Summary
O modelo de camundongo de hepatectomia parcial 2/3 (66%) é bem descrito na literatura, mas hepatectomias mais extensas mimetizando a síndrome do pequeno para o tamanho após o transplante de fígado raramente foram usadas. Descrevemos um procedimento de hepatectomia estendida de 78% em um modelo de camundongo que resulta em aproximadamente 50% de letalidade pós-operatória em camundongos saudáveis.
Abstract
A hepatectomia parcial 2/3 em camundongos é usada em pesquisas para estudar a capacidade regenerativa do fígado e explorar os resultados da ressecção hepática em vários modelos de doenças. Na hepatectomia parcial clássica de 2/3 em camundongos, dois dos cinco lobos do fígado, ou seja, os lobos esquerdo e mediano, representando aproximadamente 66% da massa hepática, são ressecados em bloco com uma sobrevida pós-operatória esperada de 100%. Hepatectomias parciais mais agressivas são tecnicamente mais desafiadoras e, portanto, raramente foram usadas em camundongos. Nosso grupo desenvolveu um modelo de camundongo de uma técnica de hepatectomia estendida na qual três dos cinco lobos hepáticos, incluindo os lobos superiores esquerdo, mediano e direito, são ressecados separadamente para remover aproximadamente 78% da massa hepática total. Essa ressecção estendida, em camundongos saudáveis, deixa um fígado remanescente que nem sempre pode sustentar uma regeneração adequada e oportuna. A falha na regeneração resulta em 50% de letalidade pós-operatória em 1 semana devido à insuficiência hepática fulminante. Este procedimento de hepatectomia estendida de 78% em camundongos representa um modelo cirúrgico único para o estudo da síndrome do pequeno para o tamanho e a avaliação de estratégias terapêuticas para melhorar a regeneração hepática e os resultados no cenário de transplante de fígado ou ressecção hepática estendida para câncer.
Introduction
Modelos de ressecção hepática cirúrgica de camundongos e ratos, descritos pela primeira vez em 1931, são os modelos experimentais mais comuns utilizados para estudar a base molecular da regeneração hepática. Eles também podem ser úteis na pesquisa científica translacional para testar e desenvolver estratégias para melhorar os resultados após ressecção hepática estendida ou transplante de enxertos hepáticos abaixo do ideal 1,2,3,4. As hepatectomias parciais (HP) em camundongos envolvem a remoção de aproximadamente 2/3 (66%) da massa hepática total (TLM), que quando realizadas em animais saudáveis têm resultados excepcionais5. O procedimento é de curta duração, facilmente reprodutível devido à pouca variação na anatomia do fígado de camundongos, e a sobrevida pós-operatória geralmente se aproxima de 100%1.
A hepatectomia parcial 2/3 abrangendo a ressecção do lobo esquerdo (MMII) e do lobo mediano (ML) permite que os lobos residuais se regenerem relativamente desimpedidos por inflamação lobar ou restrição do fluxo de entrada e saída hepático. Em vez disso, o aumento do fluxo venoso portal e, subsequentemente, o estresse de cisalhamento nas células endoteliais sinusoidais do fígado após a HP resultam na regulação positiva sustentada da expressão da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) e subsequente liberação de óxido nítrico (NO), que contribuem para o priming dos hepatócitos para proliferação e regeneração hepática3. Os resultados comumente estudados após 2/3 de HP em modelos de doenças, como doença hepática gordurosa não alcoólica ou em antecedentes genéticos específicos, incluem risco de insuficiência hepática aguda, medidas qualitativas e quantitativas da capacidade regenerativa do fígado e outras respostas biológicas ao estresse ou lesão traumática 1,3.
No entanto, um modelo de camundongo que imita a síndrome funcional ou anatômica do tamanho pequeno, como ocorre após ressecção hepática estendida para câncer ou transplante de enxertos hepáticos marginais (esteatose ou tempo isquêmico prolongado) ou parciais (divididos ou de fígado de doador vivo), ainda não foi bem estabelecido. Para atender a essa necessidade, modelos de ressecções hepáticas mais extensas que se estendem além da manutenção de uma massa hepática mínima (e funcional) são necessários para modelar a síndrome do fígado pequeno para o tamanho e a mortalidade aumentada associada a essa síndrome 6,7.
A anatomia do fígado de camundongo exibe variação mínima. O fígado de camundongo é composto por cinco lobos, cada um representando a seguinte porcentagem da massa hepática total: lobo esquerdo (LL; 34,4 ± 1,9%), lobo mediano (ML; 26,2 ± 1,9%), lobo superior direito (também chamado de superior direito) (RUL; 16,6 ± 1,4%), lobo inferior direito (também chamado de inferior direito) (RLL; 14,7 ± 1,4%) e lobo caudado (CL, 8,1 ± 1,0%)1, 5. Cada lobo é suprido por uma tríade portal, incluindo um ramo da artéria hepática, um ramo da veia porta e um ducto biliar5. Historicamente, várias técnicas foram descritas para realizar um 2/3 PH ressecando o LL e o ML. Estes incluem 1) a técnica clássica que consiste em uma única ligadura em bloco na base de cada um dos lobos ressecados; 2) a técnica do clipe hemostático, utilizando clipes de titânio aplicados na base dos lobos ressecados; 3) técnica de preservação do parênquima orientado para o vaso, utilizando suturas perfurantes proximais à pinça; e 4) uma técnica microcirúrgica orientada a vasos, em que os ramos da veia porta e da artéria hepática são ligados antes da ressecção do lobo1. Embora cada técnica tenha pontos fortes e fracos relativos, nenhuma produz maior letalidade 1,8,9.
Neste estudo, apresentamos um novo método para PH estendido de 78% em camundongos. Nesse modelo, três dos cinco lobos do fígado, incluindo LL, ML e RUL, são removidos separadamente usando uma técnica de ligadura (Figura 1). Esse procedimento resulta na ressecção de aproximadamente 78% (77,2 ± 5,2%) da massa hepática total. Nossa escolha de remover o LL e o ML separadamente, e não "em bloco" como na técnica clássica de HP, minimiza as complicações associadas à ressecção em bloco desses dois lobos, como estenose da veia cava supra-hepática e aumento do risco de necrose dos lobos remanescentes quando a ligadura única é aplicada muito perto da veia cava1, 10,11,12,13,14. Isso é crucial antes de passar para a etapa final deste procedimento para remover o RUL. Esta hepatectomia extensa em camundongos C57BL/6 do tipo selvagem de 8 a 12 semanas de idade causa 50% de letalidade dentro de 1 semana após a cirurgia devido à falha na regeneração do fígado, causando insuficiência hepática fulminante15,16. Este modelo de camundongo de letalidade aumentada após hepatectomia estendida de 78% recapitula adequadamente a fisiopatologia da síndrome do pequeno para o tamanho e permite o desenvolvimento e teste de novas estratégias para melhorar os resultados.
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Protocol
Os métodos descritos neste protocolo de procedimento foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) no Beth Israel Deaconess Medical Center (BIDMC). Todos os experimentos foram concluídos de acordo e em conformidade com as diretrizes da IACUC e das instalações de pesquisa animal do BIDMC.
1. Preparação pré-operatória do camundongo
- Raspe o abdômen do camundongo do meio do esterno até a região suprapúbica com uma tesoura.
- Induza anestesia geral com isoflurano a 1-4% em oxigênio a 100%. Quando anestesiado, coloque o camundongo em decúbito dorsal no campo cirúrgico com uma almofada de aquecimento embaixo. Antes de fazer uma incisão, aperte firmemente o dedo do pé para garantir que o reflexo pedal esteja ausente (se presente, o animal responderá). Ajuste o nível anestésico conforme necessário para atingir um estado de anestesia geral.
NOTA: Titular o isoflurano conforme necessário para manter a anestesia geral adequada. - Administre 1,2 mg / kg de buprenorfina por via subcutânea para analgesia pós-operatória. Coloque o rato em decúbito dorsal com os membros anteriores e traseiros estendidos e prenda os membros com fita adesiva; Em seguida, prepare um campo estéril para a cirurgia.
NOTA: Certifique-se de que os membros anteriores estejam relaxados quando presos para que a respiração não seja prejudicada. - Prepare o abdômen com soro fisiológico estéril quente e cotonetes betadine, alternando entre cada cotonete 3 vezes. Cubra o abdômen de maneira estéril.
2. Hepatectomia
- Faça uma incisão vertical de laparotomia na linha média através da pele do apêndice xifóide até a região suprapúbica usando um bisturi. Em seguida, faça uma incisão através da linha alba com uma tesoura afiada para entrar na cavidade peritoneal e estenda essa incisão até o comprimento da incisão na pele.
NOTA: É mais seguro primeiro incisar a linha alba na região subxifóide, onde o fígado está profundamente na parede abdominal, para evitar lesões no intestino subjacente. - Retrair a parede abdominal lateralmente usando afastadores apropriados; Em seguida, clampeie o processo xifóide com um hemostático e retraia o esterno superiormente para expor o fígado.
- Retraia o fígado inferiormente para expor o ligamento falciforme e, em seguida, corte o ligamento ao longo do comprimento do fígado usando uma tesoura afiada. Retraia o fígado superiormente em direção ao tórax para expor o ligamento hepatogástrico e os ligamentos do lobo intra-hepático e faça o transecto dessas estruturas usando uma microtesoura afiada.
NOTA: A retração deve ser realizada muito suavemente com aplicadores úmidos com ponta de algodão, pois o fígado, encapsulado pela cápsula de Glisson, é muito frágil e fácil de machucar e dilacerar. - Retraia o lobo mediano superiormente, mantendo o lobo esquerdo em sua posição anatômica original. Enrole uma sutura de seda 5-0 ao redor da parte superior-medial do LL. Reflita o LL superiormente em direção ao tórax para expor a superfície inferior do lobo, junte as extremidades da sutura na base do lobo e amarre a sutura na base. Certifique-se de que a sutura não obstrua o fluxo sanguíneo na veia cava inferior (VCI) ou na veia porta antes de amarrar a sutura para ligar o MMII.
NOTA: É melhor amarrar esta sutura enquanto o MMII é refletido superiormente em direção ao tórax para que a tríade portal fique bem exposta durante a ligadura. Isso facilita a ressecção do lóbulo próximo à base sem comprometer as estruturas adjacentes. - Ressece o LL logo distal ao laço da sutura usando uma tesoura afiada e certifique-se de que um pequeno manguito de tecido (~ 2 mm) separe a sutura da borda do lobo ressecado. Confirme a hemostasia.
- Reflita o lobo mediano superiormente em direção ao tórax, coloque uma sutura de seda 5-0 ao redor da base do ML e retorne o ML à sua posição anatômica original. Aproxime as extremidades da sutura sobre a base do aspecto superior do ML e certifique-se de amarrá-las na base do lóbulo. Ressece o ML ligado, deixando um pequeno manguito de tecido remanescente ao redor da gravata de sutura. Confirme a hemostasia.
- Mobilize o fígado da direita para a esquerda para expor os lobos superior e inferior direito e reflita cuidadosamente esses lobos medial e inferiormente. Enrole uma sutura 5-0 sobre o aspecto superior-medial do MSD para garantir que a sutura circunde a base do MSD e, em seguida, reflita o MSD em direção ao tórax. Enrole a sutura sob o RUL e amarre as extremidades perto de sua base, depois resseca-a, deixando um pequeno manguito de tecido remanescente ao redor do laço da sutura.
NOTA: Amarrar muito proximal na base do MSD pode comprometer o suprimento de sangue para o MID, o que pode resultar em isquemia do MID e morte do camundongo dentro de 24 horas após a cirurgia. Em contraste, amarrar muito distalmente da base do MSD diminui a quantidade de massa hepática ressecada, aumentando assim as taxas de sobrevida pós-operatória além do esperado. - Retorne o fígado restante à sua posição anatômica de repouso e garanta a hemostasia. Se necessário, aplique pressão com gaze nas áreas de sangramento menor nas margens do fígado ressecadas.
- Feche a parede abdominal da linha média (fáscia e camadas musculares) usando uma sutura de poliglactina 5-0 de forma ininterrupta. Feche a incisão da pele com grampos ou suturas de monofilamento 5-0.
- Interrompa a anestesia e monitore o camundongo até que ele recupere a consciência e possa deambular normalmente.
3. Cuidados pós-operatórios
- Observe o camundongo no pós-operatório para garantir a recuperação adequada (ou seja, o camundongo está acordado, alerta e ambulatorial dentro da gaiola) e o controle da dor. Examine o mouse a cada 2 h até 6 h após o procedimento e depois diariamente.
NOTA: Espera-se que o mouse se mova mais lentamente dentro da gaiola no pós-operatório. O rato deve recuperar numa gaiola isolada de outros ratinhos e só voltar para a companhia de outros ratinhos quando estiver totalmente recuperado. - Administre injeções salinas normais aquecidas (0,1-1,0 mL, subcutâneas ou intraperitoneais) se o camundongo ficar hipovolêmico devido a fluido insensível ou perda excessiva de sangue devido à cirurgia.
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Representative Results
Espera-se que uma hepatectomia estendida de 78% bem-sucedida induza 50% de mortalidade em 1 semana em camundongos adultos saudáveis com idade entre 8e 12 semanas 16. Quando realizado corretamente, espera-se perda mínima de sangue. O sangramento residual que persiste pode ser controlado por pressão manual. A morte perioperatória dentro de 24 horas após a cirurgia é frequentemente causada por erros técnicos. As falhas técnicas incluem lesão inadvertida de grandes vasos sanguíneos, causando hemorragia intratável no intraoperatório; hemorragia pós-operatória significativa, muitas vezes devido a sangramento residual das margens hepáticas ressecadas; lesão da estrutura circundante, como ligadura inadvertida da tríade portal adjacente, da veia porta ou da VCI; isquemia do MID secundária à ligadura do MSD muito proximal à base do lobo; e complicações da anestesia geral. Os sinais de insuficiência hepática incluem letargia progressiva, aglomeração de cabelos, anorexia e hipoglicemia, que geralmente se tornam aparentes dentro de 24 horas após a cirurgia.
Os dois desfechos esperados após hepatectomia estendida de 78% são sobrevida ou morte. No primeiro cenário, o camundongo se recupera adequadamente após a cirurgia, retoma a atividade normal em 72 horas e sobrevive além de 7 dias. A laparotomia realizada com 9 a 10 dias de pós-operatório demonstra recuperação completa da massa hepática pré-operatória 4,16,17,18. O segundo desfecho seria a mortalidade dentro de 2 a 7 dias de pós-operatório. O camundongo pode mostrar sinais iniciais de recuperação nas primeiras 12 horas após a cirurgia, mas piora de forma relativamente rápida depois devido ao desenvolvimento de insuficiência hepática fulminante16. O camundongo exibe sinais de estresse, perda de peso e letargia progressiva até a morte. Exemplos de resultados inesperados incluem morte por complicações técnicas ou taxas de sobrevivência de camundongos bem acima ou abaixo de 50% após hepatectomia estendida de 78%.
Nosso laboratório foi pioneiro nessa hepatectomia estendida de 78% e validou sua utilidade em um manuscrito anterior mostrando que a hepatectomia estendida de 78% em camundongos BALB/c saudáveis de 8 semanas de idade resulta em 50% de letalidade, que poderia ser revogada se o fígado do camundongo fosse pré-projetado para expressar A20 (Proteína Induzível do Fator de Necrose Tumoral 3 [TNFAIP3]), administrado por via intravenosa usando um adenovírus recombinante16. Neste estudo de Longo et al., um camundongo BALB/c saudável foi submetido a uma hepatectomia de 78% por cento 5 dias após a administração de um vetor de adenovírus recombinante expressando A20 humano (rAd.A20) ou o controle β-Galactosidase (rAd.βGal). Um grupo de controle adicional não tratado também foi incluído. Após 78% de hepatectomia, Longo et al. observaram que 6 dos 12 (50%) camundongos não tratados sobreviveram ao procedimento (Figura 2)16.
Dois determinantes da proficiência incluem 1) limitar as complicações técnicas, conforme listado acima, sendo a principal delas a isquemia do RLL, causando morte prematura, e 2) garantir mobilização suficiente do RUL, sem o qual se deixa de apreciar o tamanho total do RUL e, portanto, falha em ressecá-lo adequadamente. Isso reduz a quantidade de massa hepática ressecada e, portanto, melhora a taxa de sobrevida global bem acima dos 50% esperados. No período inicial de treinamento do investigador/autor, 10 de 15 (67%) camundongos CD1 e C57BL/6 adultos saudáveis machos e fêmeas com idades entre 11 e 21 semanas sobreviveram 1 semana após 78% de hepatectomia (3 mortes técnicas excluídas) (Tabela 1)19,20,21. O treinamento adicional no contexto de uma compreensão apreciativa da anatomia do fígado de camundongo para melhorar a mobilização do RUL e facilitar uma ressecção adequada, medida pela porcentagem estimada de hepatectomia, foi essencial para atingir a taxa de sobrevida esperada de 50% após a hepatectomia de 78%. Depois que a proficiência técnica foi considerada totalmente alcançada, 8 dos 16 camundongos (50%; 1 morte técnica excluída) sobreviveram 1 semana após 78% de hepatectomia.
Figura 1: Posicionamento da hepatectomia do camundongo e anatomia do fígado. (Esquerda) Representação visual do posicionamento do camundongo para laparotomia e hepatectomia estendida de 78%. O camundongo é representado em decúbito dorsal com uma incisão de laparotomia na linha média. (Direita) Anatomia do fígado de camundongo representada de baixo com linhas coloridas delineando os locais de ressecção. O lobo esquerdo, o lobo mediano e os lobos superiores direitos são ressecados de forma sequencial após a ligadura da sutura em sua base. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: Vantagem de sobrevida após hepatectomia estendida (78%) de camundongos modificados para superexpressar A20. Dados de sobrevida após hepatectomia estendida de 78% em camundongos controlados não tratados (NI não infectados), rAd.βGal e rAd.A20. A superexpressão de A20 em fígados de camundongos produziu uma vantagem significativa de sobrevivência em comparação com controles NI (50%) e rAd.βGal (13%) (n = 12 camundongos / grupo). Esta figura é de Longo et al.16. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
| Sobreviveu | Falecido | Falha técnica | Total | % estimada de hepatectomia | Taxa de sobrevivência | |
| Pré-proficiência | 10 | 5 | 3 | 18 | 68 ± 3,9% | 10/15 (66%) |
| Pós-Proficiência | 8 | 8 | 1 | 17 | 79 ± 2,4% | 8/16 (50%) |
Tabela 1: Resultados estendidos de treinamento de hepatectomia de 78%. Resultados de sobrevida dentro de 1 semana após hepatectomia estendida de 78% em camundongos CD1 e C57BL/6 adultos saudáveis com idades entre 11 e 21 semanas. A proficiência técnica foi autodeterminada por meio de melhorias observáveis no sucesso técnico e ressecção adequada do lobo superior direito, conforme calculado pela porcentagem estimada de hepatectomia (média ± SEM).
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Discussion
Para realizar com sucesso uma hepatectomia estendida de 78% causando 50% de letalidade em camundongos, é fundamental que cada lobo hepático seja ressecado com precisão. Esse nível de competência e precisão só pode ser alcançado se o procedimento for realizado repetidamente. A curva de treinamento varia entre os operadores, mas normalmente requer de 3 a 6 meses de prática. Uma ressecção hepática que remove menos de 78% do TLM resultaria em taxas de sobrevivência mais altas, enquanto uma ressecção hepática que remove mais de 78% do TLM resultaria em maior letalidade. Cada ressecção de lobo é desafiadora, embora não na mesma medida.
O lobo esquerdo é o mais fácil de ressecar de forma confiável. A base LL é estreita e, quando refletida superiormente, o operador pode identificar facilmente a base do fígado e amarrar a sutura na mesma posição com volume de ressecção de lobo quase idêntico a cada vez. O lobo mediano tem a base mais larga quando comparado ao LL e RUL. Portanto, requer que o operador estime cuidadosamente onde a sutura precisa ser colocada e aproxime cuidadosamente as extremidades da sutura na base do ML antes de ressecar o lóbulo. Quando o ML é amarrado muito proximalmente, a sutura pode comprometer a drenagem venosa do fígado ou impedir o retorno do sangue da VCI para o coração. Quando o ML é amarrado muito distalmente, a massa hepática insuficiente é ressecada e o risco de hemorragia na margem de ressecção aumenta, pois a base do ML é mais larga. O lobo superior direito é talvez o mais difícil de ressecar de forma confiável. A posição anatômica do MSD posteriormente na cavidade peritoneal dificulta o envolvimento completo da sutura em torno de sua base, o que pode resultar em uma ressecção incompleta desse lobo. Por outro lado, se a sutura for amarrada muito proximalmente na base do MSD, o suprimento sanguíneo para o lobo inferior direito pode ser comprometido, causando isquemia desse MID e aumentando a probabilidade de mortalidade pós-operatória.
Outros elementos críticos para minimizar os riscos relacionados ao procedimento incluem a minimização da anestesia geral (por exemplo, isoflurano) para reduzir a toxicidade e garantir a hemostasia adequada após cada ressecção do lobo para limitar a hemorragia pós-operatória. É importante considerar que a hepatectomia estendida de 78% é preferencialmente realizada em camundongos adultos de 8 a 12 semanas de idade, pois camundongos mais velhos podem apresentar maior variabilidade nas taxas de sobrevida devido à sua maior massa corporal e capacidade regenerativa hepática reduzida, enquanto camundongos mais jovens podem sofrer maiores complicações técnicas devido ao menor tamanho do fígado e uma maior taxa de complicações relacionadas à anestesia. Supomos que a letalidade de 50% observada após hepatectomia de 78% corresponde a características intrínsecas de um único camundongo que se relacionam a variações anatômicas sutis na porcentagem relativa de cada massa do lobo hepático em relação à massa total do fígado entre animais individuais. A hepatectomia de 78% em camundongos representa um limiar anatômico no qual apenas 50% dos animais podem se regenerar e sobreviver em tempo hábil e com sucesso, enquanto os outros 50% não conseguem fazê-lo e morrem. Também reconhecemos que diferenças sutis na manipulação do fígado podem estar associadas a diferentes graus de dano hepático e, portanto, distorcem esse equilíbrio tênue em direção à falha na regeneração e morte22.
No entanto, o fator mais limitante continua sendo o domínio do procedimento cirúrgico em si, que só pode vir com a prática. A prática é essencial para garantir um resultado reprodutível por meio do mapeamento preciso das suturas na base de cada lobo hepático. Uma nota de advertência é que variações individuais na anatomia do fígado entre camundongos - que são raras - podem exigir alguma modificação na técnica. Outras intervenções que devem ser consideradas caso a caso para melhorar o sucesso incluem a administração de soro fisiológico em bolus em caso de altas perdas de líquidos insensíveis ou hemorragia significativa, e pressão manual prolongada ou eletrocautério na margem do fígado em casos de hemorragia persistente.
Em resumo, a hepatectomia estendida de 78% em um modelo de camundongo é uma técnica valiosa para a pesquisa científica translacional. O treinamento extensivo é fundamental para alcançar um resultado tecnicamente bem-sucedido associado a este procedimento. Os camundongos não são apenas uma espécie de animal pequeno preferida que é fácil de manusear e relativamente barata, mas também está disponível em várias linhagens endogâmicas bem estudadas, além de um número cada vez maior de linhagens geneticamente modificadas (transgênicas, nocaute (KO), tipo de célula específico e KO condicional), permitindo estudos mecanicistas finos 3,9,23. Além de camundongos geneticamente modificados, várias patologias, incluindo doença hepática gordurosa não alcoólica, cirrose e diabetes, que são conhecidas por influenciar a sobrevida e os resultados após a ressecção hepática, podem ser facilmente induzidas em camundongos 24,25,26,27,28,29,30,31.
Como mencionado anteriormente, a HP 2/3 clássica permanece extremamente valiosa, mas não recapitula a alta letalidade associada à ressecção hepática estendida para câncer ou síndrome de tamanho pequeno após transplante de fígado quando a massa hepática é anatômica ou funcionalmente inadequada (como em fígados gordurosos)7,32,33,34 . Quando realizada adequadamente, essa hepatectomia estendida de 78% resulta em 50% de morte pós-operatória, o que reflete melhor a realidade clínica, como após ressecções hepáticas extensas por trauma ou câncer e no contexto de síndrome de pequeno para tamanho após transplante de enxertos hepáticos marginais, e também após mera cirurgia hepática em pacientes com esteato-hepatite não alcoólica grave (EHNA) ou cirrose16, 32. Este modelo de camundongo representa uma etapa de prova de conceito altamente valiosa e necessária para testar novas estratégias terapêuticas para melhorar os resultados em todas essas condições. Quaisquer resultados positivos em camundongos devem diminuir substancialmente o número de animais necessários para realizar estudos pré-traducionais em animais de grande porte antes da tradução clínica de terapias inovadoras.
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Disclosures
Não há conflitos de interesse a serem divulgados.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado por bolsas NIH R01 DK063275 e HL086741 para CF. PB e TA são beneficiários de uma bolsa NRSA da bolsa de treinamento NHLBI T32 HL007734.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2 x 2 Gauze | Covidien | 2146 | Surgery: dissection |
| 5-O Nylon Monofilament Suture | Oasis | 50-118-0631 | Surgery: Skin closure |
| 5-O Silk Suture | Fine Science Tools | 18020-50 | Surgery: liver lobe ligation |
| 5-O Vicryl Suture | Ethicon | NC9335902 | Surgery: Abdominal wall closure |
| Addson Forceps | Braintree Scientific | FC028 | Surgery: dissection |
| Alcohol Swabs (2) | BD | 326895 | Disinfectant |
| Buprenorphine Extended Release Formulation | Zoopharm | N/A | Analgesia |
| Cordless Trimmer | Braintree Scientific | CLP-9868-14 | Shaving |
| Curved Forceps | Braintree Scientific | FC0038 | Surgery: dissection |
| Hemostat | Braintree Scientific | FC79-1 | Surgery: dissection |
| Isoflurane Inhalant Anesthetic | Patterson Veterinary | RXISO-250 | General Anesthesia |
| Magnet Fixator (2-slot) (2) | Braintree Scientific | ACD-001 | Surgery: to hold small retractors |
| Magnet Fixator (4-slot) | Braintree Scientific | ACD-002 | Surgery: to hold small retractors |
| Microscissors | Braintree Scientific | SC-MI 151 | Surgery: dissection |
| Operating tray | Braintree Scientific | ACD-0014 | Surgery: for establishment of surgical field |
| Povidone Iodine 10% Swabstick (2) | Medline | MDS093901ZZ | Disinfectant |
| Scalpel (15-blade) | Aspen Surgical Products | 371615 | Surgery: dissection |
| Sharp Scissors (Curved) | Braintree Scientific | SC-T-406 | Surgery: dissection |
| Sharp Scissors (Straight) | Braintree Scientific | SC-T-405 | Surgery: dissection |
| Small Cotton-Tipped Applicators | Fisher Scientific | 23-400-118 | Surgery: dissection |
| Tissue Forceps (Straight x2) | Braintree Scientific | FC1001 | Surgery: dissection |
| Warming Pad (18" x 26") | Stryker | TP 700 | Warming |
| Warming Pad Pump | Stryker | TP 700 | Warming |
| Wire Handle Retractor (2) | Braintree Scientific | ACD-005 | Surgery: to facilitate exposure of peritoneal cavity |
| Xenotec Isoflurane Small Animal Anesthesia System | Braintree Scientific | EZ-108SA | General Anesthesia: Contains Isoflurane vaborizer & console, Induction chamber, Regulator/Hose, Facemask (M) |
References
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