单克隆抗体的反对消极行政 H。 capsulatum和其他真菌病原体
Summary
C57BL / 6小鼠已被用于研究HC发病机制，并提供最好的模式。我们正在探索这种真菌对体液免疫的潜在利益，并产生了几个单克隆抗体[组蛋白H2B和热休克蛋白60kDa]，我们为他们的腹腔给药后的保护效果测试。
Abstract
使用这种方法的目的是1），以推进我们的能力，以保护个人与抗体或疫苗，以防止或治疗由真菌组织胞浆菌和2）审查致病因素的作用，为治疗目标引起的组织胞浆菌病。产生单克隆抗体，免疫小鼠的免疫反应是采用固相酶联免疫吸附在我们的实验室开发的系统进行评估，并选择隔离的脾细胞与杂交瘤细胞融合的最好的响应者小鼠。 C57BL / 6小鼠已被广泛用于研究H。 capsulatum的发病机制，并提供获得所需的数据的最佳模式。为了评估在感染的单克隆抗体的作用，小鼠腹腔要么单抗管理到 H capsulatum或亚型匹配控制单克隆抗体，然后感染要么静脉（IV），腹腔（IP），或滴鼻（中）路线。在科学文献中，单克隆抗体在小鼠体内的真菌感染疗效依赖对死亡率作为终点，在殖民地成蛋白单位（CFU）在较早的时间点评估一起。生存（死亡时间）的研究是必要的，因为他们最能代表人类疾病。因此，我们干预的疗效不会充分地建立无生存曲线。这也是真正建立疫苗疗效或毒力突变体的测试。随着组织胞浆菌病，老鼠经常去充满活力，以死了几个小时。最初可能会干预，如管理一个MAB能力保护的动物疾病，但疾病的复发这不会在短期CFU实验实现。除了生存和真菌的负担分析，我们考察感染（蜂窝招聘，组织学，细胞因子反应）的炎症反应。生存/死亡实验，小鼠被感染，至少每天两次监测发病的迹象。为了评估真菌的负担，组织病理学和细胞因子的反应，小鼠在感染后的不同时期，实施安乐死。根据阿尔伯特爱因斯坦医学院的动物实验研究所的指引，进行动物实验。
Protocol
Discussion
这里介绍的协议表明，单克隆抗体的到 H capsulatum可以修改实验小鼠组织胞浆菌病的过程中。病原菌的细胞表面抗原的单克隆抗体可以修改主机和病原体之间的相互作用过程中发生的复杂的动态。这项研究建立了单克隆抗体介导腹腔注射时的一个致命性组织胞浆菌病的小鼠模型的保护，并建议候选蛋白疫苗的开发，如H2B，中号抗原（表面过氧化氢酶）（3）和HSP60。管理HC HSP60和H2B保护?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of Material | Company |
|---|---|
| Biological safety cabinet (BSL2) | |
| 15 mL conical tubes | Falcon, BD |
| HAM F-12 medium | Gibco |
| 37°C shaker | |
| Vortex | |
| 50 mL conical tubes | Falcon, BD |
| 26G1/2 needle | BD |
| 10 mL syringe | BD |
| 250 mL flasks | |
| FPLC (Fast protein liquid chromatography) system | GE Helthcare |
| ELISA reader | BioTek |
| Anesthesia (ketamine and Xylazine) | |
| Column stands | |
| Nylon string | |
| Heat lamp | |
| 70μm cell strainers | Falcon, BD |
| BHI agar plates | Gibco |
Referenzen
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