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Bioengineering

मधुमेह के घावों के त्वरित उपचार के लिए Doxycycline भरी हुई कोलेजन-चिटोसन कंपोजिट पाड़

Published: August 21, 2021 doi: 10.3791/62184
Automatic Translation
1, 1, 2, 1, 3, 1
1Department of Pharmaceutics, JSS College of Pharmacy, JSS Academy of Higher Education & Research, 2Department of Pharmaceutical Sciences, School of Pharmacy, North Dakota state university, 3Department of Pharmacology, JSS College of Pharmacy, JSS Academy of Higher Education & Research

Summary

तैयार DOX-CL पाड़ यांत्रिक शक्ति, porosity, पानी अवशोषण, गिरावट दर, निरंतर रिहाई, विरोधी बैक्टीरियल, जैव अनुकूलता, और विरोधी भड़काऊ गुण है, जो DWs में क्षतिग्रस्त ऊतक की वसूली के लिए आवश्यक माना जाता है में एक आदर्श DW ड्रेसिंग की आवश्यकताओं को संतुष्ट ।

Abstract

मधुमेह मेलिटस की एक बड़ी जटिलता मधुमेह के घाव (DW) है। मधुमेह में सूजन का लंबा चरण चोट के आगे के चरणों में बाधा डालता है जिससे घाव भरने में देरी होती है। हमने अपनी रिपोर्ट एंटी-भड़काऊ गुणों के साथ-साथ अपने एंटी-बैक्टीरियल गुणों के कारण पसंद की संभावित दवा के रूप में डॉक्सीसाइक्लिन (DOX) का चयन किया। वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य डॉक्स लोडेड कोलेजन-चिटोसन नॉन-क्रॉसलिंक्ड (एनसीएल) और क्रॉसलिंक्ड (सीएल) मचान तैयार करना और मधुमेह की स्थिति में उनकी उपचार क्षमता का मूल्यांकन करना है । मचान के लक्षण वर्णन परिणाम से पता चलता है कि DOX-CL पाड़ आदर्श porosity, एक कम सूजन और गिरावट दर रखती है, और DOX-एनसीएल पाड़ की तुलना में DOX की एक निरंतर रिहाई । इन विट्रो अध्ययनों से पता चलता है कि DOX-सीएल पाड़ सीएल पाड़ इलाज और नियंत्रण समूहों के साथ तुलना में जैव संगत और बढ़ाया सेल विकास था । एंटी बैक्टीरियल अध्ययनों से पता चला है कि डीएसडब्ल्यू में पाए जाने वाले सबसे आम बैक्टीरिया के खिलाफ सीएल पाड़ की तुलना में डॉक्स-सीएल पाड़ अधिक प्रभावी था। स्ट्रेप्टोज़ोटोसिन और उच्च वसा वाले आहार-प्रेरित DW मॉडल का उपयोग करना, सीएल पाड़ उपचारित समूह में घाव संकुचन की एक महत्वपूर्ण (पी≤0.05) तेज दर सीएल पाड़ उपचारित और नियंत्रण समूहों की तुलना में देखा गया था। DOX-CL पाड़ का उपयोग DWs के लिए स्थानीय उपचार के लिए एक आशाजनक दृष्टिकोण साबित हो सकता है।

Introduction

मधुमेह मेलिटस (डीएम) एक ऐसी स्थिति है जहां शरीर की इंसुलिन देने में विफलता या सीधी शर्करा के असामान्य पाचन में इसके परिणामों पर प्रतिक्रिया करने से रक्त ग्लूकोज 1 का उछाल आताहै । डीएम की सबसे लगातार और पेराई उलझन मधुमेह के घाव (डीएसडब्ल्यू) है। डीएम के साथ लगभग 25% रोगियों को अपने जीवनकालमें एक DW बनाने का अवसर है 1 । डीडब्ल्यू की रुकावट उपचार डीएम की त्रिपैथी से मान्यता प्राप्त है: इम्यूनोपैथी, वैकुलोपैथी, और न्यूरोपैथी। जब भी DW अनुपचारित छोड़ दिया जाता है, तो इसके परिणामस्वरूप गैंगरीन विकास हो सकता है, इसलिए संबंधित अंग 2 को हटाने का संकेत हो सकताहै।

रोगियों को निर्देश देने जैसे बहुत सारे उपचार (घाव का निरीक्षण दैनिक रूप से, घाव को साफ करना, घाव पर दबाव बनाने वाली गतिविधियों से बचें, आवधिक ग्लूकोज निगरानी, आदि), उनके रक्त ग्लूकोज को नियंत्रित करना, घाव डिब्राइडमेंट, प्रेशर ऑफलोडिंग, चिकित्सा प्रक्रिया, हाइपरबेरिक ऑक्सीजन थेरेपी, और उपचार उन्नत अभ्यास 3,4। इनमें से अधिकांश दवाएं बहुकार्यीय रोगविज्ञानी स्थितियों और इन दवाओं से संबंधित अप्रत्याशित खर्चों के प्रकाश में डीएसडब्ल्यू देखभाल के लिए महत्वपूर्ण सभी आवश्यकताओंको दूर करने में विफल रहती हैं । भले ही डीएसडब्ल्यू रोगजनन बहुकार्यात्मक है, लेकिन अनुचित ऊतक प्रबंधन के साथ लगातार सूजन को डीडब्ल्यूएस 5, 6में देरी से उपचार का वास्तविक कारण कहागयाहै।

डीएसडब्ल्यू में भड़काऊ और भड़काऊ मध्यस्थों के संवर्धित स्तर के परिणामस्वरूप विलंबित घाव भरने के लिए जिम्मेदार विकास कारक कम हो जाते हैं 2,6. डीडब्ल्यूएस में अनुचित एक्सट्रासेलुलर मैट्रिक्स (ईसीएम) गठन गठित ईसीएम के तेजी से क्षरण के लिए जवाबदेह मैट्रिक्स मेटललोप्रोटीन (एमएमपीएस) के बढ़ते स्तर से मान्यता प्राप्त है। एमएमपी में, एमएमपी-9 को लंबे समय तक सूजन और तेजी से ईसीएम क्षरण 7 के लिए जिम्मेदार एक प्रमुख मध्यस्थ के रूप में सूचित किया जाताहै। यह कहा गया है कि एक विरोधी भड़काऊ दवा के साथ स्थानीय उपचार जो एमएमपी-9 के ऊंचा स्तर को कम करता है, फिर से क्यूटेनियस होयोस्टेसिस, फ्रेमवर्क व्यवस्था स्थापित करता है और डीडब्ल्यूएस 8, 9के बेहतर उपचार का संकेतदेताहै।

डॉक्सीसाइक्लिन (DOX), एक एमएमपी-9 अवरोधक, MMP-9 के ऊंचा स्तर को दबाने के लिए चुना गया था, एक प्रमुख भड़काऊ मध्यस्थ DWs 10,11,12में लगातार सूजन के लिए जिंमेदार है । इसके अलावा, DOX के पास एंटीऑक्सीडेंट (प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के साथ बाध्यकारी करने में सक्षम मुफ्त हाइड्रोक्सी और फेनोक्सी रेडिकल्स का उत्पादन) 13 और एंटी-एपोप्टोटिक (कैपैस अभिव्यक्ति और माइटोकॉन्ड्रियल स्थिरीकरण को रोकते हैं) 14 गतिविधियां जो DW के उपचार के लिए आवश्यक हैं। डॉक्स, कोलेजन (कर्नल), और चिटोसन (सीएस) वाले ढांचे की व्यवस्था चुनी गई थी। कर्नल का चुनाव इस बात पर निर्भर करता है कि यह यांत्रिक शक्ति और ऊतक उत्थान केलिए उत्तरदायी आवश्यक ढांचे को उपलब्ध कराने में मदद करता है । दूसरी ओर, सीएस कई घाव भरने के चरणों से जुड़े ग्लाइकोसामिनोग्लाइकैन के लिए संरचनात्मक रूप से समरूप है। यह भी बताया गया है कि सीएस के पास महत्वपूर्ण एंटी बैक्टीरियल प्रॉपर्टी 15है । इसलिए, DOX के कर्नल/सीएस पाड़ लंबे समय तक सूजन को दबाने के लिए तैयार किया जाता है, डीएम की स्थिति में सफल घाव भरने के लिए मैट्रिक्स गठन का समर्थन करने के बाद ।

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Protocol

प्रदर्शन की गई सभी पशु प्रक्रियाओं को जेएसएस कॉलेज ऑफ फार्मेसी, ऊटी, भारत की संस्थागत पशु नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था ।

1. फ्रीज सुखाने विधि से डॉक्स भरी हुई असुरक्षित मचान की तैयारी

  1. 100 एमएल पानी (जैसे, मिलिपोर) में कर्नल के 1.2 ग्राम जोड़ें और सूजन के लिए अलग रखें।
  2. 2000 आरपीएम पर सूजन कोल फैलाव रात भर हिलाओ कर्नल के पूर्ण विघटन सुनिश्चित करने के लिए।
  3. 1% एसिटिक एसिड के 100 मिलीएल में लगभग 0.8 ग्राम सीएस को भंग करके सीएस समाधान तैयार करें।
  4. एक समान फैलाव सुनिश्चित करने के लिए 2000 आरपीएम पर रात भर सीएस समाधान हिलाओ।
  5. मिक्स DOX (1% w/v), सीएस समाधान के बाद, कर्नल समाधान के लिए, और 30 मिनट के लिए हलचल ।
  6. पर्टिकुलेट मैटर को हटाने के लिए मलमल के कपड़े का उपयोग करके प्राप्त भौतिक मिश्रण को फ़िल्टर करें।
  7. लगभग 24 घंटे के लिए -85 डिग्री सेल्सियस ± 4 डिग्री सेल्सियस पर प्राप्त फिलट्रेट को डीप फ्रीज करें।
  8. 72 घंटे के लिए -85 डिग्री सेल्सियस ± 4 डिग्री सेल्सियस पर डीप फ्रीज मिश्रण को Lyophilize करें।
  9. प्राप्त मचानों को आगे के विश्लेषण के लिए एक डेसीकेटर में स्टोर करें 16,17.

2. पाड़ की क्रॉसलिंकिंग

  1. 50 एमएल पानी में एमईएस (0.488 ग्राम) को भंग करें।
  2. 30 मिनट के लिए एमईएस बफर के 20 मिलील में डॉक्स लोडेड पाड़ के 50 मिलीग्राम भिगोएं।
  3. एक अलग बीकर में 0.1264 ग्राम ईडीसी और 0.014 ग्राम एनएचएस के साथ एमईएस बफर के 19.5 एमएल मिलाएं।
  4. क्रॉसलिंकिंग 16प्राप्त करने के लिए पाड़ को बफर मिश्रण में 4 घंटे के लिए विसर्जित करें ।
  5. आगे के मूल्यांकन के लिए डॉक्स लोडेड क्रॉसलिंक्ड (सीएल) और गैर-क्रॉसलिंक्ड मचान (एनसीएल) स्टोर करें।

3. मचान का लक्षण वर्णन

  1. स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम) का उपयोग करके रूपात्मक परीक्षा
    1. एसईएम (1 सेमी × 1 सेमी × 0.5 सेमी) का उपयोग करके रूपात्मक विश्लेषण के लिए मचान की विशेषता है।
    2. सोने की नाजुक परत (~ 150 Å) के साथ पाड़ के पार अनुभाग और बाहरी सतह दाग।
    3. 5 केवी और 10 केवी के एक्सटिटेशन वोल्टेज पर फोटोग्राफिक इमेज कैप्चर करें।
    4. एल्यूमीनियम स्टब्स में नमूनों प्लेस और लगभग 9 वी पर सोने के साथ उन्हें संलग्न।
    5. 10 केवी में बढ़े हुए संकल्प के साथ एसईएम का उपयोग करके पाड़ को मापें।
  2. पॉर्सिटी दृढ़ संकल्प
    1. तरल विस्थापन विधि (इथेनॉल) 18का उपयोग करके मचानों की छिद्रता को मापें।
    2. नीचे दिए गए फार्मूले का उपयोग करके मचानों की छिद्रता की गणना करें।
      Equation 1
      डब्ल्यूडब्ल्यू = पाड़ का गीला वजन
      डब्ल्यूडी = पाड़ का सूखा वजन
      डब्ल्यूवी = पाड़ की मात्रा
  3. जल अवशोषण क्षमता का निर्धारण
    1. पाड़ के सूखे वजन को मापें।
    2. फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) पीएच 7.4 में 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर तौला पाड़ इनक्यूबेट।
    3. फिल्टर पेपर का उपयोग कर पाड़ पर अतिरिक्त पीबीएस निकालें।
    4. नीचे दिए गए फार्मूले का उपयोग करके जल अवशोषण क्षमता को मापें 17.
      Equation 2
      डब्ल्यूएस = पानी अवशोषण का प्रतिशत
      डब्ल्यू1= पाड़ का गीला वजन
      W0= पाड़ का शुष्क वजन
  4. पीपाड़ क्षरण
    1. पीएचएसोज़िम युक्त पीएच 7.4 के पीबीएस में 7 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर पाड़ (1 सेमी x 1 सेमी) को इनक्यूबेट करें।
    2. सतह पर किसी भी पालन आयनों को हटाने के लिए पाड़ धोएं।
    3. धोया पाड़ 17सूखी फ्रीज ।
    4. फार्मूले का उपयोग कर गिरावट की दर की गणना करें।
      Equation 3
      Ww = पाड़ का प्रारंभिक वजन
      Wd = फ्रीज सुखाने के बाद पाड़ का वजन
  5. इन विट्रो रिलीज अध्ययन
    1. डायलिसिस बोरी विधि का उपयोग कर पाड़ से DOX के रिलीज व्यवहार का निर्धारण करें।
    2. नकली घाव तरल पदार्थ (पीएच 7.4) के कुछ मिलीलीटर में पाड़ को तितर-बितर करें और इसे डायलिसिस बैग में स्थानांतरित करें।
    3. झिल्ली बैग के सिरों को कसकर बंद करें और नकली घाव तरल पदार्थ समाधान के 500 एमएल में विसर्जित करें।
    4. 200-250 आरपीएम पर डायलिसिस बैग युक्त घाव तरल पदार्थ समाधान हिलाओ।
    5. सुपरनेट समाधान को इकट्ठा करें और निश्चित समय अंतराल पर इसे समान मात्रा में ताजा बफर समाधान के साथ बदलें।
    6. 240 एनएम पर यूवी-दृश्यमान स्पेक्ट्रोमीटर का उपयोग करके सुपरनैंट समाधान में मचान से डीओएक्स रिलीज का प्रतिशत निर्धारित करें।

4. इन विट्रो एंटी बैक्टीरियल अध्ययन

  1. माइक्रो-शोरबा कमजोर पड़ने की विधि का उपयोग करके एस ऑरियस, एस एपिडर्मिस,ई कोलाई, पी एरुगिनोसा के खिलाफ सीएल और डॉक्स-सीएल मचानों की न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता (एमआईसी) निर्धारित करें।
  2. 0.5 मैकफार्लैंड टर्बिडिटी प्राप्त करने के लिए 1:1000 के अनुपात में म्यूलर-हिंटन शोरबा का उपयोग करके बैक्टीरियल संस्कृतियों को तैयार करें।
  3. हाइपरग्लेशन 19,20 के लिए बैक्टीरियल संस्कृतियों में डी-ग्लूकोज(800मिलीग्राम/डीएल) जोड़ें।
  4. कीमा और डीएमओ (नकारात्मक नियंत्रण) में सीएल और DOX-सीएल घुलनशील।
  5. 96 अच्छी प्लेट में हाइपरग्लिकेटेड बैक्टीरियल सस्पेंशन (100 माइक्रोन) और परीक्षण नमूनों (100 माइक्रोन ऑफ पाड़ समाधान) को क्रमिक रूप से पतला करें।
  6. 20-24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर प्लेट को इनक्यूबेट करें।
  7. 600 एनएम 21की तरंगदैर्ध्य में अवशोषण को रिकॉर्ड करें .

5. इन विट्रो बायोकम्पिटिबिलिटी अध्ययन

  1. एमटीटी [(3-(4, 5 डिमिथाइल थियाजोल-2 आईएल) -2, 5-डिफेनिल टेट्राजोलियम ब्रोमाइड का उपयोग करके तैयार मचानों की जैव अनुकूलता का मूल्यांकन करें]] परख।
  2. मानक आयाम के मचान को स्टरलाइज करें और उन्हें 24 अच्छी तरह से प्लेटों में रखें।
  3. 24 अच्छी तरह से थाली में 3T3-L1 कोशिकाओं को जोड़ें और ७२ घंटे के लिए इनक्यूबेटेड ।

6. वीवो पशु अध्ययन में

  1. डीएम का शामिल होना और एक्सिशन घाव
    1. जानवर को दो सप्ताह तक उच्च वसा वाले आहार के साथ खिलाएं और टाइप-2 मधुमेह के प्रेरण के लिए साइट्रेट बफर समाधान में स्ट्रेप्टोज़ोसिन (50 मिलीग्राम/किलोग्राम शरीर के वजन) की एक खुराक को इंटर एल्बिनो चूहों (180-200 ग्राम) में प्रशासित करें।
    2. अध्ययन के लिए 250 मिलीग्राम/डीएल के निरंतर रक्त ग्लूकोज वाले जानवरों का चयन करें।
    3. एक्सिशन घावों को शामिल करने के लिए चयनित जानवरों को यादृच्छिक करें।
    4. डायथाइल ईथर का उपयोग करके मधुमेह चूहों को एनेस्थेटाइज करें (5 एमएल को पहले से संतृप्त संज्ञाहरण कक्ष में जोड़ा गया था) और पंजे की चुटकी विधि और म्यूकस झिल्ली रंग का उपयोग करने की पुष्टि करें।
    5. एक एसेप्टिक ट्रिमर और ब्लेड (A40) का उपयोग करके पृष्ठीय क्षेत्र (पृष्ठीय छाती, काठ क्षेत्र) दाढ़ी बनाएं।
    6. एक शराबी झाड़ू के साथ मुंडा क्षेत्र बंध्याकरण।
    7. एक खुले घाव बनाने के लिए मुंडा क्षेत्र पर एक एसेप्टिक सर्जिकल A40 ब्लेड के साथ त्वचा (2 x 2 सेमी2 और 1 मिमी की गहराई) को उत्पादित करें।
    8. जानवरों को तीन समूहों (समूह 1- रोग नियंत्रण (नियंत्रण), समूह 2- सीएल पाड़ (प्लेसबो), समूह 3- डॉक्स सीएल पाड़ में विभाजित करें, प्रत्येक समूह जिसमें 6 चूहे होते हैं।
    9. सर्जिकल टेप का उपयोग कर सीएल और DOX सीएल मचान प्रत्यय और 21 दिनों के लिए बाँझ धुंध के साथ नियंत्रण समूह को कवर ।
    10. एक बाँझ OHP शीट पर घाव क्षेत्र का पता लगाने और सभी समूहों के लिए 0, 7, 14, और 21 दिनों पर ग्रिड विधि का उपयोग कर घाव के प्रतिशत में कमी को मापने ।
    11. नीचे दिए गए फार्मूले का उपयोग कर प्रतिशत घाव में कमी की गणना करें।
      Equation 4

7. हिस्टोपैथोलॉजिकल अध्ययन

  1. 7, 14 और 21 दिनों में चंगा घाव क्षेत्र को अलग करें, फॉर्मेलिन समाधान (10%) में स्टोर करें।
  2. 6 माइक्रोन की मोटाई प्राप्त करने के लिए एक माइक्रोटॉम का उपयोग कर ऊतकों अनुभाग।
  3. हेमैटोक्सीलिन और 17का उपयोग करके ग्लास स्लाइड और दाग पर वर्गों को माउंट करें।
  4. डिजिटल माइक्रोस्कोप का उपयोग करके 40x आवर्धन के तहत छवियों को कैप्चर करें।

8. हाइड्रोक्सीप्रोलाइन अनुमान

  1. मूल्यांकन के लिए 0, 7, 14 और 21 दिनों पर चंगा घाव क्षेत्र को अलग करें।
  2. रेड्डी जी एट अल द्वारा वर्णित प्रक्रिया का उपयोग करके हाइड्रोक्सीप्रोलाइन सामग्री का अनुमान लगाएं।

9. एलिसा टेस्ट

  1. निर्माता के निर्देशों के अनुसार एलिसा किट का उपयोग करके एमएमपी-9 के स्तर का अनुमान लगाएं।
  2. 21 दिन पर चंगा घाव क्षेत्र से ऊतक के नमूनों को अलग करें और एक ऊतक समरूप का उपयोग करके कीमा।
  3. अपकेंद्रित्र प्राप्त समरूप और अधिनाट इकट्ठा।
  4. परख बफर का उपयोग कर 100 गुना पर सुपरनेटेंट पतला करें।
  5. एक ाधिक प्लेट रीडर का उपयोग कर प्लेट स्कैन करें।

10. सांख्यिकीय विश्लेषण

  1. प्राप्त परिणामों का प्रतिनिधित्व करता है के रूप में मतलब ± एसडी ।
  2. ग्राफ पैड चश्मे v5.01 का उपयोग कर सांख्यिकीय विश्लेषण प्रदर्शन करते हैं।
  3. विचरण (ANOVA) और डननेट के पोस्ट हॉक परीक्षण के एक तरह से विश्लेषण का उपयोग कर सांख्यिकीय महत्व प्राप्त करें ।
  4. पी≤0.05 के साथ मूल्यों को महत्वपूर्ण के रूप में विचार करें।

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Representative Results

डॉक्स लोडेड एनसीएल और सीएल पाड़ का लक्षण वर्णन
विजुअल एग्जीबिशन पर एनसीएल और सीएल पाड़ में क्रीम रंग की पाई गई। इसके अलावा, दोनों मचान शारीरिक रूप से जांच किए जाने पर स्पंज, कठोर और अलाकीय की तरह दिखाई देते हैं। एनसीएल और सीएल मचानों की एसईएम छवियां चित्र 1में दिखाई गई हैं । आंकड़े से यह स्पष्ट था कि इंटरमॉलिक्यूलर लिंकेज बनाकर क्रॉसलिंकिंग के बाद पोर के आकार में कमी आई थी । इसके अलावा एनसीएल और सीएल पाड़ों में क्रमश: 92.3±4.21 और 71.35±2.65 पाया गया। एनसीएल और सीएल मचानों के जल अवशोषण का प्रतिशत 24 घंटे के अंतराल पर 750±11.4% और 492±8.66% था।

इसके अलावा, पीएच 7.4 के नकली घाव तरल पदार्थ में सात दिनों तक बायोडिग्रेडेशन अध्ययन किया गया, जिसमें lysozymes शामिल थे। एनसीएल पाड़ ने शुरू में पहले तीन दिनों में गिरावट की तेज दर का प्रदर्शन किया और लगातार चार दिनों तक धीरे-धीरे कमी आई । वहीं दूसरी ओर सीएल पाड़ में लंबे समय तक दुर्गति दिखाई दी। पाड़ के क्रॉसलिंकिंग ने यांत्रिक गुणों और नेटवर्क की ताकत को बढ़ाया, जिसके परिणामस्वरूप, गिरावट दर में कमी आई, जो गिरावट के बेहतर प्रतिरोध(चित्र 2)का संकेत है।

इसके अलावा एनसीएल और सीएल पाड़ से डीओएक्स की इन विट्रो रिलीज 120 घंटे(चित्रा 3)के लिए की गई। शुरुआती 1 घंटे में एनसीएल पाड़ से 27.92±3.45% डीओएक्स जारी किया गया था, जबकि सीएल पाड़ से केवल 16.54±2.21% डीओएक्स जारी किया गया था। 6 घंटे के बाद, पीड़ से डीओएक्स रिलीज एनसीएल पाड़ में 63.15±3.78% और सीएल पाड़ में 44.43±.3.57% की वृद्धि हुई। 24 घंटे के बाद एनसीएल पाड़ से 70% डॉक्स की रिलीज हुई, जबकि सीएल पाड़ ने 70% डॉक्स को रिलीज करने में 72 घंटे से ज्यादा का समय लिया। प्राप्त परिणामों के आधार पर, डॉक्स लोडेड सीएल पाड़ को आगे के मूल्यांकन के लिए चुना गया था और डॉक्स-सीएल पाड़ के रूप में प्रतिनिधित्व किया गया था। जबकि डॉक्स (प्लेसबो) के बिना सीएल पाड़ को सीएल पाड़ के रूप में नामित किया गया है।

इन विट्रो एंटी बैक्टीरियल अध्ययन
DW के साथ रोगियों को आम तौर पर संक्रमण का अनुभव है कि लंबे समय तक घाव भरने में परिणाम । इस प्रकार, बैक्टीरिया के चयनित पैनल(तालिका 1)के खिलाफ एमआईसी का उपयोग करके उनके एंटी-बैक्टीरियल गतिविधि के लिए तैयार मचानों की जांच की गई। परिणामों से, यह स्पष्ट है कि DOX दोनों एस ऑरियस और एस एपिडर्मिस के खिलाफ <4 μg/mL के एक MIC के साथ निरोधात्मक गतिविधि का प्रदर्शन किया । ई कोलाई और पी एरुगिनोसाके खिलाफ <8 μg/ml और <16 μg/mL का एक एमआईसी मनाया गया । अकेले चिटोसन और सीएल पाड़ निकालने एस ऑरियस (<६४ μg/mL), एस एपिडर्मिस (<६४ μg/mL), ई. कोलाई (<१२८ μg/mL), और पी aeruginosa (<128 μg/mL) जैसे चयनित जीवों के खिलाफ ंयूनतम गतिविधि का प्रदर्शन किया । DOX-CL पाड़ दोनों एस ऑरियस और एस एपिडर्मिसके खिलाफ <2 μg/mL के एक MIC के साथ इसी तरह की निरोधात्मक गतिविधि दिखाया गया है । इसके अलावा, डॉक्स-सीएल पाड़ ने ई. कोलाई और पी एरुगिनोसाके खिलाफ <8 μg/mL के एक एमआईसी के साथ मध्यम गतिविधियों का प्रदर्शन किया ।

इन विट्रो बायोकम्पैटिबिलिटी अध्ययन
एमटीटी परख सीएल और डॉक्स-सीएल मचान की उपस्थिति में 3T3-L1 कोशिकाओं की सेलुलर व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए किया गया था। परिणाम उदाहरण है कि सीएल और DOX-सीएल मचान किसी भी साइटोटॉक्सिकिटी को प्रोत्साहित नहीं किया । इसके अलावा, नियंत्रण की तुलना में पाड़ इलाज समूहों में सेलुलर व्यवहार्यता तुलनात्मक रूप से अधिक थी, जो मचान(चित्रा 4)की उपस्थिति में फाइब्रोब्लास्ट के बढ़े हुए विकास का प्रतिनिधित्व करती थी।

वीवो घाव उपचार अध्ययन में
सभी समूहों में घटने वाले औसत घाव क्षेत्र को 0, 7, 14 और 21(चित्रा 5)पर चित्रमय विधि का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। दृश्य परीक्षा पर, सीएल और DOX-सीएल पाड़ इलाज समूहों में घाव सातवें दिन पर बह से मुक्त थे । साथ ही कंट्रोल ग्रुप में घाव बह रहे थे। 14 दिन, सभी समूहों में एक सूखी पपड़ी मनाई गई; हालांकि, डॉक्स-सीएल पाड़ (89.663%) में घाव संकुचन की एक तेज दर देखी गई। 21 दिन, घाव का 99.9% ठीक हो गया, और डॉक्स-सीएल पाड़ में एक निशान बनाया गया था, जबकि नियंत्रण और सीएल पाड़ उपचार समूहों में आंशिक उपचार देखा गया था।

हिस्टोपैथोलॉजी अध्ययन
दिन में घाव भरने के हिस्टोपैथोलॉजिकल अवलोकन सातवें पोस्टिनिंजरी ने सभी समूहों में घाव के किनारों पर सभी त्वचा परतों के व्यवधान का प्रदर्शन किया। एपिडर्मिस की कोई दृश्यता नहीं थी; हालांकि, नियंत्रण समूह में आंतरायिक मोनोसाइट्स और लिम्फोसाइट्स के साथ प्रमुख न्यूट्रोफिल देखे गए। सीएल पाड़ इलाज समूह में, एपिडर्मिस की मध्यम दृश्यता कुछ न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज के साथ देखी गई थी। जबकि, डॉक्स-सीएल पाड़ उपचारित समूह में, घाव को एपिडर्मिस की एक पतली परत से ढका गया था, जो पुनः रीपिथेलाइजेशन के चरण का प्रतिनिधित्व करता था। ग्रेन्यूलेशन ऊतक के साथ हल्के न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज को भी डॉक्स-सीएल पाड़ उपचारित समूह में अधिक बार देखा गया था।

14 दिन बाद, सभी समूहों में घावों को एपिडर्मिस से ढका हुआ पाया गया । नियंत्रण समूह में, गठित एपिडर्मिस परत को प्रबल न्यूट्रोफिल के साथ एक बहुत पतली परत के रूप में देखा गया था। सीएल पाड़ इलाज समूह में, गठित एपिडर्मिस परत नियंत्रण समूह में उससे मोटा था, साथ ही हल्के बहुनीय बड़े पैमाने पर कोशिकाओं के साथ । डॉक्स-सीएल पाड़ इलाज समूह में, विकसित एपिडर्मिस अन्य समूहों की तुलना में मोटा था, साथ ही बहुतायत से हिस्टिओसाइट्स और विशाल बहुनीय कोशिकाओं के साथ। डॉक्स-सीएल पाड़ इलाज समूह में फाइब्रोब्लास्ट का घना क्षेत्र भी देखा गया।

नियंत्रण समूह में 21 पोस्टिनिंजरी के दिन, कम सूजन का प्रतिनिधित्व करने वाले मैक्रोफेज और हिस्टियोसाइट्स की पुनरावृत्ति के साथ न्यूट्रोफिल की एक प्रमुख संख्या में कमी आई थी। जबकि, सीएल पाड़ उपचारित समूह में, हिस्टोसाइट्स और लिम्फोसाइट्स की एक मध्यम संख्या देखी गई। गठन एपिडर्मिस को नियंत्रण समूह की तुलना में डोक्स-सीएल पाड़ इलाज समूह में काफी मोटा देखा गया था, साथ ही हिस्टिओसाइट्स, लिम्फोसाइट्स और बड़े पैमाने पर बहुनीय कोशिकाओं की एक समृद्ध संख्या थी। डॉक्स-सीएल पाड़ इलाज समूह में, न्यूट्रोफिल गिनती 7 दिन में कमी आई थी । इसके अलावा, 14 और 21(चित्रा 6)पर मैक्रोफेज और उनके रूपात्मक वेरिएंट जैसे बहुनीय विशाल कोशिकाओं और हिस्टियोसाइट्स का जमावड़ा देखा गया ।

हाइड्रोक्सीप्रोलाइन अनुमान
हाइड्रोक्सीप्रोलाइन अनुमान घावों के उपचार में मौजूद कोलेजन की मात्रा का एक अप्रत्यक्ष उपाय है। उच्च हाइड्रोक्सीप्रोलाइन एकाग्रता घाव भरने का एक तेजी से प्रतिशत नामित करती है। जैव रासायनिक परीक्षा में डॉक्स-सीएल पाड़ उपचारित समूह में हाइड्रोक्सीप्रोलाइन की अधिक मात्रा का पता चला और इसके बाद नियंत्रण समूह(चित्रा 7)में उन लोगों की तुलना में सीएल पाड़ का इलाज समूह द्वारा किया गया ।

एमएमपी-9 एलिसा किट का उपयोग कर अनुमान
DOX-सीएल पाड़ इलाज समूह में एमएमपी-9 सामग्री काफी नियंत्रण में उन लोगों की तुलना में कम हो गया था, और सीएल पाड़ समूह का इलाज किया । जबकि सीएल पाड़ इलाज समूह में एमएमपी-9 सामग्री मामूली कम था कि DOX-सीएल पाड़ इलाज समूह की तुलना में, के रूप में चित्रा 8में दिखाया गया है ।

Figure 1
चित्रा 1:डॉक्स लोडेड कर्नल-सीएस पाड़ एकी आकृति विज्ञान) सीएल और बीसे पहले) सीएल निर्धारण के बाद एसईएम द्वारा 50 माइक्रोन की स्केल रेंज में। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्र 2:एनसीएल और सीएल मचानों में लोड किए गए डॉक्स का मैट्रिक्स क्षरण पीबीएस पीएच 7.4 में 1 से 7 दिन तक 37 डिग्री सेल्सियस पर एनसीएल 7 दिनों के लिए धीरे-धीरे अवक्रमित दिखा। इसके विपरीत, सीएल पाड़ क्षरण दर काफी कम एंजाइमेटिक गिरावट के लिए बढ़ी हुई प्रतिरोध को इंगित करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3:एनसीएल पीएच 7.4 में एनसीएल और सीएल मचान से डॉक्स की विट्रो दवा रिलीज प्रोफाइल 37 डिग्री सेल्सियस पर सभी निर्माण में दवा की धीमी रिहाई दिखा जिसके बाद निरंतर रिलीज होती है। डीड (एन= 3) ± मतलब के रूप में व्यक्त किए गए डेटा। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4:3T3-L1 कोशिकाओं सीएल और DOX-सीएल मचान की उपस्थिति में सुसंस्कृत DOX-सीएल पाड़ में प्रतिशत सेल वृद्धि अधिक दिखा समूह सीएल पाड़ इलाज और नियंत्रण के बाद । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्रा 5:(क)नियंत्रण में मतलब घाव क्षेत्र में कमी का प्रतिनिधित्व छवियां, सीएल पाड़ और DOX-सीएल पाड़ दिन 0, 7, 14 और 21 घायल पोस्ट पर समूहों का इलाज किया । (ख)नियंत्रण में मतलब घाव क्षेत्र में कमी का चित्रमय प्रतिनिधित्व, सीएल पाड़ और DOX-सीएल पाड़ दिन 0, 7, 14 और 21 घायल पोस्ट पर समूहों का इलाज किया । डेटा को ± एसडी (n= 6 घाव/समूह) के रूप में व्यक्त किया जाता है । सांख्यिकीय महत्व एक तरह से विचरण के विश्लेषण (ANOVA) द्वारा प्राप्त किया गया था डननेट के बाद तदर्थ परीक्षण के बाद । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 6
चित्रा 6:एसटीजेड में घाव उपचार प्रक्रिया के दौरान हिस्टोलॉजिकल परिवर्तन और उच्च वसा वाले आहार-प्रेरित मधुमेह में विस्टार एल्बिनो चूहा त्वचा में 7, 14 और 21 बिना (नियंत्रण) और उपचार के साथ (सीएल और डॉक्स-सीएल मचान) एक पूर्ण मोटाई उत्तेजना घाव मॉडल में। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 7
चित्रा 7:अप्रत्यक्ष कोलेजन स्तर के अनुमान के संकेतक के रूप में 0, 7, 14 और 21 दिनों में घावों में हाइड्रोक्सीप्रोलाइन सामग्री का प्रतिनिधित्व करने वाला परिणाम। परिणाम μg हाइड्रोक्सीप्रोलाइन/सूखे घाव ऊतक के मिलीग्राम में व्यक्त कर रहे हैं । डेटा मीन±एसडी (n= 6 घाव/समूह) का प्रतिनिधित्व करता है । सांख्यिकीय महत्व एक तरह से विचरण के विश्लेषण (ANOVA) द्वारा प्राप्त किया गया था डननेट के बाद तदर्थ परीक्षण के बाद । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 8
चित्रा 8:एसटीजेड में चंगा घावों से प्राप्त समरूपों में एमएमपी-9 के स्तर का प्रतिनिधित्व करने वाला ग्राफ और 21 दिन में उच्च वसा वाले आहार-प्रेरित मधुमेह चूहा मॉडल। एमएमपी-9 के स्तर एलिसा विश्लेषण का उपयोग कर घाव तरल पदार्थ के १०० गुना aliquots में निर्धारित किया गया । डेटा मीन±एसडी (n=3) का प्रतिनिधित्व करते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

एमआईसी (μg/mL)
परीक्षण नमूना एस ऑरियस एस एपिडर्मिस ई. कोलाई पी एरुगिनोसा
डॉक्स <4 <4 <8 <16
सीएस <64 <64 <128 <128
सीएल पाड़ निकालने <64 <64 <128 <128
DOX-सीएल पाड़ निकालने <2 <2 <4 <4

तालिका 1:बैक्टीरिया के चयनित पैनल के खिलाफ सीएस, डॉक्स, सीएल और डॉक्स-सीएल मचान की न्यूनतम निरोधात्मक एकाग्रता।

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Discussion

इस अध्ययन का मुख्य उद्देश्य चूहों में DW चिकित्सा पर DOX भरी हुई कर्नल-सीएस पाड़ के प्रभाव का निर्धारण करना था। सीएल और एनसीएल को आकृति विज्ञान, सूजन सूचकांक, इन विट्रो रिलीज काइनेटिक्स और बायोकम्पैटिबिलिटी के संदर्भ में तैयार और मूल्यांकन किया गया था।

डॉक्स लोडेड एनसीएल और सीएल पाड़ का लक्षण वर्णन
तैयार मचान आपस में जुड़े छिद्रों से असुरक्षित पाए गए। ये परस्पर छिद्र असुरक्षित, स्पंजी प्रकृति को आश्वस्त करते हैं जो प्रसार और प्रवास के लिए कोशिकाओं को ऑक्सीजन और पोषक तत्वों के उचित प्रसार में मदद करता है, जिससे त्वरित उपचार होता है। यहां, पोर का आकार मुख्य रूप से क्रॉसलिंकिंग पर निर्भर था। पाड़ को क्रॉसलिंक करने के परिणामस्वरूप सीएस और कर्नल के साथ ईडीसी/एनएचएस द्वारा मजबूत इंट्रामोॉलिकुलर इंटरैक्शन बनाकर पोर का आकार कम हुआ, जिससे पाड़ यांत्रिक शक्ति में वृद्धि हुई ।

पोरोसिटी इंडेक्स सापेक्ष घनत्व पर निर्भर करता है, जो स्पंज अकड़ और मात्रा के द्रव्यमान का एक कार्य है। आम तौर पर, पाड़ की मात्रा का सिकुड़न तब होता है जब एक क्रॉसलिंकिंग एजेंट उन्हें एक दूसरे के करीब खींचकर अकड़ की स्थिति को बदल देता है, जिससे पाड़ डेन्सिफिकेशन होता है। हालांकि, कार्बोडिमाइड रसायन के मामले में, पाड़ के द्रव्यमान में वृद्धि अपने अद्वितीय तंत्र के कारण प्रत्याशित नहीं है, यानी, पाड़ में प्रवेश किए बिना आसन्न पेप्टाइड श्रृंखला के कार्बोक्सिलिक (>कूह) और अमीन (-एनएच) समूह का उपयोग करके एडेंट लिंकेज (ओ = सी-एनएच) की शुरुआत। इसके साथ ही, क्रॉसलिंकिंग के दौरान, असंबद्ध बहुलक श्रृंखलाओं के विघटन और प्रवास के कारण मामूली जन हानि हो सकती है। फिर भी, ईडीसी/एनएचएस के साथ पाड़ उपचार के मामले में पाड़ आकृति विज्ञान पर कोई उल्लेखनीय प्रभाव उत्पन्न नहीं हुआ ।

पाड़ की जैविक तरल पदार्थ को अवशोषित करने की क्षमता एक दवा वाहक के रूप में अपनी उपयुक्तता का मूल्यांकन करने में महत्वपूर्ण है । जल अवशोषण संपत्ति न केवल पाड़ के आकार को प्रभावित करती है बल्कि कोशिका विकास को भी प्रभावित करती है। यह देखा गया कि सीएल पाड़ ने एनसीएल पाड़ की तुलना में कम पानी अवशोषण दर दिखाई थी, जिसका कारण पाड़ की क्रॉसलिंकिंग को माना जा सकता है। इसके अलावा, एइंडे लिंकेज गठन की प्रक्रिया में हाइड्रोफिलिक समूहों (>कूह और -एनएच) के (i) नुकसान के कारण क्रॉसलिंकिंग के बाद पाड़ सामग्री की हाइड्रोफिलिटी में काफी कमी आई; 2 नए बांड (ओ=सी-एनएच) के गठन से सूजन का अवरोध। ये परिणाम पहले प्रकाशित रिपोर्ट 23 , 24के साथ अच्छे हैं .

पीएच 7.4 के नकली घाव तरल पदार्थ में इनक्यूबेशन के सात दिनों के बाद अवशिष्ट द्रव्यमान के प्रतिशत की निगरानी करके एक एंजाइमैगत बायोडिग्रेडेशन अध्ययन किया गया था, जिसमें लिसोज्यम शामिल थे। एनसीएल पाड़ ने शुरू में पहले तीन दिनों में गिरावट की तेज दर दिखाई और लगातार चार दिनों तक धीरे-धीरे कमी आई । दूसरी ओर, सीएल पाड़ ने लंबे समय तक गिरावट का प्रदर्शन किया। पाड़ के क्रॉसलिंकिंग ने यांत्रिक गुणों और नेटवर्क की ताकत को बढ़ाया, जिसके परिणामस्वरूप, गिरावट दर में कमी आई, जिससे गिरावट के प्रतिरोध में सुधार हुआ।

सीएल और एनसीएल मचानों के लिए 120 घंटे तक दवा रिलीज अध्ययन किए गए। सामान्य तौर पर, पाड़ की दवा रिलीज गुणांक कम हो जाती है क्योंकि छिद्रों के बीच बढ़े हुए इंटरकनेक्शन और पॉलीपेप्टाइड चेन के बीच कम जगह के कारण क्रॉसलिंकिंग घनत्व बढ़ जाता है। दवा रिलीज गुणांक भी पोरोसिटी इंडेक्स, पानी की मात्रा, सूजन सूचकांक और क्रॉसलिंकिंग की डिग्री से प्रभावित होता है। हमारे अध्ययन में एनसीएल पाड़ से 27.92±3.45% और 63.15±3.78% डॉक्स, जबकि 16.54±2.21% और 44.43±3.57% सीएल पाड़ से क्रमशः 1 घंटे और 6 एच 6 पर जारी किया गया था। 24 घंटे के बाद, एनसीएल पाड़ से 70% DOX की रिहाई हुई, जबकि; सीएल पाड़ ने 70% डॉक्स जारी करने के लिए 72 घंटे से अधिक समय लिया। परिणामों से पता चला है कि पाड़ क्रॉसलिंकिंग ने सूजन अनुपात और पानी की सामग्री को कम करके DOX रिलीज को प्रभावित किया।

इन विट्रो एंटी बैक्टीरियल अध्ययन
डॉक्स-सीएल पाड़ निकालने ने ग्राम-सकारात्मक जीवों के खिलाफ उच्च निरोधात्मक गतिविधि (एमआईसी) का प्रदर्शन किया। डॉक्स-सीएल पाड़ निकालने की उच्च गतिविधि नमूने की बढ़ी हुई हाइड्रोफोबिकिटी के कारण हो सकती है। हालांकि, DOX-CL पाड़ निकालने ग्राम नकारात्मक जीवों के खिलाफ ंयूनतम गतिविधि का प्रदर्शन किया, शायद सेल दीवार प्रवेश विफलता के कारण । इसके अलावा डॉक्स-सीएल का एमआईसी सीएस, सीएल पाड़ और डीओएक्स नमूनों से तुलनात्मक रूप से अधिक था, जिसका कारण डॉक्स-सीएल एक्सट्रैक्ट में डॉक्स और सीएस की सहक्रियात्मक गतिविधि हो सकती है।

इन विट्रो बायोकम्पैटिबिलिटी अध्ययन
इन विट्रो बायोकंप्मेंटेबिलिटी अध्ययन फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं (3T3-L1) पर किया गया था। फाइब्रोब्लास्ट ईसीएम और प्रोटीन के उत्पादन के लिए जिम्मेदार हैं। इसके अलावा, वे घाव भरने के लिए आवश्यक ढांचे के गठन को बढ़ाकर संरचनात्मक अखंडता को बनाए रखने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। परिणाम बताते हैं कि डॉक्स-सीएल पाड़ और सीएल पाड़ ने किसी भी सेल साइटोटॉक्सीसिटी का उत्पादन नहीं किया। हालांकि, दोनों पाड़ समूहों को कोशिका वृद्धि और पाड़ छिद्रों में फाइब्रोब्लास्ट के भेदभाव के साथ देखा गया था, यह दर्शाता है कि तैयार पाड़ जैव संगत थे। दोनों समूहों में बढ़ी हुई कोशिका वृद्धि और भेदभाव मुख्य रूप से पाड़ संरचना में एक बाह अलौकिक मैट्रिक्स के रूप में सीएस और कर्नल की उपस्थिति के कारण थे।

इसके अलावा, सेल विकास और अस्तित्व 25के लिए जिम्मेदार DOX द्वारा PI3K-AKT संकेत की सक्रियता के कारण सीएल पाड़ की तुलना में DOX-सीएल पाड़ समूह के साथ तुलनात्मक रूप से उच्च सेल वृद्धि देखी गई।

वीवो घाव उपचार अध्ययन में
डीएम की विभिन्न जटिलताओं डीएसडब्ल्यू के लंबे समय तक उपचार के लिए जिम्मेदार हैं। चूहों में मधुमेह की स्थिति की नकल करने के लिए, एक उच्च वसा वाला आहार दिया गया था, जिसके बाद एसटीजेड का इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन लगाया गया था। मधुमेह की पुष्टि के 2-3 दिनों के बाद, पृष्ठीय छाती क्षेत्र में त्वचा के उत्तेजना द्वारा खुले घाव बनाए गए थे। संबंधित मचानों के साथ 21 दिनों के लिए उपचार किया गया था। घाव क्षेत्र में कमी 0, 7, 14, और 21 दिनों पर सभी समूहों के लिए निर्धारित किया गया था । डॉक्स-सीएल पाड़ के साथ इलाज किए गए मधुमेह चूहों ने सीएल पाड़ समूहों और अनुपचारित समूहों की तुलना में घाव संकुचन की एक महत्वपूर्ण डिग्री का प्रदर्शन किया।

घाव भरने का भड़काऊ चरण कार्यात्मक बाधा गठन के लिए जिम्मेदार है। अगले चरण में, घाव भरने का प्रसार चरण घाव की देखभाल में ध्यान आकर्षित करता है, जिसमें 43% घाव क्षेत्र में कमी डॉक्स-सीएल पाड़ समूह के साथ देखी गई थी। इसकी तुलना में, सीएल पाड़ और अनुपचारित समूहों के साथ क्रमशः 7 दिन में केवल 23% और 7% देखा गया । छवियों(चित्रा 5)से, भड़काऊ और प्रसारीय चरण पूरा होने के बाद घाव का संकुचन शुरू किया गया था। DOX-सीएल पाड़ समूह ने DOX की उपस्थिति के कारण महत्वपूर्ण घाव संकुचन का प्रदर्शन किया, जो विरोधी भड़काऊ और विरोधी संक्रमण प्रभावों के लिए जिम्मेदार है। इसके अलावा, पाड़ में कर्नल और सीएस ने कोशिका प्रसार, भेदभाव और माइग्रेशन में मदद की जिसके परिणामस्वरूप 21 दिनों में डीएसडब्ल्यू चिकित्सा का 99% होता है।

अनुपचारित एक्ससियोनल घावों ने 7 दिन की पोस्टिनिंजरी पर न्यूट्रोफिल, लिम्फोसाइट्स और मोनोसाइट्स दिखाए। जैसा कि पहले कहा गया है, घाव भरने के प्रारंभिक चरण में घाव डिब्राइडमेंट में न्यूट्रोफिल सहायता करते हैं। इसके अलावा, न्यूट्रोफिल की अधिकता सामान्य ऊतक को नुकसान पहुंचाकर उपचार प्रक्रिया को नकारात्मक रूप से प्रभावित कर सकती है। Dovi et al., न्यूट्रोफिल की एक ंयूनतम संख्या के रूप में 26फिर से epithelialization प्रक्रिया को तेज ।

इसके अलावा, डीओएक्स-सीएल पाड़ उपचारित समूह में मैक्रोफेज, हिस्टियोसाइट्स और बड़े पैमाने पर बहुनीय कोशिकाओं ने क्षतिग्रस्त कोशिकाओं की मरम्मत और कर्नल संश्लेषण को बढ़ावा देकर त्वरित घाव भरने के लिए पर्यावरण को इष्ट किया। इसके अलावा, ऊतक के साथ कर्नल समामेलन सभी समूहों में हाइड्रोक्सीप्रोलाइन स्तर का उपयोग कर निर्धारित किया गया था । हालांकि, अनुपचारित और सीएल पाड़ इलाज समूह की तुलना में DOX-सीएल पाड़ इलाज समूह के साथ तुलनात्मक रूप से उच्च हाइड्रोक्सीप्रोलाइन स्तर देखा गया । जैसा कि साहित्य में कहा गया है, मधुमेह की स्थिति में लंबे समय तक भड़काऊ चरण उपचार के अन्य चरणों में बाधा डालता है। DOX-सीएल पाड़ में घाव संकुचन की तेज दर को DOX की विरोधी भड़काऊ संपत्ति के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है, जिसके परिणामस्वरूप उचित समय चरण में होने वाले घाव के आगे के चरणों में त्वरित घाव भरने के लिए अग्रणी होता है।

एलिसा परीक्षण का उपयोग करके एमएमपी-9 के स्तर के जैव रासायनिक अनुमान से पता चलता है कि DOX-सीएल पाड़ इलाज समूह सीएल पाड़ इलाज और अनुपचारित समूहों में उन लोगों के साथ तुलना में एमएमपी-9 के कम स्तर का प्रदर्शन किया । साहित्य के अनुसार, मैट्रिक्स क्षरण के लिए जिम्मेदार एमएमपी-9 के स्तर में वृद्धि हुई है, जो बदले में घाव भरने की प्रक्रिया को बढ़ाता है। DOX, एक विरोधी भड़काऊ एजेंट, एमएमपी-9 के स्तर को बाधित करता है, जिसे कर्नल टूटने को रोकने का कारण माना जाता है, जिसके परिणामस्वरूप त्वरित DW उपचार होता है। ये परिणाम लिंडेमैन एट अल, 2009 और झांग एट अल, 2014 27, 28द्वारा पहले प्रकाशित अध्ययनों से सहमत हैं।

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Disclosures

लेखकों की घोषणा है कि वे कोई प्रतिस्पर्धी वित्तीय हितों की है ।

Acknowledgments

लेखक डॉ आशीष डी वाधवानी का धन्यवाद करते हैं। (इन विट्रो सेल व्यवहार्यता अध्ययन में सहायता के लिए सहायक प्रोफेसर और विभागाध्यक्ष, फार्मास्यूटिकल जैव प्रौद्योगिकी विभाग, जेएसएस कॉलेज ऑफ फार्मेसी, ऊटी, भारत) ।

लेखक हमारे विभाग का समर्थन करने के लिए विज्ञान और प्रौद्योगिकी विभाग-विश्वविद्यालयों और उच्च शिक्षण संस्थानों (डीएसटी-मुट्ठी), नई दिल्ली में विज्ञान और प्रौद्योगिकी बुनियादी ढांचे के सुधार के लिए निधि का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं ।

लेखक भी श्री संजू का शुक्रिया अदा करना पसंद करते हैं। एस और श्री श्रीराम। वीडियो शूट में समर्थन के लिए नरूकाता एम Pharm छात्रों ।

इस शोध को जेएसएस एकेडमी ऑफ हायर एजुकेशन एंड रिसर्च (जेएसएसएईआर) ने समर्थन दिया ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1-ethyl-(3-3-dimethyl aminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC) Merck Millipore, Mumbai, India E7750
2-(N-morpholino) ethane sulfonic acid (MES) Merck Millipore, Mumbai, India 137074
3-(4, 5 dimethyl thiazole-2 yl) -2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) Thermo Fisher, Mumbai, India M6494
Deep freezer verticle Labline Instruments, Kochi, India
Dialysis sack Merck Millipore, Mumbai, India D6191-Avg. flat width 25 mm (1.0 in.), MWCO 12,000 Da
Doxycycline Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India D9891
Elisa kit R&D Systems RMP900
Escherichia coli (E. coli) National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India NCIM 2567
Ethanol Merck Millipore, Mumbai, India 100983
Lyophilizer-SZ042 Sub-Zero lab instruments, Chennai, India
Mechanical Stirrer-RQ-122/D Remi laboratory instruments, Mumbai, India
Medium molecular weight Chitosan Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India 18824
Microtome-RM2135 Leica, U.K
Mouse embryonic fibroblast cells (3T3-L1) National Centre for Cell Sciences, Pune, India
Multiple plate reader -Inifinte M200 Pro Tecan Instruments, Switzerland
N-hydroxy succinimide (NHS) Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India 130672
Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India NCIM 2036
Scanning Electron Microscopy (SEM)-S-4800 Hitachi, India
Sodium hydroxide (NaOH) pellets Qualigen fine chemicals, Mumbai, India Q27815
Staphylococcus aureus (S. aureus) National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India NCIM 5022
Staphylococcus epidermis (S. epidermis) National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, India NCIM 5270
Streptozotocin (STZ) Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India 14653
Type-1 rat Collagen Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India C7661
Ultraviolet–visible spectroscopy-1700 Shimadzu

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