に対するモノクローナル抗体の受動的な管理 H. capsulatumとその他の真菌病原体
Summary
C57BL / 6マウスがHcの病因を研究し、最適なモデルを提供するために使用されています。我々は、この菌に対する体液性免疫の潜在的な利点を模索し、[ヒストンH2Bと熱ショック蛋白質の60kDaへ]いくつかのモノクローナル抗体を生成している我々は腹腔内投与後、その予防効果を試験すること。
Abstract
この方法論の利用目的は、抗体または真菌ヒストプラスマカプスラーツム 、2）治療の標的として、病原性因子の役割を検討することによって引き起こされるヒストプラズマ症を予防または治療用ワクチンを持つ個人を保護するために私たちの能力を前進させる）1です。モノクローナル抗体を生成するには、マウスを免疫し、免疫応答は、私たちの研究室で開発された固相ELISAシステムを用いて評価され、最高の応答者のマウスハイブリドーマ細胞との融合の脾細胞の単離のために選択されています。 C57BL / 6マウスは広範囲にH.を研究するために使用されているcapsulatum病因と必要なデータを取得するための最良のモデルを提供しています。感染症におけるモノクローナル抗体の役割を評価するためには、マウス腹腔内には、H.するモノクローナル抗体のいずれかで投与されていますcapsulatumまたはアイソタイプは、静脈内（IV）、腹腔内（ip）、または鼻腔内（の）路線で対照mAbを一致して感染する。科学文献では、マウスの真菌感染症に対するモノクローナル抗体の有効性は、以前の時点でコロニーのforminユニット（CFU）の評価と組み合わせて、エンドポイントとして死亡率に依存しています。彼らは最高の人間の病気を表すように生存（死亡までの時間）の研究が必要である。したがって、我々の介入の有効性は十分に生存曲線なしで確立されませんでした。これは、ワクチンや病原性変異体のテストの有効性を確立する場合も同様です。ヒストプラスマ症で、マウスは、しばしば数時間以上の死者への精力的であることから行く。そのような抗体の投与等の介入の容量は最初に病気から動物を保護することがありますが、病気が短いCFUの実験で再発を実現できないということができる。生存と真菌負担アッセイに加えて、我々は感染症（組織、細胞の採用、サイトカイン応答）に炎症反応を調べる。生存/死の実験に時間のために、マウスは罹患率の兆候を少なくとも1日2回感染して監視されます。真菌の負担、組織病理学、およびサイトカイン応答を評価するために、マウスは感染後の様々な時点で安楽死されています。動物実験は医学のアルバートアインシュタイン大学の動物学研究所のガイドラインにしたがって実行されます。
Protocol
Discussion
ここで紹介するプロトコールは、モノクローナル抗体がH.するということを示していますcapsulatumは、実験マウスヒストプラズマ症のコースを変更することができます。病原体の細胞表面抗原に対するモノクローナル抗体は、宿主と病原体の相互作用中に発生する複雑なダイナミクスを変更することができます。本研究では、腹腔内注射したときmAbが致死ヒストプラズマ症のマウ?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of Material | Company |
|---|---|
| Biological safety cabinet (BSL2) | |
| 15 mL conical tubes | Falcon, BD |
| HAM F-12 medium | Gibco |
| 37°C shaker | |
| Vortex | |
| 50 mL conical tubes | Falcon, BD |
| 26G1/2 needle | BD |
| 10 mL syringe | BD |
| 250 mL flasks | |
| FPLC (Fast protein liquid chromatography) system | GE Helthcare |
| ELISA reader | BioTek |
| Anesthesia (ketamine and Xylazine) | |
| Column stands | |
| Nylon string | |
| Heat lamp | |
| 70μm cell strainers | Falcon, BD |
| BHI agar plates | Gibco |
Referenzen
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