Fabrication de langue matrice extracellulaire et Reconstitution de langue Squamous Cell Carcinoma In Vitro
Summary
Une méthode est indiquée ici, pour la préparation de la matrice extracellulaire de langue (TEM) avec DÉCELLULARISATION efficace. Le TEM peut servir d’échafaudages fonctionnelles pour la reconstruction d’un modèle de carcinome épidermoïde (TSCC) langue maternelle dans des conditions de culture statique ou agité.
Abstract
Afin de construire un modèle efficace et réaliste pour langue épidermoïde carcinome (TSCC) in vitro, les méthodes ont été créés pour produire DECELLULARISE langue matrice extracellulaire (TEM) qui prévoit les échafaudages fonctionnelles TSCC construction. TEM prévoit une niche in vitro la croissance cellulaire, la différenciation et la migration cellulaire. Les microstructures de native matrice extracellulaire (ECM) et des compositions biochimiques conservées dans la matrice DECELLULARISE fournissent des créneaux spécifiques des tissus pour l’ancrage des cellules. La fabrication du TEM peut être réalisée par digestion désoxyribonucléase (DNase) accompagnée d’un graves de prétraitement organique ou inorganique. Ce protocole est facile à utiliser et assure un rendement élevé pour la DÉCELLULARISATION. Le TEM a montré favorable cytocompatibility pour cellules TSCC dans des conditions de culture statique ou agité, qui permet la construction du modèle TSCC. Un self-made bioréacteur a également été utilisé pour la condition remuée persistante pour la culture cellulaire. TSCC reconstituée à l’aide de TEM a montré les caractéristiques et les propriétés ressemblant à l’histopathologie TSCC clinique, ce qui suggère le potentiel en recherche TSCC.
Introduction
La langue a diverses fonctions importantes, comme la déglutition, articulation et dégustation. Ainsi, l’altération de la fonction de la langue a grand impact sur la qualité de vie de patients’1. La malignité plus courante dans la cavité buccale est langue carcinome spinocellulaire (TSCC), qui survient généralement chez les personnes qui boivent de l’alcool ou fument du tabac2.
Ces dernières années, petits progrès ont été accomplis dans la recherche fondamentale sur le TSCC. Le manque de recherche efficace in vitro des modèles reste un des plus grands problèmes. Ainsi, la matrice extracellulaire (ECM) s’avère pour être une solution potentielle. ECM étant une trame réseau complexe composée de constituants de la matrice hautement organisée, échafaudage matières ayant un ECM-comme la structure et la composition seraient compétentes pour la recherche sur le cancer. ECM DECELLULARISE peut parfaitement fournir la niche pour les cellules de la même origine in vitro, qui s’avère pour être le plus important avantage d’ECM.
ECM peut être gardé avec les composants cellulaires étant retirés les tissus par le biais de la DÉCELLULARISATION à l’aide de détergents et enzymes. Divers composants de l’ECM, notamment de collagène, fibronectine et laminine dans la matrice DECELLULARISE prévoient un micro-environnement natif-tissu-comme des cellules, favorisant la survie, la prolifération et la différenciation des cellules3. En outre, l’immunogénicité destinés à la transplantation peut être réduite à un niveau minimal avec l’absence des composantes cellulaires dans l’ECM.
Jusqu’à présent, les méthodes de fabrication chez ECM DECELLULARISE ont été essayées dans différents tissus et organes, tels que le coeur4,5,6,7, foie8,9,10 ,11, poumon12,13,14,15,16,17et rein18,19 , 20. Toutefois, aucune recherche pertinente n’a se trouve sur un travail semblable dans la langue au meilleur de nos connaissances.
Dans cette étude, matrice extracellulaire DECELLULARISE langue (TEM) a été fabriquée tant efficacement et à moindre coût par une série de traitement physique, chimique et enzymatique. Puis le TEM servait à récapituler TSCC in vitro, montrant une simulation appropriée pour TSCC comportement et le développement. TEM a bonne biocompatibilité, mais aussi la capacité de guider les cellules à la niche tissu-spécifique, ce qui indique que TEM mai ont un grand potentiel dans le TSCC recherche3. Le protocole présenté ici offre un choix pour les chercheurs qui étudient sur la pathogénie ou thérapies cliniques du TSCC.
Protocol
Representative Results
Discussion
Un protocole bien établi pour la fabrication de ECM DECELLULARISE devrait conserver la composition ECM native tout en supprimant les composants cellulaires dans les tissus presque complètement21. Malgré les protocoles actuellement déclarés DÉCELLULARISATION nécessitant une perfusion par le système vasculaire pour enlever les matériaux alvéolaires par transport convectif, agitation mécanique a été adoptée ici, connu comme une méthode simple et bon marché traditionnelle<sup class="xr…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs reconnaissent l’appui des subventions de recherche de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (31371390), le programme du projet de développement High-Tech État (2014AA020702) et le programme des sciences de Guangdong et de la technologie (2016B030231001).
Materials
| C57-BL/6J mice | Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center | ||
| Ethanol | Guangzhou Chemical Reagent Factory | HB15-GR-2.5L | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | A501218 | |
| Potassium chloride | Sangon Biotech | A100395 | |
| Dibasic Sodium Phosphate | Guangzhou Chemical Reagent Factory | BE14-GR-500G | |
| Potassium Phosphate Monobasic | Sangon Biotech | A501211 | |
| 1.5 mL EP tube | Axygen | MCT-150-A | |
| Ultra-low temperature freezer | Thermo Fisher Scientific | ||
| 3.5 cm cell culture dish | Thermo Fisher Scientific | 153066 | |
| 6 cm cell culture dish | Greiner | 628160 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | V900502 | |
| Calcium chloride | Sigma-Aldrich | 746495 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 449164 | |
| DNase | Sigma-Aldrich | D5025 | |
| Magnesium sulphate | Sangon Biotech | A601988 | |
| Glucose | Sigma-Aldrich | 158968 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| Ampicillin | Sigma-Aldrich | A9393 | |
| Kanamycin | Sigma-Aldrich | PHR1487 | |
| Surgical suture | Shanghai Jinhuan | ||
| 250 mL wide-mouth bottle | SHUNIU | 1407 | |
| Magnetic stirrer | AS ONE | 1-4602-32 | |
| CO2 incubator | SHEL LAB | SCO5A | |
| 10 mL syringe | Hunan Pingan | ||
| 50 mL centrifuge tube | Greiner | 227270 | |
| Cal27 cell | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Tongue squamous cell carcinoma cell line | |
| U2OS cell | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Human osteosarcoma cell line | |
| DMEM/F12 | Sigma-Aldrich | D0547 | |
| Sodium pyruvate | Sigma-Aldrich | P5280 | |
| Hepes free acid | BBI | A600264 | |
| FBS | Hyclone | SH30084.03 | |
| 4 °C fridge | Haier | ||
| Water purifier | ELGA | ||
| Hemocytometer | BLAU | 717805 |
Referenzen
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