舌の細胞外マトリックスと舌扁平上皮癌生体外の再構成の作製
Summary
効率的な decellularization による舌の細胞外マトリックス (TEM) の準備のためのメソッドを示しています。TEM は、静的または撹拌培養条件下で舌扁平上皮癌 (TSCC) モデルの復興のため、機能的な足場として使用できます。
Abstract
舌扁平上皮細胞癌 (TSCC)の in vitroの効果的かつ現実的なモデルを構築するためにメソッドの作成された食材脱舌細胞外マトリックス (TEM) TSCC 建設のため機能的な足場を提供します。TEM は、細胞の増殖・分化・細胞の生体外でニッチを提供します。ネイティブの細胞外マトリックス (ECM) と decellularized のマトリックスで保持される生化学的組成の微細構造は、セルを固定の組織固有のニッチを提供します。TEM の作製は、深刻な有機または無機の前処理を伴うデオキシリボヌクレアーゼ (DNase) 消化によって実現できます。このプロトコルは操作が簡単ででき、decellularization の高効率。TEM は、TSCC モデルの構築を可能にする静的または撹拌培養条件下で TSCC 細胞の良好な細胞を示した。自作バイオリアクターは細胞培養のための永続的な撹拌条件にも使われました。TEM を使用して再建された TSCC を示した特性と TSCC 病理臨床に似たプロパティ TSCC 研究の可能性を示唆しています。
Introduction
舌は嚥下、構音、味など、様々 な重要な機能です。したがって、舌機能障害では、患者の生活の質の1が大きな影響を与える。口腔内の最も一般的な悪性腫瘍は舌扁平上皮癌 (TSCC) アルコールを飲酒や喫煙タバコ2人で通常発生します。
近年では、ほとんど進展は、TSCC に関する基礎的研究で達成されています。効率的な体外研究の欠如は、遺跡の最大の問題の 1 つをモデル化します。したがって、細胞外マトリックス (ECM) は、潜在的な解決策になることが判明します。ECM は、高度に組織化されたマトリックス成分から成る複雑なネットワーク フレームは、ECM のような構造と組成を持つ足場材料なので癌研究主務。脱 ECM は、同じ起源の in vitro、ECM の最も重要な利点であることが判明したから細胞の完全にニッチを提供できます。
ECM は、洗剤や酵素を使用して decellularization を組織から削除されている細胞成分を保持ことができます。脱マトリックスのコラーゲン、フィブロネクチン、ラミニンを含む各種の ECM コンポーネントは、生存、増殖、および3細胞の分化を促進、培養細胞のネイティブの組織のような微小環境を提供します。また、移植の免疫原性は、ECM の細胞成分の有無と最低限のレベルに削減できます。
これまでのところ、脱 ECM の作製方法は、さまざまな組織、器官、心臓4,5,6、7、肝8,9,10 などで試されています。 ,11、肺12,13,14,15,16,17、および腎臓18,19,20します。 ただし、関連研究が見つかりません我々 の知識を最大限に舌で同様の作業をします。
本研究では脱舌の細胞外マトリックス (TEM) は一連の物理・化学・酵素治療により効率的にそして安くを作製しました。TEM は、TSCC 動作と開発のための適切なシミュレーションを示す TSCC体外、要約に使用されました。TEM では、TEM TSCC 研究3で大きな可能性があることを示す組織固有のニッチにセルをガイドする機能のほか、良い生体適合性。ここに示すプロトコルは、病因または TSCC の臨床治療研究の選択肢を提供します。
Protocol
Representative Results
Discussion
脱 ECM 作製の十分に確立されたプロトコル組織で細胞成分を除去しながらネイティブの ECM 成分を保つべきほぼ完全に21。現在報告されている decellularization プロトコル対流輸送によって細胞を除去する血管を介して血流を必要とする、にもかかわらず機械的攪拌ここで採用した、22の伝統的なシンプルで安価な方法として知られています。,<sup class="x…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、国家自然科学基金、中国の (31371390)、状態のハイテク開発プロジェクト (2014AA020702) のプログラムおよび広東省科学技術 (2016B030231001) のプログラムからの研究助成金のサポートを認めます。
Materials
| C57-BL/6J mice | Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center | ||
| Ethanol | Guangzhou Chemical Reagent Factory | HB15-GR-2.5L | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | A501218 | |
| Potassium chloride | Sangon Biotech | A100395 | |
| Dibasic Sodium Phosphate | Guangzhou Chemical Reagent Factory | BE14-GR-500G | |
| Potassium Phosphate Monobasic | Sangon Biotech | A501211 | |
| 1.5 mL EP tube | Axygen | MCT-150-A | |
| Ultra-low temperature freezer | Thermo Fisher Scientific | ||
| 3.5 cm cell culture dish | Thermo Fisher Scientific | 153066 | |
| 6 cm cell culture dish | Greiner | 628160 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | V900502 | |
| Calcium chloride | Sigma-Aldrich | 746495 | |
| Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 449164 | |
| DNase | Sigma-Aldrich | D5025 | |
| Magnesium sulphate | Sangon Biotech | A601988 | |
| Glucose | Sigma-Aldrich | 158968 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| Ampicillin | Sigma-Aldrich | A9393 | |
| Kanamycin | Sigma-Aldrich | PHR1487 | |
| Surgical suture | Shanghai Jinhuan | ||
| 250 mL wide-mouth bottle | SHUNIU | 1407 | |
| Magnetic stirrer | AS ONE | 1-4602-32 | |
| CO2 incubator | SHEL LAB | SCO5A | |
| 10 mL syringe | Hunan Pingan | ||
| 50 mL centrifuge tube | Greiner | 227270 | |
| Cal27 cell | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Tongue squamous cell carcinoma cell line | |
| U2OS cell | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Human osteosarcoma cell line | |
| DMEM/F12 | Sigma-Aldrich | D0547 | |
| Sodium pyruvate | Sigma-Aldrich | P5280 | |
| Hepes free acid | BBI | A600264 | |
| FBS | Hyclone | SH30084.03 | |
| 4 °C fridge | Haier | ||
| Water purifier | ELGA | ||
| Hemocytometer | BLAU | 717805 |
Referenzen
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