Este vídeo descreve uma técnica para testar rapidamente um único nematoide para um marcador genético por triagem PCR. No protocolo de exemplo, nós examinamos para edição de genoma baseada em CRISPR.
Protocol
O protocolo a seguir é um trecho de Prior et al, A Rapid and Facile Pipeline for Generating Genomic Point Mutants in C. elegans Using CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins, J. Vis. Exp. (2018). PCR e Genotipagem de Worm Único Após 1 – 2 dias de colocação de ovos, transfira o F1s para tampas individuais de tubo de tira PCR contendo 7 μL de Wor…
Representative Results
Figura 1. Engenharia CRISPR-Cas9 dolócus C. eleganssod-1. (A) Ilustração esquemática representando a estrutura exon-intron do lócus sod-1 em C. elegans. A barra vermelha denota a localização do G93 no exon 3. O conjunto de pares de primer é notado pelas setas vermelhas (F1-R1). (B) Alinhamento sequenci…