PCR תולעת אחת: שיטה לחלץ ולהגביר DNA גנומי
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: פריור, ח’, ואח ‘. צינור מהיר ומפואר ליצירת מוטנטים של נקודה גנומית ב- C. elegans באמצעות CRISPR/Cas9 ריבונוקלאופרוטאינים. ג’יי ויס אקספ. (2018).
וידאו זה מתאר טכניקה לסנן במהירות נמטודה אחת עבור סמן גנטי על ידי הקרנת PCR. בפרוטוקול לדוגמה, אנו מסננים לעריכת גנום מבוסס CRISPR.
Protocol
הפרוטוקול הבא הוא קטע מתוך Prior et al, צינור מהיר ומפואר ליצירת מוטנטים של נקודה גנומית ב- C. elegans באמצעות CRISPR /Cas9 ריבונוקלאופרוטאינים, J. Vis. Exp. (2018). PCR של תולעת יחידה וגנוטיפינג לאחר 1 – 2 ימים של הטלת ביצי…
Representative Results
איור 1. הנדסת CRISPR-Cas9 של לוקוס C. eleganssod-1. (A) איור סכמטי המתאר את מבנה האקסון-אינטרונים של הלוקוס סוד-1 ב- C. elegans. הסרגל האדום מציין את המיקום של G93 באקסון 3. ערכת זוג פריימר מצוין על ידי החצים…
Materials
| Nuclease-free water | Synthego Inc. | provided with the sgRNA kit EZ kit | |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| DNA Clean & Concentrator | Zymo Research | D4004 | |
| Zymoclean Gel DNA Recovery Kit | Zymo Research | D4002 | |
| Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix | New England Biolabs | M0494L | |
| Proteinase K | Sigma | P2308 | |
| MgCl2 | Sigma | M2393 | |
| NP-40 | Sigma | 74385 | |
| Tween-20 | Fisher Scientific | BP337-100 | |
| RNaseZap Decontamination Solution | Fisher Scientific | AM9780 |
Citar este artículo
Single Worm PCR: A Method to Extract and Amplify Genomic DNA. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20133, doi: (2023).