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Immunology and Infection

एथिमिक चूहों में मानव प्लीर मेसोथेलियोमा के ऑर्थोटोपिक मॉडल के पीईटी/सीटी द्वारा प्रत्यारोपण और निगरानी

Published: December 21, 2019 doi: 10.3791/60272
Automatic Translation
1, 1, 1, 2, 2
1MicroPET/SPECT/CT Imaging Laboratory, Centre for BioMedical Imaging (CIBM), Division of Nuclear Medicine and Molecular Imaging, University Hospitals and University of Geneva, 2Division of Thoracic and Endocrine Surgery, University Hospitals and University of Geneva

Summary

यह लेख इम्यूनोसमझौता एथिमिक चूहों के पूर्ण गुहा में H2052/484 मेसोथेलियोमा कोशिकाओं के प्रत्यारोपण द्वारा मानव प्लूरल मेसोथेलियोमा के एक ऑर्थोटोपिक माउस मॉडल की पीढ़ी का वर्णन करता है। इनट्रैपेरल ट्यूमर के विकास की देशांतर निगरानी का आकलन गैर-इनवेसिव मल्टीमॉडल[18एफ]-2-फ्लोरो-2-डिऑक्सी-डी-ग्लूकोज पॉजिट्रॉन उत्सर्जन टोमोग्राफी और गणना टोमोग्राफी इमेजिंग द्वारा किया गया था।

Abstract

घातक प्लूरल मेसोथेलियोमा (एमपीएम) मेसोथेलियम में उत्पन्न होने वाला एक दुर्लभ और आक्रामक ट्यूमर है जो फेफड़ों, दिल और छाती गुहा को कवर करता है। एमपीएम विकास मुख्य रूप से एस्बेस्टस से जुड़ा हुआ है। उपचार केवल मामूली अस्तित्व प्रदान करते हैं क्योंकि औसत अस्तित्व औसत निदान के समय से 9-18 महीने है। इसलिए, अधिक प्रभावी उपचार ों की पहचान की जानी चाहिए। नए चिकित्सीय लक्ष्यों का वर्णन करने वाले अधिकांश डेटा इन विट्रो प्रयोगों से प्राप्त किए गए थे और वीवो प्रीक्लिनिकल मॉडल में विश्वसनीय में मान्य किए जाने की आवश्यकता है। यह लेख एक ऐसे विश्वसनीय एमपीएम ऑर्थोटोपिक मॉडल का वर्णन करता है जो मानव एमपीएम सेल लाइन H2052/484 के इंजेक्शन के बाद इम्यूनोडेफियंट एथिमिक चूहों के प्लीरल गुहा में प्राप्त किया गया है । ऑर्थोटोपिक साइट में प्रत्यारोपण वीवो वातावरण में प्राकृतिक में ट्यूमर की प्रगति का अध्ययन करने की अनुमति देता है। पॉजिट्रॉन उत्सर्जन टोमोग्राफी/गणना टोमोग्राफी (पीईटी/सीटी) आणविक इमेजिंग नैदानिक[18एफ]-2-फ्लोरो-2-डिऑक्सी-डी-ग्लूकोज([18एफ] एफडीजी) रेडियोट्रेसर का उपयोग करके एमपीएम के साथ रोगियों की जांच के लिए पसंद का निदान विधि है । तदनुसार, H2052/484 ऑर्थोटोपिक मॉडल की रोग प्रगति की देशीयत निगरानी करने के लिए[18एफ] एफडीजी-पीईटी/सीटी का उपयोग किया गया था । इस तकनीक में एक उच्च 3आर क्षमता है(आरशिक्षादार जानवरों की संख्या, दर्द और असुविधा को कम करने के लिए आरईफिन, और विकल्प के साथ आरएप्लेस पशु प्रयोग) क्योंकि ट्यूमर विकास पर गैर-आक्रामक रूप से नजर रखी जा सकती है और आवश्यक जानवरों की संख्या को काफी कम किया जा सकता है।

यह मॉडल एक उच्च विकास दर, एक तेजी से ट्यूमर विकास प्रदर्शित करता है, लागत कुशल है और तेजी से नैदानिक अनुवाद के लिए अनुमति देता है। इस ऑर्थोटोपिक ज़ेनोबेड़ा एमपीएम मॉडल का उपयोग करके, शोधकर्ता चिकित्सीय हस्तक्षेपों के बाद एक विश्वसनीय एमपीएम मॉडल की जैविक प्रतिक्रियाओं का आकलन कर सकते हैं।

Introduction

घातक प्लीड्यूरल मेसोथेलियोमा (एमपीएम) एक कैंसर है जो अक्सर एस्बेस्टस फाइबर1,2,3के संपर्क से जुड़ा होता है। हालांकि ज्यादातर पश्चिमी देशों मेंएस्बेस्टसपर प्रतिबंध लगा दिया गया है,लेकिन एमपीएम की घटनाएं अभी भी7,8की बढ़ रही हैं . हाल ही में, कार्बन नैनोट्यूब के लिए चूहों के जोखिम से पता चलता है कि वे मनुष्यों में महत्वपूर्ण स्वास्थ्य जोखिममेंपरिणाम हो सकता है9,10। डेटा का सुझाव है कि इन उत्पादों के संपर्क में पुरानी सूजन और आणविक परिवर्तन (जैसे, ट्यूमर-दमन मार्गों की हानि) है कि घातक मेसोथेलियोमा के लिए प्रगति आबाद प्रेरित कर सकते हैं । वर्तमान में, मल्टीवॉल कार्बन नैनोट्यूब नैनो के सबसे महत्वपूर्ण उत्पादों में से एक हैं और कंपोजिट, ऊर्जा भंडारण सामग्री, दवा, इलेक्ट्रॉनिक्स और पर्यावरण उपचारण सामग्री जैसे विभिन्न उत्पादों में तेजी से शामिल हैं।

एमपीएम खराब पूर्वानुमान के साथ एक कैंसर है, और अधिकांश रोगियों को वर्तमान उपचार के तौर तरीकों की एक सीमित प्रभावकारिता के कारण निदान के बाद दो साल के भीतर मर जाते हैं11। एमपीएम के लिए इलाज का चुनाव कैंसर की अवस्था पर निर्भर करता है। सबसे प्रारंभिक चरण एमपीएम (चरण 1 और संभवतः कुछ चरण 2 या 3 ट्यूमर) के लिए, नैदानिक दृष्टिकोण रेडियोथेरेपी और कीमोथेरेपी12से जुड़े ट्यूमर के सर्जिकल रिसेक्शन सहित एक मल्टीमॉडल थेरेपी है। सिस्प्लैटिन और पेमीटर्स्ड के साथ एक संयुक्त कीमोथेरेपी उन्नत स्थानीय रूप से आक्रामक बीमारी के साथ निदान किए गए अधिकांश रोगियों के उपचार के लिए इंगित की जाती है, जो सर्जिकल रिसेक्शन के लिए उत्तरदायी नहीं है, या जो अन्यथा उपचारात्मक सर्जरी13,14के लिए उम्मीदवार नहीं हैं। इसलिए एमपीएम के मरीजों के लिए और प्रभावी उपचार विकसित करने की तत्काल आवश्यकता है । हालांकि, वीवो एनिमल मॉडल्स में कुछ मान्य हैं जो एमपीएम की नैदानिक प्रासंगिकता को दर्शाते हैं। कई murine MPM मॉडल विकसित किए गए हैं, लेकिन उनमें से अधिकांश एमपीएम ट्यूमर माइक्रोएनवायरमेंट15,16,17,18के जटिल पहलुओं को ईमानदारी से पुनर्नियोजित नहीं करते हैं । चूहों में एस्बेस्टस-प्रेरित एमपीएम का उपयोग, आनुवंशिक रूप से इंजीनियर एमपीएम माउस मॉडल, या मूत्र एमपीएम सेल लाइनों के सिनजेनिक प्रत्यारोपण के मॉडल मौलिक फेनोटाइपिक और कार्यात्मक मतभेदों से सीमित हैं और नतीजतन, क्लिनिक में नई खोजों का खराब अनुवाद करते हैं। अन्य प्रीक्लीनिकल murine MPM मॉडल ज्यादातर इम्यूनोडिफिजेंट चूहों में मानव कोशिका लाइनों के चमड़े के नीचे या पेरिटोनियल विद्वेष पर भरोसा करते हैं। हालांकि इन मॉडलों की निगरानी और मौलिक डेटा प्रदान करने के लिए आसान कर रहे हैं, इन विद्वेष के सूक्ष्म वातावरण है कि मानव ट्यूमर के बराबर नहीं है इन पूर्व नैदानिक अध्ययन17,19के अधिकांश की अनुवाद शक्ति ख़राब । इसके विपरीत, ऑर्थोटोपिक विद्वेष रोगी ट्यूमर व्यवहार और उपचार के प्रति प्रतिक्रिया को बेहतर ढंग से प्रतिबिंबित करता है क्योंकि वे मूल ट्यूमर साइट16में पाए जाने वाले समान सूक्ष्म वातावरण से घिरे हुए हैं।

एमपीएम20,21के रोगियों में रोग की प्रगति की देशीयत निगरानी करने के लिए[18एफ] एफडीजी-पीईटी/सीटी द्वारा आणविक इमेजिंग पसंद की विधि है । इसलिए, इस गैर-इनवेसिव इमेजिंग विधि का सहारा लेना16,22नैदानिक परीक्षणों में प्रीक्लिनिकल अध्ययनों के अनुवाद को बहुत बढ़ावा देता है। इसके अलावा, यह जानवरों की आवश्यक संख्या को कम करने में मदद करता है क्योंकि प्रत्येक जानवर समय के साथ अपने स्वयं के नियंत्रण का प्रतिनिधित्व करता है।

इस लेख में, हम मानव एमपीएम सेल लाइन H2052/484 के इंजेक्शन के बाद प्राप्त एक विश्वसनीय ऑर्थोटोपिक ज़ेनोबेड़ा एमपीएम मॉडल को एथिमिक चूहों के प्लीरल गुहा में प्रस्तुत करते हैं। [18एफ] एफडीजी-पीईटी/सीटी इमेजिंग के साथ मिलकर, यह मॉडल मानव एमपीएम के लिए नई नैदानिक रणनीतियों और उपचारों के कार्यात्मक और मशीनी प्रभावों का अध्ययन करने के लिए एक मूल्यवान और प्रजनन योग्य तरीका है।

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Protocol

नीचे वर्णित सभी प्रक्रियाओं को संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था और जिनेवा, स्विट्जरलैंड (प्राधिकरण जीई/106/16) के पशुचिकित्सा राज्य कार्यालय द्वारा । एमपीएम सेल लाइन H2052/484 की स्थापना की और कॉलिन डीजे और एट अल23के लेख में विस्तृत के रूप में हमारी प्रयोगशाला में विशेषता थी । संक्षेप में, H2052/484 सेल लाइन एक छाती ट्यूमर से स्थापित किया गया था जो एनसीआई-एच2052 (एटीसीसी) कोशिकाओं के एक इनट्रैपलर इंजेक्शन के बाद प्राप्त किया गया था जो प्रतिरक्षारहित नग्न चूहों में था ।

1. प्रायोगिक डिजाइन

  1. सांख्यिकीय शक्ति गणना (जैसे http://powerandsamplesize.com/Calculators/)का उपयोग करप्रयोग के अनुसार कितने चूहों की आवश्यकता है, यह निर्धारित करें कि कितने चूहों की आवश्यकता है।
  2. प्रत्यारोपण से कम से एक सप्ताह पहले, आठ से दस सप्ताह पुरानी आयथी महिला नग्न चूहों Foxn1nu nu/nu खरीद और उंहें एक विशिष्ट रोगजनक मुक्त (एसपीएफ) वातावरण में घर के लिए कम से एक सप्ताह के लिए ।

2. प्रत्यारोपण के लिए कोशिकाओं की तैयारी

  1. गणना करें कि प्रत्येक माउस को 1 x 106 कोशिकाओं (चरण 1.1) के साथ इंजेक्ट किया जाता है, इसलिए कितने H2052/484 कोशिकाओं की आवश्यकता होती है। चूहों को इंजेक्शन के रूप में कोशिकाओं की एक अतिरिक्त संख्या तैयार सिरिंज नमूना शामिल होगा।
  2. संस्कृति आरपीएमआई 1640 मीडियम में एमपीएम एच2052/484 सेल लाइन 10% (v/v) भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस), 100 यूनिट्स/एमएल पेनिसिलिन और 100 μ/mL स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर टिश्यू कल्चर इनक्यूबेटर में 5% सीओ2के साथ।
  3. लगभग 80% संगम (~ 7 x 106 कोशिकाओं प्रति 15 सेमी पेट्री डिश) के लिए प्रत्यारोपण के लिए संस्कृति कोशिकाओं।
  4. ग्राफ्टिंग से पहले करीब 1 घंटे, कोशिकाओं को तैयार करें।
  5. मीडिया को त्यागें, कैल्शियम और मैग्नीशियम (10 एमएल प्रति 15 सेमी पेट्री डिश) के बिना बाँझ पीबीएस के साथ कोशिकाओं को धोएं और 0.05% ट्राइप्सिन-2 एम ईटीए (प्रति 15 सेमी पेट्री डिश) के साथ 5 मिन के लिए इनक्यूबेटकरकोशिकाओं को अलग करें।
  6. आरपीएमआई माध्यम (10 mL प्रति 15 सेमी पेट्री डिश) में कोशिकाओं को इकट्ठा करें और हीमोसाइटोमीटर का उपयोग करके कोशिकाओं की गणना करें।
  7. चरण 1.2 के अनुसार गणना के रूप में विचार करने के लिए चूहों की संख्या के लिए कोशिकाओं की उचित संख्या एकत्र करें।
  8. 3 मिन के लिए 300 x ग्राम पर अपकेंद्रित्र, एफबीएस के बिना आरपीएमआई माध्यम के 10 मीटर में सेल पैलेट धोएं और 3 मिन के लिए 300 x ग्राम पर फिर से अपकेंद्री।
  9. एफबीएस के बिना आरपीएमआई माध्यम की उचित मात्रा में कोशिकाओं को 50 माइक्रोन प्रति 1 x 106 कोशिकाओं की एकाग्रता के लिए फिर से निलंबित करें क्योंकि प्रत्येक माउस को 50 माइक्रोन की मात्रा के साथ इंजेक्ट किया जाना चाहिए।

3. ट्यूमर सेल प्रत्यारोपण

  1. प्रत्यारोपण से पहले, एक कीटाणुनाशक के साथ सभी सतहों को छिड़ककर लेमिनार प्रवाह हुड में संज्ञाहरण प्रणाली और शल्य चिकित्सा क्षेत्र तैयार करें। संज्ञाहरण प्रणाली सहित लैमिनार प्रवाह हुड में बाँझ या कीटाणुरहित आपूर्ति तैयार करें, माउस शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए हीटिंग पैड, पॉलीविडोन आयोडीन समाधान, 30 ग्राम हैमिल्टन सिरिंज (जैसे, 705RN सिरिंज, 30 जी सुई-20 मिमी-पॉइंट स्टाइल 4), बाँझ धुंध और कपास झाड़ू, बाँझ डिस्पोजेबल स्केलपेल और सर्जरी उपकरणों और बाँझ माइक्रोपाइपेट और सुझाव।
  2. कीटाणुरहित फ्लो हुड में माइक्रोआइप्ड एसपीएफ-पिंजरों को रखें और खोलें और ग्राफ्टिंग स्पीड के अनुसार एक के बाद एक माउस का एनेस्थेटाइज करें । प्रयोग तकनीशियनों के लिए ग्राफ्टिंग अवधि लगभग 5-10 मिनट है।
  3. चूहों को 4-5% आइसोफ्लुरन के साथ पहले उत्प्रेरण करके एनेस्थेटाइज़ करें। फिर 3% आइसोफ्लोरीन के साथ ग्राफ्टिंग करते हुए हीटिंग पैड पर एनेस्थीसिया के तहत बनाए रखें। माउस द्वारा दाएं पलटा के नुकसान से संज्ञाहरण की गहराई निर्धारित करें।
  4. एक बार माउस एनेस्थेटाइज्ड हो जाने के बाद, एनाल्जेसिक/पोस्ट-ऑपरेटिव दर्द-राहत के रूप में चमड़े के नीचे 0.05 मिलीग्राम/किलो बुप्रेनोर्फिन इंजेक्ट करें।
  5. माउस को हीटिंग पैड पर माउस (दाएं पार्श्व डेक्यूबिटस) पर रखें।
  6. पॉलीविडोन आयोडीन समाधान के साथ सर्जिकल क्षेत्र को साफ करें और पसलियों को बेनकाब करने के लिए त्वचा का 5 मिमी चीरा और कुंद कैंची के साथ आसपास के वसा और मांसपेशियों को साफ करें।
  7. एफबीएस के बिना आरपीएमआई माध्यम के 50 माइक्रोन प्रति 1 x 106 कोशिकाओं की एकाग्रता पर सेल निलंबन को समरूप करें और हैमिल्टन सिरिंज के साथ निलंबन के 50 माइक्रोन लोड करें। हवा के बुलबुले से बचें और कोशिकाओं के गैर-ऑर्थोटोपिक ग्राफ्टिंग से बचने के लिए 70% अल्कोहल के साथ सुई को पोंछें। प्रत्येक इंजेक्शन से पहले सेल निलंबन को समरूप करें।
  8. धीरे-धीरे कोशिकाओं को 30 डिग्री के कोण और इंटरकोस्टल मांसपेशियों के नीचे 2-3 मिमी की गहराई के साथ 6और 7पसलियों के बीच प्लीर गुहा में इंजेक्ट करें। सिर्फ पसलियों के नीचे सुई रखकर फेफड़ों में इंजेक्ट न करें सुनिश्चित करें। सुई मांसपेशियों के माध्यम से पारदर्शिता से दिखाई जानी चाहिए(चित्र 1ए)।
  9. घाव को तीन से चार अवशोषित टांके के साथ बंद करें।
  10. चूहों को गर्म वातावरण में तब तक स्टोर करें जब तक कि वे जाग न जाएं।
  11. दिन के बाद, बुप्रेनोरफिन इंजेक्शन दोहराएं। प्रयोगात्मक डिजाइन और प्राधिकरण के अनुसार चूहों की निगरानी करें।

4.[18एफ]एफडीजी-पीईटी/सीटी इमेजिंग

नोट: नीचे वर्णित सभी प्रक्रियाओं को स्थानीय पशु आवास और इमेजिंग सुविधाओं द्वारा अनुमोदित किया जाना चाहिए । सुनिश्चित करें कि रेडियोधर्मी सामग्री आयात, संग्रहीत और स्थानीय विकिरण सुरक्षा नियमों के अनुसार संभाला जाता है (जैसे, स्टॉक समाधान गतिविधि, परिरक्षित हुड हैंडलिंग)। एसपीएफ की स्थिति को लैमिनार फ्लो हुड में जानवरों को हेरफेर करके और उन्हें एसपीएफ-संगत स्कैनर बेड(चित्रा 1बी, सी)में लोड करके बनाए रखा जा सकता है।

  1. ट्यूमर पीईटी प्रदर्शन विकास की निगरानी/सीटी इमेजिंग, सप्ताह में एक बार, H2052/484 कोशिकाओं के प्रत्यारोपण के बाद 7 दिन पर शुरू । प्रत्येक जानवर समय के साथ अपने स्वयं के नियंत्रण का प्रतिनिधित्व करता है।
  2. यदि उपलब्ध हो या उन्हें सुविधा के करीब रखते हैं तो चूहों को इमेजिंग सुविधा आवास तक पहुंचाकर इमेजिंग से पहले जानवरों के संकट से बचें।
  3. 18एफ] एफडीजी-पीईटी/सीटी से पहले 12-16 घंटे के लिए फास्ट चूहे जो पृष्ठभूमि संकेतों को कम करदेते हैं। Fueger24 देखें जिन्होंने[18एफ] एफडीजी-पीईटी/सीटी स्कैन पर पशु हैंडलिंग के प्रभाव का वर्णन किया ।
  4. स्थानीय नियमों के अनुसार चूहों के बिस्तर को दूषित और स्टोर करें।
  5. रेडियोधर्मिता खुराक माप, इंजेक्शन और पीईटी स्कैन के सभी समय रिकॉर्ड करने के लिए एसयूवी की गणना करने में सक्षम हो ।
  6. ब्राउन एडीपोस टिश्यू (बैट) मेटाबोलिज्म को कम करने वाले[18एफ] एफडीजी के इंजेक्शन से पहले 30 मिन के लिए 30 डिग्री सेल्सियस पर प्री-वार्म चूहे। उदाहरण के लिए, हीटिंग कोठियों में पूर्व गर्म, हीटिंग पैड का उपयोग करके या अवरक्त लैंप का उपयोग करके।
  7. 1 एमएल इंसुलिन सीरिंजमें 1 50-200 माइक्रोन में स्टॉक सॉल्यूशन से 3-4 एमबीक्यू की खुराक तैयार करें। इंसुलिन सीरिंज लगभग कोई मृत मात्रा होने का लाभ है और इंजेक्शन के बाद शेष गतिविधि की माप से बच सकता है ।
  8. 3.3 चरण में वर्णित आइसोफ्लोरीन के साथ चूहों का एनेस्थेटइज़ करें। चूहों का वजन करें और फिर नसों में 3-4 MBq[18एफ] एफडीजी इंजेक्ट करें। रेट्रो-ऑर्बिटल इंजेक्शन पसंद की एक विधि है क्योंकि यह त्वरित, आसान है और पूंछ नस इंजेक्शन मुद्दों या इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के विलंबित तेज से बचा जाता है।
  9. इंजेक्शन के बाद, चरण 3.5 में शुरू की गई गर्म परिस्थितियों के तहत चूहों को उनके पिंजरों में 45 मिन के लिए जागना छोड़ दें। [18एफ] एफडीजी तेज की अवधि 1 घंटे है; 15 मिन आम तौर पर बिस्तर पर चूहों लोड और पीईटी से पहले सीटी प्रदर्शन करने के लिए पर्याप्त हैं।
  10. आइसोफ्लोरीन के साथ चूहों का एनेस्थेटाइज़ करता है जैसा कि चरण 3.3 में वर्णित है और उन्हें स्कैनर बिस्तर(चित्रा 1बी)पर लोड करें।
  11. बिस्तर को स्कैनर और विषय जानवरों को फेफड़ों पर केंद्रित सीटी स्कैन में स्थानांतरित करें। 74 मिमी (1.6 x आवर्धन, ट्रायंफ अधिग्रहण का उदाहरण)(चित्रा 1सी)के दृश्य के क्षेत्र के साथ, 360 डिग्री रोटेशन के दौरान 80 केवीपी, 160 माइक्रोन, 1024 अनुमानों पर स्कैन प्राप्त करें।
  12. पीईटी उपप्रणाली के लिए बिस्तर ले जाएँ और 15 मिनट की अवधि के लिए[18एफ] एफडीजी इंजेक्शन के बाद अधिग्रहण 1 एच शुरू करते हैं। पीईटी/सीटी सिस्टम के अधिकांश के साथ, बिस्तर सीटी से पीईटी के लिए स्वचालित रूप से स्थानांतरित किया जा सकता है एक ही क्षेत्र पर केंद्रित FOV रखने के लिए ।
  13. इमेजिंग चैंबर से चूहों को हटा दें और उन्हें अपने पिंजरे में ठीक होने की अनुमति दें।
  14. स्थानीय नियमों के अनुसार रेडियोधर्मी क्षय के लिए समर्पित क्षेत्र में चूहों को रखें।

5.[18एफ] एफडीजी-पीईटी/सीटी स्कैन का विश्लेषण

  1. 512 के मैट्रिक्स और 0.144 मिमी (फ़िल्टर बैक प्रोजेक्शन-एफबीपी एल्गोरिदम, बिल्ट-इन सॉफ्टवेयर) के साथ ऊपर उल्लिखित शर्तों में किए गए सीटी स्कैन का पुनर्निर्माण करें। एक आदेश सबसेट अपेक्षा अधिकतम-3 आयाम-OSEM3D एल्गोरिदम के 20 पुनरावृत्तियों का उपयोग करपीपी स्कैन पुनर्निर्माण। एक प्रेत सिलेंडर स्कैनिंग द्वारा Bq/mL में छवियों को कैलिब्रेट करें । अपने अंतर्निहित सॉफ्टवेयर समाधान के अनुसार सीटी और पीईटी स्कैन को स्वचालित रूप से सह-पंजीकृत करें।
  2. विश्लेषण सॉफ्टवेयर(सामग्री की तालिका)का उपयोग करके फेफड़ों की मात्रा का विश्लेषण करें।
    1. ओपन डेटा आइकन पर क्लिक करके संदर्भ के रूप में सीटी डेटा लोड करें(रेफरी)। फिर परिशिष्ट डेटा आइकन पर क्लिक करके इनपुट(Inp1)के रूप में पीईटी डेटा लोड करें।
    2. दृश्य निरीक्षण के लिए छवियों के विपरीत सीटी और पीईटी के रंग तराजू ("WL") समायोजित करें।
    3. ड्रॉप-डाउन मेनू से 3डी आरओआई टूल का चयन करें, ऐड आरओआई पर क्लिक करें और फ़ाइल फेफड़ोंका नाम दें। सेगमेंटेशन एल्गोरिदम पर क्लिक करें । पड़ोस की दहलीज। इनपुट को पृष्ठभूमि और छवि के रूप में रेफरीके रूप में परिभाषित करें । माउस फेफड़ों के घनत्व मूल्यों के अनुसार न्यूनतम और अधिकतम दर्ज करें, आमतौर पर -800 और - 300 हू। वीटीके आइकन पर क्लिक करके 3डी रेंडर फेफड़ों का निरीक्षण करें और शो टेबल आइकनपर क्लिक करके उत्पन्न तालिका में मात्रा को पुनः प्राप्त करें।
  3. अधिकतम मानक तेज मूल्यों (SUVmax) निकालने के द्वारा ट्यूमर में[18एफ] एफडीजी तेज का विश्लेषण करें।
    1. ड्रॉप-डाउन मेनू से अंकगणित का चयन करके बीक्यू/एमएल में कैलिब्रेटकी गई पीईटी छवियों को एसयूवी में परिवर्तित करें, फिर स्कैलर गुणा करें और चयनित और स्लर के रूप में आईएनपी1 का उपयोग करें बीक्यू/एमएल एसयूवी फैक्टर के रूप में गणना की गई है: एसयूवी = (Bq/mL)/(इंजेक्शन खुराक (Bq)/शरीर वजन (जी)) ।
    2. ड्रॉप-डाउन मेनू से 3डी आरओआई टूल का चयन करें, ऐड आरओआई पर क्लिक करें और फ़ाइल ट्यूमर का नाम दें। 3डी पेंट मोड पर क्लिक करें । गोला। केवल अनियंत्रित 2D। आकार के आकार को समायोजित करें और ट्यूमर को घेर लें। सुनिश्चित करें कि उदाहरण के लिए दिल से आने वाले किसी भी हस्तक्षेप संकेतों को शामिल न करें। शो टेबल आइकनपर क्लिक करके उत्पन्न तालिका में SUVmax मूल्य पुनः प्राप्त करें ।

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Representative Results

H2052/484 ऑर्थोटोपिक मॉडल
सुसंस्कृत कैंसर कोशिकाओं के इंट्रा थोरेसिक इंजेक्शन द्वारा ऑर्थोटोपिक एमपीएम मॉडल, विशेष रूप से H2052/484 कोशिकाओं को सेटअप करने के लिए अपेक्षाकृत आसान कर रहे हैं । ऊपर वर्णित विभिन्न चरणों में केवल मामूली सेल संस्कृति ज्ञान की आवश्यकता होती है और सर्जरी के कदम मामूली रूप से प्रशिक्षित पशु प्रयोगकर्ताओं के लिए सुलभ हैं। प्रत्यारोपण के परिणाम को अधिकतम करने के लिए नग्न चूहों और कोशिकाओं को बाँझ परिस्थितियों में हेरफेर किया जाना चाहिए। ध्यान से इस प्रोटोकॉल का पालन करके, जिसमें कम संज्ञाहरण और न्यूनतम सर्जरी शामिल है, हमें विभिन्न एमपीएम सेल लाइनों के साथ इंजेक्शन वाले 266 चूहों के बीच केवल 1 मौत का सामना करना पड़ा। इन 266 चूहों के बीच ट्यूमर कोशिकाओं के कोई न्यूमोथोरेक्स या इंट्रा-पल्मोनरी प्रत्यारोपण नहीं देखा गया। विशेष रूप से, H2052/484 सेल लाइन की ऑर्थोटोपिक ट्यूमर विकास दर इंजेक्शन चूहों विकसित ट्यूमर (एन = 118) के 93.8% के बाद से उच्च है। H2052/484 ट्यूमर का पता पीईटी/सीटी इमेजिंग द्वारा इंजेक्शन के 14 दिनों बाद से लगाया जा सकता है और हमारे एंडपॉइंट मापदंड के अनुसार प्रयोग की औसत अवधि एक प्रतिनिधि प्रयोग21में 31 दिन थी । जैसा कि हमने इस अन्य अध्ययन21में वर्णित किया है, ट्यूमर को छाती गुहा में स्थानीयकृत किया गया था, फेफड़ों, छाती की मांसपेशियों, महाधमनी आर्क या अवर वेना कावा पर स्वतंत्र रूप से वितरित या संलग्न थे। मेटास्तासेस नहीं मिले।

एमपीएम की निगरानी[18एफ] एफडीजी-पीईटी/सीटी इमेजिंग
ऑर्थोटोपिक एमपीएम को संयुक्त पीईटी/सीटी इमेजिंग द्वारा व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले रेडियोट्रेसर[18एफ] एफडीजी के साथ साप्ताहिक निगरानी की गई थी जो अत्यधिक मेटाबोलिक ट्यूमर में जमा होती है । देशांतर शारीरिक सीटी स्कैन फेफड़ों की आकृति विज्ञान पर एमपीएम विकास के प्रभाव की कल्पना की अनुमति दी। सीटी स्कैन पर अत्यधिक विषम फेफड़ों का स्वचालित विभाजन आसपास के ऊतकों की तुलना में उनके कम घनत्व के कारण सरल है। 3डी प्रतिपादन ट्यूमर के स्थानीयकरण का अवलोकन देते हैं और फेफड़ों की देशीयमात्रा की मात्रा निकाली जा सकती है(चित्रा 2ए)। सीटी द्वारा फेफड़ों की मात्रा माप नहोने से चूहों के एमपीएम इंजेक्शन के बाद समय के साथ काफी कमी आई है , जो intrapleural (आईपीएल) H2052/484 ट्यूमर(चित्रा 2बी)के साथ है । दरअसल, एमपीएम ट्यूमर प्लीयूर गुहा के अंदर बढ़ते हैं और फेफड़ों पर दबाव बनाते हैं, जिससे उनकी मात्रा कम हो जाती है। सहसंबंध विश्लेषणों से पता चला है कि फेफड़ों की मात्रा 0.8 के निर्धारण आर2 (चित्रा 2सी)के गुणांक के साथ निगरानी के समय से विपरीत सहसंबद्ध थी। कुल मिलाकर, ये डेटा इस एमपीएम मॉडल के विकास की निगरानी करने के लिए सीटी स्कैन की विश्वसनीयता दिखाते हैं।

सीटी के साथ संयुक्त, एक[18एफ] एफडीजी-पीईटी स्कैन एमपीएम ट्यूमर की मेटाबोलिक स्थिति के बारे में अतिरिक्त और मूल्यवान जानकारी प्रदान करता है। जबकि कभी-कभी सीटी और पीईटी स्कैन छवियों की व्याख्या करना जटिल हो सकता है, विशेष रूप से शुरुआती समय बिंदुओं पर, दोनों तौर-तरीकों का एक संयोजन निदान को और मजबूती देता है। दरअसल, प्रतिनिधि देशाें[18एफ] एफडीजी-पीईटी/सीटी मॉनिटरिंग ने आईपीएल H2052/484 ट्यूमर के साथ माउस के 10 दिन और ४४ दिनों के बीच प्रदर्शन किया, जिससे पता चलता है कि ट्यूमर ग्राफ्टिंग के 2 सप्ताह बाद अलग होने लगते हैं(चित्रा 3ए)। यह उदाहरण छाती गुहा की परिधि में स्थित ट्यूमर के विकास और[18एफ] एफडीजी avidity पर प्रकाश डाला गया है और दिल महान जहाजों (सफेद तीर) के साथ । [18एफ] ट्यूमर में एफडीजी तेज सीटी स्कैन की मदद से, ट्यूमर पर तैयार ROIs में एसयूवीअधिकतम निकालने के द्वारा निर्धारित किया गया था, और उनके ग्लूकोज चयापचय(चित्रा 3बी)के महत्वपूर्ण समय निर्भर बढ़ जाती है दिखाता है । सहसंबंध विश्लेषण ों से पता चला है कि एसयूवीमैक्स 0.7 के निर्धारण आर2 (चित्रा 3सी)के गुणांक के साथ निगरानी के समय से सकारात्मक रूप से सहसंबद्ध थी। ये डेटा H2052/484 ऑर्थोटोपिक ट्यूमर के भाग्य की निगरानी करने के लिए[18एफ] एफडीजी-पीईटी स्कैन की विश्वसनीयता को प्रदर्शित करता है। अंत में, फेफड़ों की मात्रा और[18एफ] एफडीजी avidity, क्रमशः, सीटी और पीईटी द्वारा विश्लेषण किया, ०.६ के एक आर2 के साथ एक दूसरे के साथ सहसंबंधित एमपीएम ऑर्थोटोपिक ट्यूमर विकास(चित्रा 4)का अध्ययन करने के लिए इन मापों की ताकत का समर्थन ।

Figure 1
चित्रा 1: न्यूड माउस ऑर्थोटोपिक ज़ेनोबेड़ा मॉडल। (A)प्रोटोकॉल अनुभाग में वर्णित बाएं प्लीर गुहा में मानव एमपीएम कोशिकाओं का इंट्रापल्युल (आईपीएल) इंजेक्शन। (बी, सी) चूहों को एनेस्थेटाइज्ड किया जाता है और एक लैमिनार फ्लो हुड में पीईटी/सीटी बेड में लोड किया जाता है फिर स्कैनर में स्थानांतरित कर दिया जाता है । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: ऑर्थोटोपिक H2052/484 MPM सीटी द्वारा निगरानी मॉडल के ट्यूमर विकास । (A)सीटी स्कैन के प्रतिनिधि 3 डी पुनर्निर्माण H2052/484 एमपीएम आईपीएल ट्यूमर और प्रत्यारोपण के बाद दिनों में विभिन्न समयों पर फेफड़ों की मात्रा (उपाध्यक्ष) पर उनके प्रभाव को दिखा । व्हाइट अरोहेड्स ने एमपीएम आईपीएल ट्यूमर की लोकेशन दिखाई। (B)वायलिन साजिश फेफड़ों की मात्रा (वीएल),एन = 6 के एक प्रतिनिधि समय पाठ्यक्रम दिखा । तुकी के कई तुलना आंकड़ों के साथ एक तरह से ANOVA परीक्षण इंगित कर रहे हैं । पत्र ए, बी, सी, डी, ई, एफ क्रमशः D10, D16, D23, D29, D36 और D44 के साथ मॉडल ों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं । इसी पी मान: एक्स, पी एंड एलटी; 0.05; xx, पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.01; xxx, पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.001; एक्सएक्सएक्स, पी एंड एलटी; 0.0001। (ग)आईपीएल एमपीएम विकास से संबंधित फेफड़ों की मात्रा में कमी और इंजेक्शन के बाद समय के बीच संबंध । रैखिक प्रतिगमन एक मोटी रंग की लाइन और धराशायी काली लाइनों के रूप में संबंधित एसडी के रूप में साजिश रची है । ग्राफ और सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर के साथ किया गया । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: आईपीएल एमपीएम मॉडल का ट्यूमर चयापचय इसके बाद[18एफ] एफडीजी-माइक्रोपेट/सीटी । }एमपीएम आईपीएल ट्यूमर दिखा प्रतिनिधि पीईटी/सीटी स्कैन । पीईटी/सीटी छवियां छाती क्षेत्र के ट्रांस-अक्षीय स्लाइस दिखाती हैं जिसमें[18एफ] एफडीजी-शौकीन चावला ट्यूमर होते हैं, सीटी (ग्रे स्केल) के साथ शारीरिक जानकारी प्रदान करते हैं और पीईटी (कैलिब्रेटेड छद्म रंग पैमाने) उच्च ट्यूमर और अंग ग्लूकोज उपयोग के स्थान और तीव्रता को दर्शाते हैं । इंजेक्शन के बाद के दिनों का संकेत दिया जाता है। सीटी: सीटी मध्यस्थ खिड़की; [18एफ] एफडीजी-पीईटी/सीटी: पीईटी और सीटी स्कैन की फ्यूज्ड इमेज । सफेद अरोहेड्स ने एमपीएम आईपीएल ट्यूमर दिखाया। एल = फेफड़े, एच = दिल, बैट = भूरे रंग के एडीपोज ऊतक। (ख)वायलिन प्लॉट एमपीएम मेटाबोलिज्म, एन = 6 से जुड़े एसयूवीमैक्स के एक प्रतिनिधि समय पाठ्यक्रम दिखा । तुकी के कई तुलना आंकड़ों के साथ एक तरह से ANOVA परीक्षण इंगित कर रहे हैं । पत्र ए, बी, सी, डी, ई, एफ क्रमशः D10, D16, D23, D29, D36 और D44 के साथ मॉडल ों के बीच महत्वपूर्ण अंतर का संकेत देते हैं । इसी पी मान: एक्स, पी एंड एलटी; 0.05; xx, पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.01; xxx, पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.001; एक्सएक्सएक्स, पी एंड एलटी; 0.0001। (ग)आईपीएल एमपीएम ट्यूमर में एसयूवीमैक्स की वृद्धि और इंजेक्शन के बाद समय के बीच संबंध । रैखिक प्रतिगमन एक मोटी रंग की लाइन और धराशायी काली लाइनों के रूप में संबंधित एसडी के रूप में साजिश रची है । ग्राफ और सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर के साथ किया गया । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4: फेफड़ों की मात्रा और मेटाबोलिक ट्यूमर गतिविधि द्वारा निगरानी एमपीएम विकास के बीच सहसंबंध। एसयूवीमैक्स और फेफड़ों की मात्रा (वीएल)के बीच सहसंबंध एक रैखिक प्रतिगमन के रूप में प्रदर्शित एक मोटी रंग की लाइन और धराशायी काली लाइनों के रूप में संबंधित एसडी के रूप में साजिश रची । ग्राफ और सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर के साथ किया गया । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

यह कागज एमपीएम H2052/484 कोशिकाओं के एक मूल ऑर्थोटोपिक मॉडल का वर्णन करता है जो मिथानिक चूहों की पूर्ण गुहा में इंजेक्ट किया जाता है और छोटे पशु पीईटी/सीटी इमेजिंग द्वारा निगरानी की विधि है । इस मॉडल को मध्यम पशु हैंडलिंग और सर्जरी कौशल के साथ लागू किया जा सकता है और एक बहुत अच्छी विकास दर प्रदर्शित करता है। यह अनुपचारित चूहों में लगभग 10 सप्ताह की एक बड़ी प्रायोगिक खिड़की और इंजेक्शन के बाद 2 सप्ताह के रूप में ट्यूमर का गैर-आक्रामक देशीयमात्रा पता लगाने की अनुमति देता है।

ऑर्थोटोपिक मॉडल सीधे ट्यूमर के प्रारंभिक वातावरण में जीवित कोशिकाओं या ऊतकों के प्रत्यारोपण पर भरोसा करते हैं। व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले चमड़े के नीचे या इंट्रापेरिटोनियल एमपीएम मॉडल और इंट्रापलियल मॉडल के बीच मुख्य अंतर उनके माइक्रोएनवायरमेंट में निहित है। दरअसल, ट्यूमर के माइक्रोएनवायरमेंट में कैंसर कोशिकाओं25के अलावा कई स्ट्रोमल सेल प्रकार (फाइब्रोब्लास्ट, ल्यूकोसाइट्स, मैक्रोफेज) होते हैं। ये स्ट्रोमल कोशिकाएं ट्यूमर के विकास को मिलाने वाले ट्यूमर माइक्रोएनवायरमेंट में योगदान देने वाले विकास कारकों और साइटोकिन्स को स्रावित करती हैं। ट्यूमर माइक्रोएनवायरमेंट शारीरिक साइट के साथ भिन्न होता है जिसमें यह सुझाव दिया जाता है कि एक ऑर्थोटोपिक ज़ेनोग्राफ्ट विकसित होगा और एक चमड़े के नीचे एक25की तुलना में उपचार के लिए अलग तरह से प्रतिक्रिया देगा। इसलिए, चूंकि ऑर्थोटोपिक ज़ेनोग्राफएम रोगियों में पाए जाने वाले एक तुलनीय सूक्ष्म वातावरण से घिरे होते हैं, इसलिए उपचार के लिए उनके व्यवहार और प्रतिक्रिया को नैदानिक स्थिति17,19को बेहतर ढंग से प्रतिबिंबित करना चाहिए।

कैंसर अनुसंधान में कई पूर्वनैदानिक मॉडल मानव विद्वेष सफलता सुनिश्चित करने के लिए इम्यूनोडेफिजेंट चूहों को फंसाता है। नग्न चूहों के पास परिपक्व थाइमस नहीं है और ट्यूमर माइक्रोएनवायरमेंट26के महत्वपूर्ण हिस्से की कमी है। यद्यपि नग्न चूहों के पास परिपक्व थाइमस नहीं है और इसके परिणामस्वरूप टी कोशिकाओं में कमी है, वे अधिक स्वतंत्र और अत्यधिक कमी वाले एससीआईडी चूहों26के विपरीत अपने प्लीरयूरोवातावरण में परिपक्व लिम्फोसाइट्स बी, न्यूट्रोफिल, मोनोसाइट्स और मैक्रोफेज पेश करते हैं। एमपीएम विकास के शुरुआती दौर में नियामक टी कोशिकाओं की महत्वपूर्ण दमनकारी भूमिका होती है। हालांकि, अधिक उन्नत चरणों में, न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज सहित माइलॉयड कोशिकाएं ट्रेग कोशिकाओं को बदलती हैं; इस समारोह में, नियामक टी कोशिकाओं की दमनकारी भूमिका केवल एमपीएम विकास23,27के प्रारंभिक दौर के दौरान महत्वपूर्ण है . नतीजतन, हालांकि एक पूर्ण प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (उदाहरण के लिए, एक टी प्रतिक्रिया शामिल इम्यूनोथेरपी) शामिल अध्ययन यहां प्रस्तुत मॉडल में अध्ययन नहीं किया जा सकता है, हम यह बताना है कि इस ऑर्थोटोपिक मॉडल अपने सभी हित रहता है नए उपचार या एमपीएम के नए नैदानिक उपकरणों का आकलन ।

एक पद्धतिगत दृष्टिकोण में, इनट्रैपल्युल एमपीएम ट्यूमर के विकास को अधिकतम करने के लिए ध्यान में रखने के लिए महत्वपूर्ण कदम हैं। चूहों के मॉडल स्थापित करने से पहले, कोशिकाओं के आधार पर (80% से कम संदेह) और 8 से 10 महीने के लिए चूहों को कम करने के लिए उपयोग किया है। दरअसल, छोटे छोटे चूहों इंजेक्शन मुश्किल है और एक्टोपिक इंजेक्शन में परिणाम और अस्तित्व को बदल सकते हैं । प्रत्यारोपण प्रक्रिया के दौरान, मानक सर्जरी सावधानियों लिया जाना चाहिए, और कुंद कैंची का इस्तेमाल किया जाना चाहिए, खासकर जब रक्तस्राव से बचने के लिए चीरा, जो जानवरों की मौत के लिए नेतृत्व कर सकता है । सिरिंज का चुनाव (उदाहरण के लिए, यहां वर्णित मॉडल) और यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल मध्यम की एक छोटी मात्रा के सटीक और कोमल इंजेक्शन की अनुमति देता है जिसमें ट्यूमर कोशिकाएं होती हैं ताकि इंट्रालेयूरल इंजेक्शन (30 डिग्री कोण, 2-3 मिमी गहराई) सुनिश्चित किया जा सके।

ऑर्थोटोपिक एमपीएम मॉडल की देशीयंतनिगरानी केवल इमेजिंग टेक्नीक द्वारा गैर-आक्रामक रूप से की जा सकती है। पीईटी/सीटी एमपीएम का निदान करने के लिए नैदानिक पद्धति में सलाह दी गई विधि है और इसके फलस्वरूप इस अध्ययन में20,21का उपयोग किया गया है । व्यापक रूप से इस्तेमाल ऑप्टिकल इमेजिंग की तुलना में, पीईटी/सीटी इमेजिंग में रेडियोधर्मी यौगिकों का उपयोग शामिल है और इसलिए सुरक्षा, रेडियोट्रेसर्स की रसद और इसकी लागत28के कारण सेटअप के लिए अधिक नाजुक है । फिर भी, पीईटी/सीटी इमेजिंग ट्यूमर कोशिकाओं के आनुवंशिक संशोधन पर भरोसा नहीं करता है और उच्च संकल्प स्थलाकृतिक, शारीरिक और आणविक जानकारी प्रदान करता है । ऑप्टिकल इमेजिंग भी पीईटी की तुलना में तेज है/ अत्यधिक उपलब्ध नैदानिक रेडियोट्रेसर[18एफ] एफडीजी का उपयोग इस तकनीककेसाथ किए गए अनुसंधान के लिए एक उच्च अनुवादशक्ति का वारंट है । हालांकि[18एफ] एफडीजी-पीईटी स्कैन रीडिंग और विश्लेषण के कारण आसपास के दिल और भूरे रंग के एडीपोज ऊतकों में उच्च तेज के कुछ अनुभव की आवश्यकता हो सकती है, सीटी के साथ इसका संयोजन निदान को परिष्कृत करता है। [18एफ] एफडीजी पीईटी/सीटी प्रयोगों के दौरान, उपवास और वार्मिंग चूहों के साथ-साथ 1 घंटे के[18एफ] एफडीजी का तेज समय प्रदर्शन करने से ट्यूमर के दृश्य को काफी बढ़ाया जा सकता है क्योंकि स्कैन स्थितियां अत्यधिक प्रभाव पीईटी विरोधाभासों के रूप में पहले से हीवर्णित 24। पूर्वनैदानिक ऑर्थोटोपिक मॉडलों पर आगे के अध्ययनों में अन्य चिकित्सकीय रूप से उपयोग किए जाने वाले रेडियोट्रेसर[18एफ] फ्लूरोथीमिमिडीन (एफएलटी) या[18एफ] फ्लोरोमोनिसिडिडाजोल (एफएमआईएसओ), जो क्रमशः प्रसार और हाइपोक्सिया पर नज़र रखता है, ऐसे विश्वसनीय ऑर्थोटोपिक एमपीएम मॉडल29के बारे में अधिक जानकारी प्रदान कर सकता है ।

अंत में, गैर-इनवेसिव इमेजिंग के साथ संयुक्त यह प्रासंगिक ट्रांसलेशनल मॉडल पूरी तरह से 3आर अवधारणा के अनुरूप है: आरजानवरों की संख्या को कम करता है, दर्द और असुविधा को कम करने के लिए आरउत्साहित और विकल्प22के साथ आरएप्लेस पशु प्रयोग। दरअसल, जानवरों के एक ही सेट के भीतर, चिकित्सकीय अनुवर्ती और प्रतिक्रिया गैर-आक्रामक रूप से प्रयोगों में देशीयरूप से माप की अनुमति देने की निगरानी की जा सकती है, इस प्रकार प्रति प्रयोग आवश्यक जानवरों की संख्या को कम किया जा सकता है। इसके अलावा, जैसा कि प्रत्येक जानवर समय के साथ अपने नियंत्रण का प्रतिनिधित्व करता है, गैर-इनवेसिव इमेजिंग भी विश्वसनीय डेटाप्राप्तकरने के लिए आवश्यक जानवरों की संख्या को कम करने वाली सांख्यिकीय शक्ति में अत्यधिक वृद्धि करती है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस शोध को लिग जिनेवा द्वारा वित्त पोषित किया गया था (वीएस-बी. के लिए) और जिनेवा और लुसाने के विश्वविद्यालयों और अस्पतालों (डीसी, ओबी और एसजी) के विश्वविद्यालयों और अस्पतालों के बायोमेडिकल इमेजिंग (सीआईबीएम) के लिए केंद्र द्वारा।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
3-mice bed Minerve bed for mice imaging
Athymic Nude-Foxn1n nu/nu Envigo, Huntingdon, UK 6907F immunodeficient mouse
Betadine Mundipharma Medical Company, CH 111131 polyvidone iodine solution
Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline (DPBS) ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA 14190094 Buffer for cell culture
Fetal bovine serum (FBS) PAA Laboratories, Pasching, Austria A15-101 cell culture medium supplement
Insulin syringes BD Biosciences, San Jose, CA, USA 324826 syringe for cell injection
Penicillin/Streptomycin ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA 15140122 antibiotics for cell culture medium
RPMI 1640 ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA 61870010 basal cell culture medium
Temgesic (Buprenorphin 0.3 mg/mL) Alloga SA, CH 700320 opioid analgesic product
Triumph PET/SPECT/CT Trifoil, Chatsworth, CA, USA imaging equipment
Trypsin ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA 25050014 enzymatic cell dissociation buffer
Virkon S 2% Milian, Vernier, CH 972472 disinfectant
Vivoquant Invicro, Boston, MA, USA

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References

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Colin, D. J., Bejuy, O., Germain, S., Triponez, F., Serre-Beinier, V. Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice. J. Vis. Exp. (154), e60272, doi:10.3791/60272 (2019).

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