3D תרבות מרתף ממברנה Assay: Culturing תאים סרטניים על מטריצת חלבון קרום מרתף 3D ללמוד פלישת תאים

Abstract

מקור: צ’בטקוביץ’, ד’, ואח ‘. כימות של פולשנות התא סרטן השד באמצעות מודל תלת מימדי (3D). י. ויס אקספ (2014).

וידאו זה מספק מתודולוגיה מפורטת לגדל תאים סרטניים בשד במטריצת חלבון קרום מרתף 3D, מדגים את הפוטנציאל של תרבות 3D בהערכת פלישת תאים לסביבה שמסביב.

Protocol

1. תרבות תלת מימדית של תאי סרטן השד במטריצת קרום מרתף (טכניקת ההטבעה) טיפול מטריצת קרום מרתף Matrigel: להפשיר על קרח לילה ב 4 מעלות צלזיוס. מטריצת קרום מרתף היא נוזלית בטמפרטורה נמוכה אך מתגבשת בטמפרטורת החדר. שמור מטריצת קרום מרתף על קרח(איורים 1A-B). מכסים את המנה Confoca…

Representative Results

איור 1. תרבות תלת מימדית של תאי סרטן השד MDA-MB-231 במטריצת קרום מרתף (טכניקת ההטבעה). A-B) סכמטי של ההתקנה הניסיונית (מבוצע במכסה המנוע אדים). ג) הבאר של המנה עם תחתית הזכוכית מצופה 50 מיקרומטר של מטריצת קרום מרתף. D) Dish(es) ממוקם באינקובטור תרבות ה…

Materials

35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes	MatTek Corporation	P35G-1.0-14-C	Precooled before use
Bovine serum albumin (BSA)	BioShop	ALB003.100	Used at 3% for IF
1.5 ml tubes	VWR	CA10011-700	CA10011-700
100-mm culture dish BD353003	VWR	CABD353003	Sterile, disposable
15 ml Falcon tube	VWR	CA21008-918	Sterile, disposable
1 ml filtered tips	VWR	10011-350	Sterile, disposable
200 μl filtered tips	VWR	22234-016	Sterile, disposable
20 μl filtered tips	VWR	22234-008	Sterile, disposable
Fetal bovine serum (FBS)	Sigma	F1051	Used at 10% (v/v)
RPMI 1640 Medium with Glutamine	Life Technologies	11875-119	Used for culturing of MDA-MB-231 cells
MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136)	Lonza	CC-3150	Used for culturing of MCF10A cells
Olympus IX-81 microscope	Olympus		Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X)