Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Type 1 diabetes mellitus er en menneskelig sygdom, hvor immunsystemet ødelægger insulin gør beta-celler i bugspytkirtlen. Streptozocin kan fremkalde type 1 diabetes mellitus i zebrafisk.
Administrere streptozocin ved intraperitoneal injektion under bækken bælte på ventral side af zebrafisk. Streptozocin er strukturelt ligner N-acetylglucosamin, en ligand, der binder GLUT2 receptor på bugspytkirtel beta celler, der fører til sekretion af insulin.
Ved ankomsten til betacellerne udløser streptozocin et immunrespons, der fører til frigivelse af autoantigener. Autoantigener får immunsystemet til at genkende betaceller som fremmede og ødelægge dem, hvilket fører til reducerede insulinniveauer.
I følgende eksempel vil vi generere en zebrafisk model af type 1 diabetes mellitus. At generere zebrafisk med diabetes mellitus, forberede en nyttiggørelse tank med normalt fiskevand og en bedøvelsesbeholder af fiskevand med en 1 til 1.000 fortynding af 2-phenoxyethanol. Under en røg hætte, forberede en 0,3% opløsning af streptozocin eller STZ ved at tilføje 6 milligram STZ til 2 milliliter af 0,09% natriumchlorid og straks placere opløsningen på is.
I et separat rør, aliquot nok saltvand til kontrol fisk. Fyld en halv CC sprøjte udstyret med en 27 og 1 / 2 gauge nål med STZ, eller kontrol løsninger, der sikrer, at ingen luftbobler er fanget. anæstesi bedøve en enkelt fisk ved at placere den i bedøvelsesvand og venter, indtil svømning bevægelse ophører, omkring en til to minutter.
Når bedøvet, kort placere fisken på et køkkenrulle til at absorbere overskydende vand. Derefter placere fisken i en vægt båd og veje det. Næste, placere fisken på en fast overflade. Derefter indsætte nålen forbi facet i den bageste aspekt af ventral bughinden og injicere enten 0,35 milligram per gram STZ eller en tilsvarende mængde kontrol løsning i peritoneal hulrum af fisken.
Efter injektion skal du placere fisken i bjærgningsvandtanken og overvåge den for normal svømmeaktivitet. Efter injektion af nok fisk til eksperimentet skal du overføre dem til normale levende tanke og opretholde ved en temperatur på 22 til 24 grader Celsius. Den reducerede temperatur er kritisk for effektiv induktion af hyperglykæmi. For at fremkalde en langvarig tilstand af meget høj hyperglykæmi skal du følge en tidsplan for hyppige injektioner i induktionsfasen efterfulgt af ugentlige vedligeholdelsesindsprøjtninger som vist her.
