Administração passiva de anticorpos monoclonais contra H. capsulatum E outros patógenos fúngicos
Summary
Camundongos C57BL / 6 foram usados para estudar a patogênese Hc e fornecer o melhor modelo. Estamos explorando os benefícios potenciais da imunidade humoral contra este fungo e gerou várias mAbs [a histona H2B e um calor 60kDa proteína de choque] que testamos para sua eficácia protectora após a administração intraperitoneal.
Abstract
O objetivo do uso desta metodologia é 1) para avançar a nossa capacidade de proteger os indivíduos com anticorpo ou vacina para prevenir ou tratar histoplasmose causada pelo fungo Histoplasma capsulatum e 2) para examinar o papel de fatores de virulência como alvo para a terapia. Para gerar mAbs, os camundongos são imunizados, as respostas imunes são avaliados através de um sistema de ELISA em fase sólida desenvolvido em nosso laboratório, ea melhor resposta ratos são selecionados para isolamento de esplenócitos para a fusão com células de hibridoma. Camundongos C57BL / 6 têm sido amplamente utilizados para estudar H. patogênese capsulatum e fornecer o melhor modelo para a obtenção dos dados necessários. A fim de avaliar o papel do mAbs em infecção, os ratos são administrados por via intraperitoneal com um mAb para H. capsulatum ou combinados isotipo controle mAb e infectados por um ou outro intravenosa (iv), intraperitoneal (ip), ou intranasal (in) rotas. Na literatura científica, a eficácia de mAbs para infecções fúngicas em camundongos depende de mortalidade como um ponto final, em conjunto com unidades formadoras de colónias formin (CFU) avaliações em momentos anteriores. Sobrevida (tempo de morte) são necessários estudos em que melhor representam a doença humana. Assim, a eficácia da nossa intervenção não ser adequadamente estabelecida sem curvas de sobrevivência. Isto também é verdade para estabelecer a eficácia da vacina ou teste de mutantes para a virulência. Com histoplasmose, os ratos vão frequentemente de ser energético para mortos durante várias horas. A capacidade de uma intervenção como a administração de um mAb podem, inicialmente, proteger um animal de doença, mas a doença pode recaída que não seria realizado em experimentos de curta UFC. Além de sobrevivência e ensaios de carga fúngica, examinamos as respostas inflamatórias à infecção (histologia, recrutamento celular, as respostas de citocinas). Para a sobrevivência / hora para experiências de morte, os camundongos são infectados e monitoradas pelo menos duas vezes por dia para sinais de morbidade. Para avaliar a carga fúngica, histopatologia, e as respostas de citocinas, os ratos são sacrificados em vários momentos após a infecção. Experiências com animais são realizadas de acordo com as diretrizes do Instituto de Estudos Animal do Albert Einstein College of Medicine.
Protocol
Discussion
O protocolo aqui apresentado demonstra que mAb de H. capsulatum pode modificar o curso de histoplasmose murina experimental. MAbs aos antígenos de superfície celular de patógenos pode modificar a dinâmica complexa que ocorrem durante a interação entre um host e um patógeno. Este estudo estabelece que mAbs mediar proteção em um modelo murino de histoplasmose letal quando injetada por via intraperitoneal, e sugere proteínas candidato para o desenvolvimento de vacinas, como H2B, M antígeno (superfície …
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of Material | Company |
|---|---|
| Biological safety cabinet (BSL2) | |
| 15 mL conical tubes | Falcon, BD |
| HAM F-12 medium | Gibco |
| 37°C shaker | |
| Vortex | |
| 50 mL conical tubes | Falcon, BD |
| 26G1/2 needle | BD |
| 10 mL syringe | BD |
| 250 mL flasks | |
| FPLC (Fast protein liquid chromatography) system | GE Helthcare |
| ELISA reader | BioTek |
| Anesthesia (ketamine and Xylazine) | |
| Column stands | |
| Nylon string | |
| Heat lamp | |
| 70μm cell strainers | Falcon, BD |
| BHI agar plates | Gibco |
Referenzen
- Casadevall, A., Mukherjee, J., Scharff, M. D. Monoclonal antibody based ELISAs for cryptococcal polysaccharide. J. Immunol. Methods. 154, 27-35 (1992).
- Guimaraes, A. J., Frases, S., Gomez, F. J., Zancope-Oliveira, R. M., Nosanchuk, J. D. Monoclonal antibodies to heat shock protein 60 alter the pathogenesis of Histoplasma capsulatum. Infect Immun 77. , 1357-1367 (2009).
- Guimaraes, A. J., Hamilton, A. J., de M Guedes, H. L., Nosanchuk, J. D., Zancope-Oliveira, R. M. Biological function and molecular mapping of M antigen in yeast phase of Histoplasma capsulatum. PLoS One. 3, e3449-e3449 (2008).
- Nosanchuk, J. D. Protective antibodies and endemic dimorphic fungi. Curr Mol Med. 5, 435-442 (2005).
- Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Jr, D. e. e. p. e., &, G. S., Casadevall, A. Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum. J Clin Invest. 112, 1164-1175 (2003).
- Nosanchuk, J. D., Steenbergen, J. N., Shi, L., Deepe, G. S., , ., Casadevall, A. Antibodies to a cell surface histone-like protein protect against Histoplasma capsulatum. J. Clin. Invest. 112, 1164-1175 (2003).
- Smith, W. Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics. Lab Anim. 27, 30-39 (1993).
