Summary

İmmünolojik Sinapslar ve Kinapse Eğitim Oluşumu için desteklenen Düzlemsel Bilayers

Published: September 15, 2008
doi:

Summary

Desteklenen düzlemsel bilayers immünolojik sinaps moleküler etkileşimleri modellemek için kullanılabilir güçlü araçlardır. Burada, lipid bilyer üst broşür sinaps oluşumunu modüle ve sinaps oluşumu TIRF mikroskobu kullanarak görselleştirmek için bilinen hücre adezyon proteinleri demirleme için yöntemler göstermektedir.

Abstract

Desteklenen düzlemsel bilayers immünolojik sinaps moleküler etkileşimleri modellemek için kullanılabilir güçlü araçlardır. Lenfosit ve antijen sunan hücreler arasındaki etkileşimleri taklit etmek için, poli-histidin etiketleri ile bilayeri üst broşüre rekombinant hücre yapışması ve MHC proteinleri çapa Ni2 + şelat lipidler kullanın. Düzlemsel bilayers, lipid hazırlama, cam yüzeyler bilayeri oluşturacak tedavi ve sonra lenfositler eklenecek bir akış-hücre içeren özel bir odasında bilayeri oluşturan tarafından üretilir. Sonra, bilayers Ni ve onun etiketli rekombinant proteinler ile tahsil edilir eklenir. Son olarak, lenfosit akış hücresi ve TIRF mikroskopi enjekte görüntü sinaps oluşumu ve mekanizmaları kullanılabilir kontrol T hücre hareket, reseptör sıralama siteleri, ve reseptör bozulması siteler.

Protocol

1. Lipidler hazırlanması Bir bilayeri üst broşüre proteinleri bağlamak için, Ni 2 + şelat lipidler, poli-histidin etiketleri ile rekombinant proteinler çapa. Bazı hücre tipleri, Ni 2 + kaplı bilayers non-spesifik olarak uyması, ancak T-hücrelerinin, T hücre aktivasyonu eğitimi için bu yöntemi en uygun hale yok . Çift katlı lipid çözümü% 20 Ni 2 bir çözüm hazırlayarak yapılır + şelat lipid ve kloroform-metanol 1-2 ml cam tüp u…
check_url/947?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Vardhana, S., Dustin, M. Supported Planar Bilayers for the Formation of Study of Immunological Synapses and Kinapse. J. Vis. Exp. (19), e947, doi:10.3791/947 (2008).

View Video