Домашний сайт направленного мутагенеза Всего Плазмиды
Summary
Сайт направленного мутагенеза целых плазмид простой способ создать несколько различных вариантов оригинальных плазмиды. Здесь мы показываем, простой и экономически эффективный способ представить база замен в плазмиду с использованием реагентов стандарта.
Abstract
Сайт направленного мутагенеза целых плазмид простой способ создать несколько различных вариантов оригинальных плазмиды. С помощью этого метода клонировали ген-мишень может быть изменено, замена, удаление или вставка нескольких баз непосредственно в плазмиды. Он работает, просто усиливать все плазмиды, в не на основе ПЦР термоциклирования реакции. Во время реакции мутагенных праймеров, несущих желаемые мутации, интегрированы в вновь синтезированных плазмиды. В этом видео-учебник мы покажем простой и экономически эффективный способ представить база замен в плазмиды. Протокол работает со стандартными реагентами и не зависит от коммерческих наборов, которые часто стоят очень дорого. Применение этого протокола может сократить общую стоимость реакция на восьмом, что это стоит, используя некоторые из коммерческих наборов. В этом видео мы также прокомментировать критические шаги в процессе и дать подробные инструкции о том, как дизайн мутагенных праймеров.
Protocol
Discussion
Сайт направленного мутагенеза является мутагенеза-метод, который обеспечивает быстрый способ мутировать гена несут плазмиды. Всей реакции можно сделать в один день. С помощью этого метода, он должен лишь пару бесплатный грунтовки проведения желаемых мутаций и корректура, такие как по…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pfu polymerase (recombinant or native) | fermentas | EP0571 or EP0501 | ||
| dNTP mix 10 mM | fermentas | R0191 | ||
| DpnI or DpnI Fast digest | fermentas | ER1701 | ||
| primers | invitrogen | desalted |
Referenzen
- Papworth, C., Bauer, J. C., Braman, J., Wright, D. A. QuikChange site-directed mutagenesis. Strategies. 9, 3-4 (1996).
