Поддерживаемые Planar Бислои для формирования Исследование иммунологических синапсов и Kinapse
Summary
Поддерживаемые плоского бислоя являются мощными инструментами, которые могут быть использованы для моделирования молекулярных взаимодействий в иммунологических синапсов. Здесь мы покажем, методы крепления адгезии клеток белков, известных для модуляции формирование синапса на верхний листок липидного bilyer и визуализировать формирование синапса использованием TIRF микроскопии.
Abstract
Поддерживаемые плоского бислоя являются мощными инструментами, которые могут быть использованы для моделирования молекулярных взаимодействий в иммунологических синапсов. Чтобы имитировать взаимодействия между лимфоцитами и антиген представляющих клеток, мы используем Ni2 +-хелатирующие липидов на якорь рекомбинантный адгезии клеток и белков ГКГ на верхний листок бислоя с поли-гистидин теги. Planar бислоев генерируются путем подготовки липидов, лечение стеклянных поверхностей, где будет бислоя форму, а затем формирование бислоя в специализированные камеры с потоком камеру, где лимфоциты будет добавлен. Затем, бислоев взимается с Ni и его с метками рекомбинантные белки не добавляются. Наконец, лимфоциты вводятся в клетку потока и TIRF микроскопия может быть использована для формирования изображения синапса и механизмов, которые контролируют передвижение Т-клеток, участков рецепторов сортировки и участки рецепторов деградации.
