ||
| Collagenase 4 | Worthington | CLS4 LS004188 | |
| Collagenase D | Roche | 11088866001 | |
| DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) | Corning | 10-013-CV | |
| DNAse | Roche | 11284932001 | |
| Double sided foam tape | SANKA | N/A | |
| Double Sided prototyping circuit board | deyue | N/A | |
| EDTA | Sigma- Aldrich | E7889 | |
| Electrical solder and soldering iron | LDK | 1002P | |
| Electrical Tape | 3M | 03429NA | |
| FBS (Fetal Bovine Serum) | Gibco | 16140089 | |
| gentleMACS C Tubes | Miltenyi | 130-093-237 | |
| Graphpad Prism | GraphPad, La Jolla, CA | Graphing and statistical analysis software | |
| Hall effect sensor Dimensions : 0.79 x 0.79x 0.39 inches | SunFounder | 43237-2 | |
| Hex Coupler 6 mm Bore Motor Brass x 2 x 12 | Uxcell | N/A | |
| Hex head bolts (M4-.70 X 12 Hex Head Cap Screw) x 12 | FAS | N/A | |
| Jumper wires (for Arduino Nano) | ELEGOO | EL-CP-004 | |
| LCD screen | JANSANE | N/A | |
| M3 Hex Socket Head Cap Screws x 12 | Shenzhen Baishichuangyou Technology co.Ltd |
310luosditaozhuang | |
| M3 Stainless SteelMachine screws Flat Head Hex Socket Cap Screws (30 mm) x 36 | Still Awake | a52400001 | |
| Quick disconnect terminal connectors | IEUYO | 22010064 | |
| Red Blood Cell Lysis Buffer (10x) | Cell Signaling | 46232 | |
| Terminal adapter shield Expansion board for Arduino Nano 12" x 24" | Shenzhen Weiyapuhua Technology |
60-026-3 |
References
- Wiegleb, G., Reinhardt, S., Dahl, A., Posnien, N. Tissue dissociation for single-cell and single-nuclei RNA sequencing for low amounts of input material. Frontiers in Zoology. 19 (1), 27 (2022).
- Weiskirchen, S., Tag, C. G., Sauer-Lehnen, S., Tacke, F., Weiskirchen, R. Isolation and culture of primary murine hepatic stellate cells. Fibrosis: Methods and Protocols. Rittié, L. , New York, NY: Springer. 7113-7118 (2017).
- Wang, J., et al. The isolation and characterization of endothelial cells from juvenile nasopharyngeal angiofibroma. Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 48 (9), 856-858 (2016).
- Burja, B., et al. An optimized tissue dissociation protocol for single-cell rna sequencing analysis of fresh and cultured human skin biopsies. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 10, 102022 (2022).
- McBeth, C., Gutermuth, A., Ochs, J., Sharon, A., Sauer-Budge, A. F. Automated tissue dissociation for rapid extraction of viable cells. Procedia CIRP. 65, 88-92 (2017).
- Welch, E. C., Yu, H., Barabino, G., Tapinos, N., Tripathi, A. Electric-field facilitated rapid and efficient dissociation of tissues into viable single cells. Scientific Reports. 12 (1), 10728 (2022).
- Maisel, K., et al. Pro-lymphangiogenic VEGFR-3 signaling modulates memory T cell responses in allergic airway inflammation. Mucosal Immunology. 14 (1), 144-151 (2021).
- Karmakar, T., et al. A pilot study to determine the utility of automated tissue dissociator for flowcytometry based evaluation of hematolymphoid tumor tissue biopsies. Indian Journal of Hematology and Blood Transfusion. 38 (2), 403-410 (2022).
- Montanari, M., et al. Automated-mechanical procedure compared to gentle enzymatic tissue dissociation in cell function studies. Biomolecules. 12 (5), 701 (2022).
- Genova, A., Dix, O., Saefan, A., Thakur, M., Hassan, A. Carpal tunnel syndrome: a review of literature. Cureus. 12 (3), e7333 (2020).
