전체 Plasmids의 수제 사이트 감독 돌연변이 유발
Summary
전체 plasmids의 사이트 이동 돌연변이 유발은 원래 플라스미드의 약간 다른 유사 콘텐츠를 작성하는 간단한 방법입니다. 여기서 우리는 플라스미드를 사용 표준 시약에 기본 재료를 소개하는 쉽고 비용 효과적인 방법을 보여줍니다.
Abstract
전체 plasmids의 사이트 이동 돌연변이 유발은 원래 플라스미드의 약간 다른 유사 콘텐츠를 작성하는 간단한 방법입니다. 이 방법으로 복제된 대상 유전자 직접 플라스미드로 몇 기지의 대체, 삭제 또는 삽입하여 변경할 수 있습니다. 그것은 단순히이 아닌 PCR 기반 thermocycling 반응에서 전체 플라스미드를 확장하여 사용할 수 있습니다. 반응 동안 원하는 돌연변이를 운반 mutagenic primers는, 새로 합성 플라스미드에 통합되어 있습니다. 이 비디오 튜토리얼에서 우리는 플라스미드에 기본 재료를 소개하는 쉽고 비용 효과적인 방법을 보여줍니다. 프로토콜은 표준 시약 작동 종종 매우 비싼 상용 키트에서 독립적입니다. 이 프로토콜을 적용하는 것은 그것이 상업 키트의 일부를 사용하는 비용은 무엇 여덟째에 대한 반응의 총 비용을 줄일 수 있습니다. 이 비디오에서 우리는 또한 과정에서 중요한 단계에 대해 언급하고 mutagenic primers를 디자인하는 방법에 대한 자세한 지침을 제공합니다.
Protocol
Discussion
사이트 감독 돌연변이 유발이 플라스미드에 의해 운반 유전자를 공격하는 빠른 방법을 제공하는 돌연변이 유발 – 방법입니다. 전체 반응은 하루에 할 수 있습니다. 이 방법을 사용하면, 그것은 단지 원하는 변이를 가지고 무료 primers 한 쌍의 등 Pfu – 효소로 교정 효소가 필요합니다. 새로 합성된 플라스미드는 제한 효소 DpnI와 반응을 소화하여 부모의 플라스미드 분리 수 있습니다. 이 효소는 methyla…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pfu polymerase (recombinant or native) | fermentas | EP0571 or EP0501 | ||
| dNTP mix 10 mM | fermentas | R0191 | ||
| DpnI or DpnI Fast digest | fermentas | ER1701 | ||
| primers | invitrogen | desalted |
Referenzen
- Papworth, C., Bauer, J. C., Braman, J., Wright, D. A. QuikChange site-directed mutagenesis. Strategies. 9, 3-4 (1996).
