반대 단클론 항체의 수동적 관리 H. capsulatum 및 기타 곰팡이 병원균을
Summary
C57BL / 6 마우스는 HC의 pathogenesis을 연구하고 최상의 모델을 제공하는 데 사용되었습니다. 우리는이 곰팡이에 대한 체액성 면역의 가능성 혜택을 탐구하고 [히스톤 H2B와 열 충격 단백질 60kDa로] 여러 mAbs를 생성 우리가 intraperitoneal 행정부 이후에 그들의 보호 효능에 대한 테스트 것을.
Abstract
이 방법론의 사용 목적은 항체 또는 균류 Histoplasma capsulatum 2) 치료 대상으로 독성 요소의 역할을 검토로 인한 히스토플라스마증을 예방하거나 치료를위한 백신과 개인을 보호하기 위해 우리의 역량을 발전) 1입니다. mAbs를 생성하려면, 마우스가 예방 접종되고 면역 반응은 우리의 연구실에서 개발한 고체 위상 엘리사 시스템을 사용 평가하고 있으며, 최고의 응답의 마우스는 하이 브리 도마 세포와 융합을위한 splenocytes의 격리를 위해 선택됩니다. C57BL / 6 생쥐는 광범위 H. 연구하는 데 사용되었습니다 capsulatum pathogenesis하고 필요한 데이터를 얻기위한 최상의 모델을 제공합니다. 감염에 mAbs의 역할을 평가하기 위해서는, 마우스는 H.에 mAb 중과 관리 intraperitoneally 아르 capsulatum 또는 isotype도 정맥 주사 (IV), intraperitoneal (IP) 또는 비강 (인) 노선에 의해 제어 mAb와 일치하고 감염. 과학 문학, 마우스에 곰팡이 감염 mAbs의 효능은 이전 시간 지점에서 콜로니 formin 단위 (CFU) 평가와 함께, 끝점으로 사망률에 의존합니다. 그들은 최고의 인간의 질병을 대표로 생존 (사망 시간) 연구가 필요합니다. 따라서, 우리의 개입의 효능은 충분히 생존 곡선없이 설정할 수 없습니다 것입니다. 이것은 백신이나 독성에 대한 돌연변이 검사의 효능을 수립에도 적용됩니다. 히스토플라스마증와 생쥐는 종종 몇 시간 동안 죽은 활기찬되는 이동합니다. 이러한 mAb의 행정으로 개입의 용량은 처음에는 질병으로부터 동물을 보호 수 있지만, 질병은 짧은 CFU 실험의 재발을 실현 않을 수있는. 생존과 곰팡이 부담 assays 이외에, 우리는 감염 (조직학, 세포 채용, 시토킨 응답)로 염증 반응을 검사합니다. 생존 / 사망 실험 시간은 생쥐는 병적 상태의 흔적에 대해 최소한 회 감염 감시하고 있습니다. 곰팡이 부담, 조직 병리학, 그리고 시토킨 반응을 평가하기 위해, 생쥐는 감염 후 여러 시간에 euthanized 있습니다. 동물 실험은 의학의 알버트 아인슈타인 대학 동물 연구소의 지침에 따라 수행됩니다.
Protocol
Discussion
여기에 제시 프로토콜 mAb는 H.하는 걸 보여줍니다 capsulatum는 실험 murine 히스토플라스마증의 과정을 수정할 수 있습니다. 병원균의 세포 표면 항원에 MAbs는 호스트와 병원체 사이 상호 작용하는 동안 발생하는 복잡한 역학을 수정할 수 있습니다. 이 연구 intraperitoneally을 주입했을 때 mAbs는 치명적인 히스토플라스마증의 murine 모델의 보호를 중재 것을 수립하고는 H2B, M의 항원 (카탈 라 …
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of Material | Company |
|---|---|
| Biological safety cabinet (BSL2) | |
| 15 mL conical tubes | Falcon, BD |
| HAM F-12 medium | Gibco |
| 37°C shaker | |
| Vortex | |
| 50 mL conical tubes | Falcon, BD |
| 26G1/2 needle | BD |
| 10 mL syringe | BD |
| 250 mL flasks | |
| FPLC (Fast protein liquid chromatography) system | GE Helthcare |
| ELISA reader | BioTek |
| Anesthesia (ketamine and Xylazine) | |
| Column stands | |
| Nylon string | |
| Heat lamp | |
| 70μm cell strainers | Falcon, BD |
| BHI agar plates | Gibco |
Referenzen
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