A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 01:37Preparation of Cell Cytosol Containing Functional Glucocorticoid Receptor
- 03:04Immunoabsorption of GR from the Cytosol and Dissociation of hsp90
- 05:16Reconstitution of GR-hsp90 Heterocomplex using Molecular Chaperones, Cofactors, and ATP
- 06:17Analysis of Reconstituted Protein Complexes and Ligand Binding Activity
- 08:26Representative GR-hsp90 Heterocomplex Formation and Steroid Binding Activity
- 10:04Conclusion
<em> במבחנה</em> שיטה להכנת קולטן glucocorticoid תפקודית (GR) • Hsp90 קומפלקסים חלבונים מטוהרים מן חלבונים lysates הסלולר מתואר. השיטה משתמשת immunoadsorption של GR רקומביננטי ואחריו מלח הפשטת והרכבתה מחדש חלבון מורכב. חשיבותה של cofactors ותנאי חיץ נדונים, כמו גם יישומים שיטת פוטנציאליים.
Tags
Biochemical ReconstitutionSteroid ReceptorHsp90 Protein ComplexesLigand BindingMolecular ChaperoneEukaryotic Signaling ProteinsTranscription FactorsProtein KinasesCell CyclingTumorigenesisApoptosisSignaling PathwaysGlucocorticoid Receptor (GR)Immunoprecipitation AssayIn Vitro Reconstitution MethodHsp90 Functional ActivitySteroid Receptor Ligand BindingMolecular Chaperone Cofactor Requirements
