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Isolamento de Ribossomos Traduzindo Contendo peptidil-tRNAs para análises funcionais e estruturais
JoVE Journal
Biology
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JoVE Journal Biology
Isolation of Translating Ribosomes Containing Peptidyl-tRNAs for Functional and Structural Analyses
DOI:

11:19 min

February 25, 2011

, , ,

Chapters

  • 00:05Title
  • 02:59Preparation of Cell Free Extracts Depleted of RF2
  • 04:28Preparation of a DNA Template
  • 05:18Preparation of Biotin Labeled mRNA
  • 06:19Isolation of Translating Ribosomes Containing a Peptidyl-tRNA
  • 07:56Analysis of the Isolated Ribosomes Containing the Peptidyl-tRNA
  • 09:23Representative Results
  • 10:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

Um grande impedimento para análises bioquímicas dos ribossomos contendo nascente peptidil-tRNAs foi a presença de ribossomos outros nas mesmas amostras, os ribossomos não estão envolvidos na tradução da seqüência de mRNA específico que está sendo analisado. Nós desenvolvemos uma metodologia simples para purificar, exclusivamente, os ribossomos que contém a nascente peptidil-tRNA de interesse.

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