Soutenu bicouches planaires pour la formation des synapses immunologiques Etude de et Kinapse

Summary

Soutenu bicouches planaires sont des outils puissants qui peuvent être utilisés pour modéliser les interactions moléculaires dans une synapse immunologique. Ici, nous montrons des méthodes pour l'ancrage des protéines d'adhésion cellulaire connue pour moduler la formation des synapses au feuillet supérieur de la bilyer lipides et de visualiser la formation des synapses en microscopie TIRF.

Abstract

Soutenu bicouches planaires sont des outils puissants qui peuvent être utilisés pour modéliser les interactions moléculaires dans une synapse immunologique. Pour imiter les interactions entre les lymphocytes et les cellules présentatrices d'antigène, nous utilisons Ni2 +-chélateur lipides pour ancrer l'adhésion cellulaire recombinante et de protéines du CMH à la notice supérieure d'un bicouche avec le poly-histidine balises. Bicouches planaires sont générés par la préparation de lipides, de traiter les surfaces de verre où la bicouche vont se former, puis en formant la bicouche dans une chambre spécialisée contenant un flux de cellules où les lymphocytes sera ajouté. Ensuite, les bicouches sont facturés avec Ni et son étiquetées protéines recombinantes sont ajoutés. Enfin, les lymphocytes sont injectés dans la cellule de flux et microscopie TIRF peut être utilisé pour la formation des synapses image et les mécanismes de contrôle que la locomotion des cellules T, les sites de tri des récepteurs, et des sites de dégradation du récepteur.

Protocol

1. Préparer les lipides Afin de lier les protéines à la notice supérieure d'un bicouche, nous utilisons Ni 2 + lipides chélateurs, qui ancrent les protéines recombinantes avec des poly-histidine balises. Certains types de cellules peuvent adhérer de manière non spécifique à Ni 2 + revêtement bicouches, mais les cellules T ne sont généralement pas, ce qui rend cette méthode optimale pour l'étude de l'activation des cellules T. La solution bicouche lipid…