Voorbereiding van de Rat Brain Aggregate Cultures for Neuron en Glia Development Studies
Summary
Een protocollen voor een embryonale hersenen van de rat totale cultuur-systeem is beschreven. Multipotente voorlopercellen in de aggregaten kunnen ontwikkelen en differentiëren tot neuronen, astrocyten en oligodendrocyten.
Abstract
Een in vitro systeem dat recapituleert de ontwikkeling en differentiatie van voorlopers tot rijpe neuronen en glia in het centrale zenuwstelsel (CZS), zou een krachtig platform voor neurowetenschappers aan Axo-gliale interacties, eigenschappen en differentiatie van multipotente voorlopercellen, en de progressie van oligodendrogliale onderzoeken lijn cellen op cellulair en moleculair niveau. We beschrijven hier een CNS aggregaat cultuur systeem van embryonale rat forebrains, die kan worden gehandhaafd in een serum-vrij medium tot 3-4 weken en wordt in ons laboratorium als een model om neuron-glia interactie en CNS myelinisatie te bestuderen. Deze video clip zal tonen hoe te isoleren en deze CNS geaggregeerde culturen groeien van E16 rat hersenen. Bovendien, uit dezelfde hersenen dissectie, kan hoogverrijkt regelmatig los neuronale culturen gemakkelijk worden verkregen en gebruikt voor diverse studies over CNS neuronen of gebruikt worden voor co-culturen met andere cellen.
Protocol
Discussion
Vroege studies de vorming van synapsen en volwassen myeline in rotatie-gemedieerde vrij zwevende aggregaat culturen 1. De CNS totale cultuur beschreven systeem hier een combinatie van serum-vrij groei van multipotente progenitorcellen in drie dimensionale aggregaten met het gemak van de traditionele 2D-culturen om analyses van cel-ontwikkeling, migratie en differentiatie in vitro te vergemakkelijken. Het systeem kan worden aangepast en gebruikt voor neurale voorloper cel-onderzoek en voor on…
Acknowledgements
Dit onderzoek werd deels gefinancierd door start-up middelen uit Texas A & M University
Referencias
- Matthieu, J. M. Myelination in rat brain aggregating cell cultures. Neurociencias. 3, 565-56 (1978).
- Chen, Y. i. n. g. Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protocols. 2, 1044-10 (2007).
- Watkins, T. A., Emery, B., Mulinyawe, S., Barres, B. A. Distinct stages of myelination regulated by gamma-secretase and astrocytes in a rapidly myelinating CNS coculture system. Neuron. 60, 555-55 (2008).
- Svenningsen, A. F., Shan, W. e. i. -. S. o. n. g., Colman, D. a. v. i. d. R., Pedraza, L. i. l. i. a. n. a. Rapid method for culturing embryonic neuron-glial cell cocultures. Journal of Neuroscience Research. 72, 565-56 (2003).
