Préparation des cultures de cerveau de rat d'agrégation pour Neuron et études sur le développement Glia
Summary
Un des protocoles pour un système de cerveau de rat culture embryonnaire agrégat est décrite. Progéniteurs multipotentes dans les agrégats peuvent se développer et se différencier en neurones, astrocytes et des oligodendrocytes.
Abstract
Un système in vitro qui récapitule le développement et la différenciation des progéniteurs en neurones matures et des cellules gliales dans le système nerveux central (SNC) offrirait une plateforme puissante pour les neuroscientifiques pour enquêter sur les interactions axo-gliales, les propriétés et la différenciation des progéniteurs multipotentes, et la progression de oligodendrogliales cellules lignée au niveau cellulaire et moléculaire. Nous décrivons ici un système de culture de SNC agrégées de forebrains rats embryonnaires, qui peuvent être maintenues dans un milieu sans sérum à 3-4 semaines et est utilisé dans notre laboratoire comme un modèle pour étudier l'interaction neurone-glie et la myélinisation du SNC. Ce clip vidéo vous montrera comment isoler et cultiver ces cultures SNC global du cerveau de rat E16. Par ailleurs, à partir de la dissection du cerveau même, hautement enrichi régulièrement dissociée cultures neuronales peuvent être facilement obtenues et utilisées pour les différentes études sur les neurones du SNC ou utilisés pour des co-cultures avec d'autres cellules.
Protocol
Discussion
Les premières études a signalé la formation de synapses et de myéline mature dans la rotation des cultures libres à médiation globale flottant 1. Le système CNS culture globale décrite ici combine sans sérum de croissance des cellules progénitrices multipotentes en trois dimensions des agrégats avec la commodité de cultures traditionnelles en 2D pour faciliter les analyses du développement cellulaire, la migration et la différenciation in vitro. Le système peut être modifié et utilis…
Acknowledgements
Cette étude a été financée en partie par des fonds de démarrage de la Texas A & M University
Referencias
- Matthieu, J. M. Myelination in rat brain aggregating cell cultures. Neurociencias. 3, 565-56 (1978).
- Chen, Y. i. n. g. Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protocols. 2, 1044-10 (2007).
- Watkins, T. A., Emery, B., Mulinyawe, S., Barres, B. A. Distinct stages of myelination regulated by gamma-secretase and astrocytes in a rapidly myelinating CNS coculture system. Neuron. 60, 555-55 (2008).
- Svenningsen, A. F., Shan, W. e. i. -. S. o. n. g., Colman, D. a. v. i. d. R., Pedraza, L. i. l. i. a. n. a. Rapid method for culturing embryonic neuron-glial cell cocultures. Journal of Neuroscience Research. 72, 565-56 (2003).
