단일 웜 PCR: 유전체 DNA를 추출하고 증폭시키는 방법
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: 이전, H., 외. CRISPR/Cas9 리보뉴클레오단백질을 사용하여 C. elegans에서 게놈 포인트 돌연변이를 생성하기 위한 신속하고 촉진적인 파이프라인. J. 비스 익스펙. (2018).
이 비디오는 PCR 스크리닝에 의한 유전 마커를 위한 단일 선충을 빠르게 스크린하는 기술을 기술합니다. 예제 프로토콜에서 CRISPR 기반 게놈 편집을 검사합니다.
Protocol
다음 프로토콜은 CRISPR/Cas9 리보뉴클레오단백질, J. Vis. Exp를 사용하여 C. elegans에서 게놈 점 돌연변이를 생성하기 위한 빠른 및 촉진 파이프라인에서 발췌한 것입니다. (2018). 단일 웜 PCR 및 Genotyping 1 -2 일 계란 누워 후, 벌레 선택을 사용하여 벌레 리시스 버퍼의 7 μL을 ?…
Representative Results
그림 1. C.eleganssod-1 궤적의 CRISPR-Cas9 엔지니어링. (A) C. 예인단에서 소드-1 궤적의 엑손인트론 구조를 묘사한 회로도 일러스트. 빨간색 막대는 엑슨 3에서 G93의 위치를 나타냅니다. 프라이머 쌍 세트는 빨간색 화살표(F1-R1)로 표시됩니다. (B)…
Materials
| Nuclease-free water | Synthego Inc. | provided with the sgRNA kit EZ kit | |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| DNA Clean & Concentrator | Zymo Research | D4004 | |
| Zymoclean Gel DNA Recovery Kit | Zymo Research | D4002 | |
| Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix | New England Biolabs | M0494L | |
| Proteinase K | Sigma | P2308 | |
| MgCl2 | Sigma | M2393 | |
| NP-40 | Sigma | 74385 | |
| Tween-20 | Fisher Scientific | BP337-100 | |
| RNaseZap Decontamination Solution | Fisher Scientific | AM9780 |
Citar este artículo
Single Worm PCR: A Method to Extract and Amplify Genomic DNA. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20133, doi: (2023).